Способ определения фосфолипидов в водных дисперсиях и растворах

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФОЛИПИДОВ В ВОДНЫХ ДИСПЕРСИЯХ И РАСТВОРАХ путем окрашивания проб молибденовым реактивом, обработки хлороформом и колориметрирования гидрофобной фазы, отличающийся тем, что, с целью определения суммарного содержания фосфолипидов и повьшения чувствительности способа, в анализи-руемую пробу добавляют воду и хлороформ в объемном соотношении

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) (51)4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСН0МУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3627782/28-13 (22) 26.07.83 (46) 30.04.88 ° Бюл. 9 16 (71) Харьковский государственный университет им. А.M..Ãoðüêîãî и Харьковский филиал Киевского научно-иследовательского института кардиологии им. акад. Н,Д.Стражеско (72) В.В.Лемешко и В.М. Бровкович (53) 616. 153. 915 (088. 8) (56) Hallen Rakesh. Mohan. J. Biochem

and Biophys. Meth, 1980, Ф 2, р.р. 251-255. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФОЛИПИДОВ В ВОДНЫХ ДИСПЕРСИЯХ И РАСТВОРАХ путем окрашивания проб молибденовым реактивом, обработки хлороформом и колориметрирования гидрофобной фазы, отличающийся тем, что, с целью определения суммарного содержания фосфолипидов и повышения чувствительности способа, в анализируемую пробу добавляют воду и хлороформ в объемном соотношении (2-3):

:(3-4), а окрашивание проводят при температуре 0-50 С и соотношении моо либденового реактива к смеси 1 .(11,5) .

1189223 нута, если после скрашивания пробы молибденовым реактивом дополнительная порция хлороформа не добавляется, фотометрирование при этом ведут в микрокюветах. B этом случае зависимость величины экстинкции от содержания фосфолипидов в пробе описыва-. ется уравнением

Е = 8,7 ° х 1 °

E= 3,2х 1, где E — - единицы оптической плотности, х — мкмоль липидного фосфора в пробе, 1 — длина оптического пути, см.

При Е = 0,50 и 1 = 1 см х = 0,15.

Максимальная чувствительность заявляемого способа может быть достигТехред M Ходанич Корректор Г.Решетник

Редактор Н.Сильнягина

Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, iK-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 3378

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к биохимии, а именно к способам количественного определения фосфолипидов, и может найти применение в клинической,экспериментальной и технической биохи5 мии.

Цель изобретения — определения суммарного содержания фосфолипидов и повышение чувствительности способа.10

П р и .и е р 1. Определение содержания фосфолипидов в водной дисперсии.

Готовят смесь 1 мл водной дисперсии фосфолипида, 0,6 мл метанола, 0,6 мл хлороформа. В смесь добавляют 1,8 мл молибденового реактива и перемешивают. Через 3 мин добавляют

1 мл хлороформа, вновь перемешивают и центрифугируют 5 мин при

3000 об./мин. Колориметрируют гидрофобную фазу при 760 нм на спектрофотометре. Процесс ведут при комнатной температуре (22 С).

Зависимость величины экстинкции от содержания липидного фосфора в пробе при конечном объеме хлороформной фазы 1,6 мл описывается уравнением (независимо от типа фосфолипида — лецитина. азалектина кардиоли 30 пина, экстракта фосфолипидов из митохондрий или микросом печени крыс) Линейная зависимость величины экстинкции от содержания липидного фосфора в пробе соблюдается, начиная менее чем с 0,01 мкмоль. Практически способ применим для измерения содержания фосфолипидов в пробе порядка

0,01 мкмоль и более.

Пример 2. Определение содержания лецитина в хлороформ-метанольном растворе.

Готовят смесь 0,3 мл воды, 0,4 мл хлороформ-метанольного (1: 1) раствора лецитина. Добавляют 0,6 мл мо.либденового реактива и перемешивают.

Через 3 мин добавляют 1,4 мл хлороформа, вновь перемешивают, Центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин. Колориметрируют гидрофобную фазу при

760 нм на спектрофотометре.

Исходная смесь может содержать метанол в количестве до 0,2 мл, что позволяет использовать в качестве пробы хлороформметанольные экстракты фосфолипидов. Кроме того, метанол способствует лучшей солюбилизации биомембран, и в некоторых случаях

его наличие может быть необходимым для максимального прокрашивания их фосфолипидов.