Способ определения мутагенной активности химических соединений на дрожжах sасснаrомuсеs cerevisiae

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

144 А (51) 4 С 12 N 15/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

» д:.

>;

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

Н AST0PCH0MY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

С21) 3673831/28-13 (22) 19.12.83 (46) 29.02.88. Бюл. 11 8

:(71) ЛГУ им. А.А. Жданова и Научноисследовательский институт по биологическим испытаниям химических соединений (72) С.Г. Инге-Вечтомов, M.Â. Репневская и Т.С. Карпова (53) 616.07 (088.8) (56) Mutation research, v. 31, р. 71-86, 1975. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИУТАГЕННОИ АКТИВНОСТИ ХИМИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИИ НА ДРОЖЖАХ SACCHARONYCES

CEREVISIAL включающий выращивание культуры дрожжей, ее суспендирование, посев на селективную среду, введение в центр газона тестируемого химического соединения с последующей оценкой мутагенной активности по появлению колец протогро4 ных колоний в центре газонов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве культуры используют смесь суспензий двух штаммов дрож:жей Ы. -типа спаривания, имеющих комплементарные пищевые потребности,.

8 взятых в концентрации. 10 -10 кл/мл, при соотношении 1:1.

1207144 в центре чашки..

ЗО

Подписное

Тираж 520

ВНИИПИ Заказ 775

Произв. -полигр. пр-тие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к генетике микроорганизмов, а также к области, связанной с защитой окружающей среды от генетически опасных химических соединений, и может быть использовано в генетической токсилогии.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Пример. Проводили тестирование химических соединений на мутагениую активность на двух штаммах дрожжей Saccharomyces cerevisial 20А-П3912, имеющего генотип

ot. his 4 leu 2"! 1уз 2-А38 his 7-1 met !5

А1, и 38А-П3663, имеющего генотип 1eu 2-2 thr 4 lys 2-A12 ade 1-6 ade

2-163.ÑMåíà типа спаривания а о может происходить в результате потери

Ш хромосомы гаплоидной клетки, деле- 20 ции в правом плече Ш хромосомы, точковых мутаций или микроделеций в локусе типа спаривания. Поэтому родительские штаммы маркированы таким образом, чтобы по пищевым 25 потребностям гибридов можно было установить события, в результате которых произошла смена типа спаривания одного из родителей. Регистрируется три основных класса таких событий.:

1) потеря Ш хромосомы у клеток штампа 20А-П3912, в этом случае у гибридов наблюдается потребность в треонине и лейцине и отсутствие гетероаллельной рекомбинации по локусу leu 2; потеря Ш хромосмы у клеток пп амма 38А-53663 при этом у гибридов наблюдается потребность в гистидине и лейцине и отсутствие 40 гетероаллельной рекомбинации по

leu 2;

2) делеция в правом плече Ш хромосомы у клеток штамма 20А-П3912, в этом случае у гибридов наблюдается потребность в треонине и лейцине, но в отличие от первого класса гибриды характеризуются наличием гетероаллельной рекомбинации по leu 2;

3) точковая мутация или микроде леция в лакусе типа спаривания МАТ у клеток штамма 20А-П3912 или штамма 38А-П3663, при этом у гибридов наблюдается потребность в лейцине и наличие гетероаллельной рекомбинации по leu 2, а также прототрофность по гистидину и треонину.

Культуры штаммов 20А-П3912 и

38А-П3663 выращивали на твердой полкой среде, затем суспендировали в дистиллированной воде, суспензии т двух штаммов, содержащие 10—

10 кл/мл, смешивали в равной пров порции и высевали на твердую полную среду по 0,2 мл газоном. В центр газона помещали фильтр с определенным количеством текстируемого химического соединения и инкубировали 22-24 и при 30 С, затем перепечатывали на селективную среду, содержащую гистидин, лейцин, треонин и лизин, для отбора гибридов. На

3-4 сутки учитывали появление колец прототрофных колоний (гибридов) Было проанализировано действие четырех химических соединений, которые являются известными мутагенами. С каждым из них поставлено по два повторных опыта. Среднее число гибридов на чашку при обработке любым из четырех мутагенов значительно возрастает по сравнению с контролем (дистиллированная вода).

Распределение гибридов по классам показывает, что изменение типа спаривания ec — > у клеток одного из родительских штаммов происходит различным образом под действием разных мутагенов. Диэпоксиоктан преимущественно вызывает потерю Ш хромосомы или делецию в ее правом плече. Этилметансульфонат не увеличивает числа гибридов с потерей хромосом или делециями, хотя общее число гибридов на чашку возрастает в 150-200 раз по сравнению с контролем, так как он индуцирует точковые мутации в локусе типа спаривания MAT. Аналогично этилметансульфонату действует Д -пропилактон. Нитрозогуанидин вызывает потерю Ш хромосомы и делеции в ее правом плече, а также индуцирует точковые мутации или микроделеции в локусе типа спаривания.