Способ получения 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-( @ - карбоксипропионил)-дульцита или его динатриевой соли
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТ ИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
„„SU„„1225487 (50 4 С 07 D 303/16 С 07 В 407/12//
К 31/335
ГОСУДАРСТВЕННЬ1Й НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ
Н AATEHTV (21) 3437 277 /23-04 (62) 3350453/23-04 (22) 18.05.82 (23) 03.11.81 (31) 2649/80 (32) 04.11.80 (33) HU (46) 15.04.86. Бюл. № 14 (71) Хиноин Дьедьсер еш Ведьесети
Термекек Дьяра РТ (eU) (72) Илона Элекеш, Ласло Инштиториш, Кальман Медзихрадски, Ласло Етвеш, Хедвиг Медзихрадски, Каталин ди Глериа, Янош Шугар, Жужанна Шомфаи-Релле, Шандор Экхардт, Иван Хиди и Шандор Керпель-Фрониуш (HU) (53) 547.717.07(088.8) (56) Патент Великобритании № 1490649, кл. С 2 С, опублик. 1977.
Бюлер К., Пирсон Д. Органические синтезы. M.: Мир, 1973, ч. 2, с. 290-292. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1,2-5,6— ДИАНГИДРΠ— 3, 4-БИС вЂ” (f-КАРБОКСИПРОПИОНИЛ)-ДУЛЬЦИТА ИЛИ ЕГО ДИНАТРИЕВОЙ
СОЛИ, о т л и ч а ю «ц и и с я тем, что 1,2-5,6-диангидродульцит подвергают взаимодействию с ангидридом янтарной кислоты в сухом этилацетате в присутствии пиридина при 45 С, целевой продукт выделяют в свободном или в виде динатриевой соли.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ «g "-:- Ф,. / й®д@-„„.. /
1225487
1с (: JГ:(тепие Относится к cl(oc(ráу г, > -", . (,я н 1вых химических биоJIoгич.:сьп -::.-.тив ых соединений,, конкретно к сис собу г олучения новых произ водных ): iгидгодульцитa — 1,2-5,6-диаиг! Н1, -: —.", 4-бис- (p-êBpáoêcHïðor!HoíHJI)— дул(цпта или его динатриевой соли, обладающих слособностьюингибировать
-ра -;IJ!! Tr;(злокачественных Опухолей.
Цел-,—, изобретения — получение новь(х;роиэ;,o;IIIbrr ряда 1,2-5,6-диангипродульцит;., обладающих более высоким -:ерeïebiòrr÷ecêêì индексом при более ":якой токсичности.
П р им е р 1, 1946 г (10ммо,пь)
1,2--5 „6--диан идродульцита рас.творяют
1 в 20 ";;,. сухого этилацетата добавпяют к рис:твору 5 мл пиридина, а затем к смес -: малыми порциями добавляют
2,0 -. (20 ммоль) янтарного ангидрида при постоянном перемешивании. Смесь подогревают до 45 С и перемеи(ивают пр91 эоой Tеыпературе в течение еще
8 -;. Гас"!.âîpнтель дистиллируют в вакуу((О9 остаток отбирают в смеси этилапетата и воды, полученную смесь осто ожно подкисляют, охлаждася льдом, до р1- «--5. Органическую фазу отцеляют про (ь1вают водой, высушивают и выПолyL!BroT 2,5 о ."та к;.;„ который соответствуь.т коли-..cт 1ениому выходу, рассчитанному для моносукцинил-диангидродульцита.
I1(Jay«e!!roе сырое вещество подвергаю .(00: атографированию на колонке с с(ипи .Огелсм, используя смесь (1:1, o з ем/объем) метанола и этилацетата в канис.тве элюирующего агента. Фраки:-и,„ содержащие чистые продукты, перемеш .Нают, раствор выпаривают в вакууме.. Полученный твердый продукт .(Од« ргают перекристаллизации из с ((:(::, иэтилового эфира и петролейНОГс =-фИРа9 а ЗатЕМ ИЗ СМЕСИ МЕТаНО.ла ." диэтилового эфира. ПОлучают
1, с . i 92--5,6-циангидро"3,4-бисвЂ(I9-карооксипропионил) — дульцита.
Вь(числено, %: С 48,78; Н 5,73;
0 45. 49.
Н 0„;, (346, 29)
Наидеr<(o-. % С 48,35; H 5 92э, 0 46,60.
Зквивале::::тная масса, вычислено
173, найденс 180. II< c пек r p: 3350 c! I " (карбоксипь:.ая группа), 1235 см (эпокси), бел,ил-.— пые и гидроксипьные нопосы !Ie с биарус(еп(ы, Растг 019и;.(Ос Ti;, соединение корок(о растворяется в с!IHpte и т тра-.идрофуране и с fa6u pic T13npHMA R диэ тило вом эфи1эе и вод(..
Пример 2,. Пол, пение дин BTрий-1, 2-5, 6-диан гидро — 3, ч-бис — (8—
-карбоксипропионил) -дульцита 2Н 0., 246,29 г (1 моль) 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-(P- карбоксипропионил)—
--дульцита растворяют в 3360,3 мл
5%-ного (по весу) бикарбоиата натрия с пост Оя иным ле1)емея ива Кием при КОм натной температуре до тех пор, пока не прекратится образование двуокиси углерода. Полученный раствор отфильтровыва:от и лиофилизуют. Получают
426,29 г (1 моль/100%) динатрий-1,2-5,о-диангидро †",4-бис-(IJ-карбоксипропионил)--дульцит 2Н„О. В стабильном
2п негигроскоиичьом (при комнатной температуре) веществе установили число колец, которое составляет 99%.
1п". -c)!er(1э." 1 725 cM (сложный эфирный карбонил), 1680 см (кислот, 95 иый ка.рбонил), Характерная для кислотных гидроксилов полоса в 3500-2800 см "отсутствует.
Вычислено, %: С 39,447; Н 3,783.
С9 -I, О,, NB. 2H,0
Найдено, %;. С 399440; Н 3,780.
1! О)1ученньle соединения были подвергн: ть1 фармакологическим исследова.н ням.
Оценены тераг(евтические свойства
35 следующих соединений:
А = 1, 2-5,, 6-диан гидро-3, 4-диацеTIIJi)Jульцита (Дз. А С Д А Д) 9
В = 1,2 —.596-диангидро-3,4 — бисвЂ(P карбометоксипропионил) -дульцита (!IJ. Su Д А Д вЂ” диметиловый сложный
-эоя "р ) 9
1,2-596-диангидро-= 4-иис— ф-фенилпропионил)-дульцита;
С-2 = 1,2-5,6-диангидро-3,4-бисвЂ(Pr — карбоксипропионил)-дульцита (Д-ь S Д A )|,);
С-4 =. 1 9 5,6-диангидро-3-(P-карбоксипропионил)-4-ацетилдульцита;
С-. > = 1,,2 "596-диангидро-3-(1З--карбоксипропионил)-4-(13-карбометоксипропиоHил,-дульцита;
С--6 = 1,2--5,6-диангидро-3-(P- ка1эбоксипропионил) -4-(й-фенилпропионил) "цульцита.
Укаэанные соединсиия9 где А9 В H
С являются диспожными эфирами в
3.4-положенlr!r 1,2- 5 6- иангидро1225437 4 дульцита (Д А Д), не содержат никаких свободных карбоксильных групп.
Соединения С-2, С-4, С-5 и С-6 также являются дисложными эфирами в 3,4-положении Д А Д, но соединение С-2 содержит две, а соединения С-4, С-5 и С-6 одну гидроксильную группу.
Осуществлены следующие исследования: усвоение энзима; тест на токсичность; определение дозовой зависимости ингибирования роста опухоли, гематоксичности и летальных эффектов для близких соединений, полученной отдельно на одинаковых моделях; терапевтические индексы, полученные на различных твердых, способ- ных к трансплантации опухолях гры- зунов; ингибирование роста опухоли в твердой системе Саркома l80, влияние отдельной и повторяемых инъекций; мутагенность.
Усвоение энзима:
Соединение В пытались превратить в соединение С-2 с помощью энзимного гидролиза при следующих условиях: время. 0,5: 1,0; 2,0; 4,0; 6,0; 24 0 ч; температура 37 С; буфер: 1/15 М фосфата; энзим: химотрипсин, трипсин, ацилаза, ацилаза jl
Согласно оценке при указанных условиях все сложно эфирные соединения В расщепляются с одинаковой скоростью. Следовательно, метиловый сложный эфир не может быть селективно разложен и трансформирован в кислотную форму.
1
СН вЂ” Π—, СО
-(СН) -С-ОСН
1 з () О близких к С-2, полученная отдельно на одинаковых моделях: метод: самцам крысы l istor лекарства были введены через 24 ч после заражения 2 х 10 клетками 1Уа11<ег, Эффективность определяли па дозам, вызывающим 50Е-ное ингибирование опухоли при взвешивании на десятый день. Дозы, приводящие к 502-ному уменьшению гранулоцитов, оцененных на четвертый день, служили в качестве основ для сравнения гематоксичности.
Отношение минимальной летальной дозы,(!Д1 ) к минимальнои эффектив дозе (МВЛ = E i о ) Рассматривали как терапевтический индекс.
Согласно данным табл. 2 соединение
С-2 активно против опухоли в такой же дозовой области, как производные близких по структуре соединений А, В и С (1.Д 13 17 мкмоль/кг), в то время, как соединение С-2 менее токсично (более чем в два раза), чем все другие вещества, указанные здесь.
Следовательно, терапевтический индекс
С-2 в два раза .более предпочтителен, чем индекс любого другого члена группы.
Терапевтические индексы, получен30 ные на различных тверлых транспланб тируемых опухолях грызунов, даны в табл. 3.
Ингибирование роста опухоли в твердой системе:
Саркома 180: влияние отдельной и повторяемых инъекций.
Метод. небольшие образцы твердой
Саркомы 180 были инокулированы на кожу самца мыши Sviss. Интраперитональное примене ие лекарства к груп40 пе из шести животных начали на следующий день, на 11-й день опухоли были удалены для.оценки.
Данные отдельной и повторяемых инъекций на ингибирование роста опу45 холи в твердой системе Саркома 180 приведены в табл. 4.
Острая токсичность.
В табл. 1 приведены данные острой токсичности. (Найдено, что соединение С-2 наименее токсично из всех близких по структуре соединений как для мьппи, так и для крыс.
Дозовая зависимость ингибирования. роста опухоли, гематоксичности и летальных эффектов для соединений, 50
Отсутствие мутагенности соединения С-2 в анализе Салмонелла/микросома:
Все испытуемые производные алкилирy÷îùèõ сахарных спиртов за исключением С-2 были мутагенны в штаммах
TA 1535 и TA 100 по результатам анализа Салмонелла/микросома. Данные относительно мутагенных и токсичных эффектов 1,6-дибром-дульцита, 1,2-5,6 — диангидродульцита, 1-бром-3,51225487
30
;-.-!г:;,родуль!;,>!тя и 1,2-эпокси-3,6-янг"цгодупьцита известны.
Даже с. использованием микросомных, энз!с.!ол, полученных не только из пе«!. ни крысы, но также из легкого крысы, -„о !ки >!ы!>>и или печени хомяка, соед.«!i-;L-.!Hå С-7 не проявляет мутаген,:ос«л .< «штаммям TA 1535 и ТА 100.
Сз:.д!;>!еь«ие С-2 также не проявляет
i ;у"! а ее,; -«ости к штаммам ТА 1357, ТЛ 1538 !« ТЛ 98 в присутствии или ог".утс"в,;:е смеси S-9, полученной из ! с вь! !«! o ! -;. гягенность соединений А и В
r!.-«å!>,. явлена в табл. 5 и 6.
С,,; ..:снс эксперименту соединение
0-2 кя:=.ялос немуТагенным. Это
«кя>::. т.-!ь>уетс» тем, что концентрация соо>-;;! епил С-2 вплоть до 10 микроi р«"и::/;.;...: ти;i;.а не уменьшает числа бак- с >:. я.!=,:-"ьгк кле гок, произрастающих о 4я, I!«è0 среде ° .,:,; ако соединение В вызывает
IÎ0- .-"-крягное увеличение числа бактор:-,зль>!ь>х клеток, произрастающих в
«орi,.:., oной среде.
С т;:;>-ой стороны, соединение  —.«ь!зь „. с««: i0-! 4-кратное увеличение
--:еве-р" нитных пластинок, в то
:;рг .;:, как высокая концентрация в
1, 10 >! с!иг!>я>!м/пластина является!,;!.i:ëñío сравнению токсикологичесфармакологических данных, мута>ел: о::ти . -.,eçóëüòàòñâ экспериментов
;о у=:,-о "..и>о э.:-:зимов свободные карбоксил .нь!е гру.вЂ,:пы в соединениях С-2., ! -4, С-5, С-6 проявляют такие биоло::и"-;с-с!с,;е свойства молекул, которыми
« е,,Úà.!,",а!от молекулы, Не содержащие с зоб одньл карбоксильных групп.
Характеристические данные антиопухолевой активности соединений А, В и С„ оцененные на трансплантированньгх опухолях, являются существенно
>!енeе предпочтительными по сравнению с характеристическими данными соедипений С-2, С-4, С-5 и С-6, содержащих ! в >бодную карбоксильную группу.
?. Терапевтические индексы соединен..«>! В, содержащего две карбометокси--;:.упгп., являются также менее предло=!тительными по сравнению с такими же « войст«3AM!! соединении С-2, С-4, С.-5;:. 0-6. Из этого можно предположит-., то кярбометокси-пропионильняя
"ру.« †:а,. з:мещающая 1,2-5,6-диангидрод,-; - !. г (, A Д) в 3 и/или 4-м положениях„не вызывает у>!е.>иче«!>!!я тс ряпевтичеcKQA BKTHBHAcTH кяK «: B06oIlн!«!«". карбоксильные группы, замещающие
Д А Д в таких же положениях.
3. Отсутствие мутагенности в случае соединения С-2, содержащего свободные карбоксильные группы (в противоположность другим мутагенным производным бифункционального гексита, особенно соединения В, содержа!цего две кярбометокси-группы), показывает, что присутствие карбоксильной группы вносит существенные изменения в биологическую эффективность.
Мутагенность соединений А и В представлена в табл. 6.
4. Энзимная система живого органа не способна к трансформации соединения В в соединение 0-2, содержащее свободную карбоксильную группу.
Следовательно, соединение Б не может рассматриваться, как предшественник соединения 0-2. Это иллюстрируется не только существенным биологическим различием, но также включенными здесь результатами экспериментов по усвоению энзимов.
5. Терапевтическая активность соединения А, содержащего две ацетильные группы, существенно ниже терапевтической активности соединения
С-4, содержащего не только ацетиль" ную, но также и карбоксильную группу.
6. Соединение С, содержащее две фенилпропионильные группы, обладает менее предпочтительной терапевтической активностью, чем соединение С-6, имеющее одну Р -фенилпропионильную и одну свободную карбоксильную группы, 7. Предпочтительный терапевтический индекс соединений С-2, С-4, С-5 и С-6 проявляется в результате существенного уменьшения токсичности, которая связана с наличием свободных карбоксильных групп. Терапевтический индекс соединений С-2, С-4, С-5 и
С-6 в 8-15 раз лучше, чем терапевтический индекс соединений А, В и С, что является неожиданным и непрогнозируемым для соединений подобной структуры. Небольшое изменение химической структуры принесло существенное изменение характеристик фармакологических свойств. Такое улучшение терапевтического индекса, осуществленное изменением одной группы в молекуле„ является неожиданным, непрогноз«ируемьж и неочевидным.
1225487
Таблица 1
Чродоолжение табл. 1
Лекарство
LD для 1.Р для самца мыши крысы
Swis s" ЬЯзаогС-5
235
126
С-6
210
146
25,5
150
660
С-2
190
С-4
180
105
Таблица 2!
Индексы безопасности
ЕД ., лимф/ЕД, W
Токсич ИнгибиЛекарство
Терапевтический индекс
LDÄ, W/ЕЛ„
Белые рование опухоли, импланность у мг/кг гранулоциты крови
ЕД о гран, мг/кг тирован ной по
Walker
ЕЛ,о ° мг/кг
5,6
25,5
17
52
45
3,6
20
110
6,4
35
8,8
50
8,2
25
8,5
Терапевтический индекс, указанный в Декларации, относительно соединений А и С-2.
С-2 190
С-4 105
С-5 126
С-б 146
7 7,4
12,5 6,4
5,0 38
5,5 19
5,7 22
LD„ определяли на нормальных самцах мыши Swiss весом 27-31 r.
После одной инъекции группа иэ шести мышей при одной дозе была прослежена в течение 21 дня. LB„ îïðåäåëÿëè на крысах WistorWalker, больных раком. Инъекции лекарства давали через 24 ч после трансплантации опухоли группе из шести крыс и вели наблюдения в течение 10 дней.
Белые лимфо— циты крови °
ЕД,, лимф, MI /к г
1225487
Таб лица 3
Импланх14:интр .
ТЛ /ЕД
50 БО
180х8 интр.
МТД/ЕД, хТ интраперитонально
/ д
Лекарство
Терапевтический
Меланома х 14 интр.
50 индекс
БО
7 Ф (13) 4,3 2„3-(3,4)
3,!
8,0
5,0
С-4
3,8
4,0
4,1
16,3
Величины в скобках являются опубликованными, в то время оНН были модифицированы за счет повторения экспериментов.
" Терапевтические индексы также опубликованы.
Т а б л и ц а 4 и, /ЕД,. МТД/ЕД
Лекарст- Инъек- ЕД„. „МТД, во ция мг/кг мг/кг
8 „7
2,4
6,7
5,4
400
С-2
16,4
4,3! 0
3,5
8,0
6 5
64
4,8
2,5
15,2
С-5
16,3
С-б тирование по
Walker щ m/Eä ы
10,5 50
10 25
15 60
12,9 53
3,5 1,1
1,9
4,8 5,0
2,5 4,1
f o
Табпина 5
TA 1535
ТА 100
-S-9смесь
+S 9-смесь рсp с 1 смесь
+. з-9 -с чесь
"Нышь Хочяк
Крыса
Крыса 4 япь
Хомяк печень" лег- почка печень печсн и< чень . 1i Гкл)е почvа печаfH
I неч< яь кое
277 17(15) 48 33 25 13 160 158
278 252 155
233
32 12(12) 41 27 28 19 171 137 249 213 140
1О
185
28 13(17) 33 27 28 15 190 133 30 19(14) Э9 35 25 22 . 154 142
31 Э6(28) 42 51 32 43 180 171
100
213
1000
172
255
10000
Непрерывно (спонтанно) 26 19(16) 44 36 24 17 149 150 250 251 165 214
Данные в скобках получены после прелнарительной чнкубацпп (Я-смесь бактерии + С-2 ва исключением верхней части агара) в течение 30 мин при 37 С.
Таблица 6
Ревертаит/пластинка ТА 100
КонцентраЛекарство
Гис тидин ТА 1 53 5
-Смесь S-9 +Смесь S-9
Смесь S-9 +Смесь S-9
226
211
19
185
382
100
1011
788
227
1000
199
1253
10000
1232
Спонтанно 25
318
217
176
240
193
100
219
1000
10000
31 токсично
Спонтанно 17
Заказ 1971/62 Тираж 379 Подписное
ВНИИПИ
Производств.-полиграф. пред-е, r. Ужгород, уп. Проектная, С-2 микро" грамм/плас
THHKB ция микрограмм/пластинка
256 222 150
284 190 131
265 273 146
![Способ получения 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-( @ - карбоксипропионил)-дульцита или его динатриевой соли](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/622/6225931-s.jpg)
![Способ получения 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-( @ - карбоксипропионил)-дульцита или его динатриевой соли](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/622/6225932-s.jpg)
![Способ получения 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-( @ - карбоксипропионил)-дульцита или его динатриевой соли](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/622/6225933-s.jpg)
![Способ получения 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-( @ - карбоксипропионил)-дульцита или его динатриевой соли](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/622/6225934-s.jpg)
![Способ получения 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-( @ - карбоксипропионил)-дульцита или его динатриевой соли](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/622/6225935-s.jpg)
![Способ получения 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-( @ - карбоксипропионил)-дульцита или его динатриевой соли](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/622/6225936-s.jpg)
![Способ получения 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-( @ - карбоксипропионил)-дульцита или его динатриевой соли](https://img.poleznayamodel.ru/img_pat/622/6225937-s.jpg)