Способ получения этанола

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭТАНОЛА, предусматривакщий микробиологическое превращение сахара в этаноле путем контактирования иммобилизованных в геле-носителе этанолпродуцирующих дрожжей или анаэробных микроорганизмов рода Saccharomyces или Zymomonas с питательной средой, содержащей / Т / ферментативный сахар, и отделение среды, содержащей этанол, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса и повышения концентрации этанола в среде, в процессе микробиологического превращения сахара в этанол поддерживают рост дрожжей или анаэробных микроорганизмов в геле-носителе путем дополнительной подачи питательной среды, содержащей 100-400 мг/мл сахара, до концентрации сахара в среде 50100 мг/мл. 2. Способ ПОП.1, отличакгщ и и с я тем, что дополнительную подачу питательной среды осуществляют после снижения концентрации сахара W в питательной среде, подвергаемой контактированию с дрожжами или анаэробными микроорганизмами, до 210 мг/мл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU „;, 1181555 (бр+ С 12 Р 7/06

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И ПАТЕНТУ (21) 2934908/28-13 (22) 12.06.80 (31) 74972/79, 125966/79 (32) 13.06.79 (33) JP (46) 23.09.85. Бюл. - 35 (72) Ичиро Чибата, Дзедзи Като и Г1ицуру Вада (JP) (71) Танабе Сейяку Ко, ЛТД (JP) (53) 663.52(088.8) (56) Заявка Франции Р 2320349, кл. С 12 С 11/14, опублик, 1977. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 3TAHOJIA, предусматривающий микробиологическое превращение сахара в этаноле путем контактирования иммобилизованных в геле-носителе этанолпродуцирующих дрожжей или анаэробных микроорганизМ0В рода Saccharomyces или Zymomonas с питательной средой, содержащей ферментативный сахар, и отделение среды, содержащей этанол, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью ускорения процесса и повышения концентрации этанола в среде, в процессе микробиологического превращения сахара в этанол подцерживают рост дрожжей или анаэробных микроорганизмов в геле-носителе путем дополнительной подачи питательной среды, содержащей 100-400 мг/мл сахара, до концентрации сахара в среде 50100 мг/мл.

2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что дополнительную подачу питательной среды осуществляют Я после снижения концентрации сахара в питательной среде, подвергаемой контактированию с дрожжами или анаэробными микроорганизмами, до 210 мг/мл.

555 2 зом: Небольшое количество микробных клеток смешивают с раствором гелевого основного материала и полученную в результате смесь >келатинируют в табЛюбой из упомянутых типов дро>юкеи или анаэробных микроорганизмов, иммо-SS билизованный в геле, можно использовать, причем иммобилизацию Микроорганизмов осуществляют следующим обра1 1181

Изобретение относится к спиртовой промышленности, в частности к способам получения этанола.

Целью изобретения является ускорение процесса и повышение концентрации этанола в среде.

Способ осуществляется следующим образом.

Подвергают микробиологическому превращению сахар в этанол путем кон-1ð тактирования иммобилизованных в геле-носителе этанолпродуцирующих дрожжей или анаэробных микроорганизмов рода Saccharomyces или Zymomonas c питательной средой, содержащей ферментируемый сахар в концентрации

50-100 мг/мл и другие питательные вещества, необходимые дпя роста микроорганизмов в геле. После снижения концентрации сахара в питательной среде до 2-10 мг/мл осуществляют дополнительную подачу питательной среды, содержащей 100-400 мг/л сахара, до концентрации сахара в среде 50100 мг/мл, поддерживая этим самым в 25 процессе микробного логического пре-, вращения сахара в этанол рост дрожжей или анаэробных микроорганизмов.

Процесс осуществляют периодическим о или непрерывным способом при 15-45 С Зр до получения этанола в среде концентрацией не менее 75-100 мг/л, затем отделяют среду, содержащую этанол, с последующим его отделением. Для осуществления способа используют дрожжи

35 или анаэробные микроорганизмы, обладающие активностью, направленной на синтез этанола, например пивные дрожжи Бассйсегеч>.з1ае I FO 2018 и Sacch

viarum IFO 1167; дрожжи,использующиеся для получения вина,Sacchcerevisiae

ИО 0216, Sacch cerevisiae IFO 02339

Sacch cerevisiae АТСС 4111 и Sacch

cerevisiae АТСС 4124, дрожжи для получения саке Sacch sake АТСС 26422; винные дрожжи Sacch cerevisiae IFO

1661, Sacch cerevisiae АТСС 4098 и

Sacch cerevisiae IFO АТСС 4921, Sacch carlsbergensis OUT 7013, Sacch

pasterianus OVT 7122, Sacch fermentari IFO 0422, Zymomonas mobilis IFO

13756, Zymomonas omaегоbea АТСС 29501 и т.п. летки или кусочки пленки в соответствии с известными способами желатинирования, например смесь по каплям добавляют в раствор желатинирующего агента с целью получения таблеток или кусочков пленки толщиной или диаметром 2 мм — 5 см, содержащих

0,01 — 10 колоний микробных клеток на

100 r ("влажный" вес) гелей. Далее, гели инкубируются в питательной среде для выращивания культуры, пригодной для роста микроорганизмов, при

О 15-45 С с целью получения искомых иммобилизованных микроорганизмов, которые образуют плотный слой микробных клеток внутри поверхностного слоя несущего геля. В качестве гелевого основного материала используют полисахариды, например, сульфагированный полисахарид, алгинат натрия, сукцинат целлюлозы. Любой из сульфатированных полисахаридов, который содержит не менее 107 в.в., в пред1почтительном варианте — 12-622 в.в сульфатных групп (-SO Н) в своей молекуле, к сульфатированным полисахаридам относятся каррагинан, фурцелларан и сульфат целлюлозы. Каррагинан содержит примерно 20-30Х в.в. сульфатных групп (SO Í) в молекуле, а фурцелларан — 12- 167 в.в. сульфатных групп в своей молекуле. Пригоден сульфат целлюлозы, содержащий 12627 в.в. сульфатных групп в молекуле.

Приготавливают питательную среду в результате перемешивания в воде источника азота, например, экстракта дрожжей, насыщенного .кукурузного ликера, пептона или т.п. и одного или нескольких питательных веществ, необходимых для роста микроорганизмов.

Эти питательные вещества выбирают из витаминов: тиамин, биотин, пантотеновая кислота, инозитол и r.ï., минеральных веществ: фосфаты, соли магния, соли кальция, соли натрия, соли калия и т.п., солей аммония: хлорид аммония, или их смесей. Количест-. во этих питательных веществ, которое необходимо добавить, следующее, 7 в.в.: источник азота 0,05-1,0, минеральные вещества 0,0001-0,1, аммоний

0,01-1,0, кроме того, в питательную среду можно добавить следы витаминов °

Затем в приготовленную таким образом

1181 питательную среду добавляют ферментируемый сахар: глюкоза, фруктоза, сахароза, мальтоза и т.п.

Меласса содержит как ферментируемый сахар, так и другие питательные вещества, необходимые для роста микроорганизма. В связи с этим водный раствор мелассы можно испольэовать как среду для выращивания культуры.

При реализации предлагаемого изоб- 1Î ретения н.ъ принципе периодического действия иммобилизованные микроорганизмы сначала контактируют со средой для выращивания культуры при перемешивании с целью превращения ферменти- 15 руемого сахара в среде в этанол.Когда концентрация сахара снижается до величины, не превышающей 207. от начальной концентрации, в предпочтительном варианте — не превышающей 2О

10 мг/мл, в систему реакции превращения добавляют дополнительное .количество свежей среды для выращивания культуры, содержащей сахар. Вновь добавленный сахар также превращается 25 в этанол и концентрация его в среде снова снижается..Добавление свежей среды для выращивания культуры, со" держащей сахар, можно повторять через некоторые промежутки времени до тех пор, пока будет производиться высокая концентрация этанола, например 100-200 мг/мл. Дополнительно количество свежей среды для выращивания культуры, которую добавляют в систему реакции превращения, должно содержать ферментируемый сахар в относительно высоких концентрациях, не менее 250 мг/мл, в предпочтительном варианте — вместе с питательными веществами, отличными от ферментируемого сахара, необходимыми для роста иммобилизованных микроорганизмов; каждый раз, когда добавляют дополнительное количество свежего питательного бульона, концентрация сахара в

45 свежей питательной среде для выращивания может периодически увеличиваться до 400 мг/мл.

Когда в качестве реакционного оборудования используется обращенная колонна конической формы, реакция превращения ферментируемого сахара в этанол может осуществляться с больШей эффективностью, поскольку образующаяся в реакции газообразная двуокись углерода может удаляться с большей эф" фективностью. При использовании цилиндрической колонны, снабженной цир- куляционной трубой, порция среды, прошедшая через колонну, циркулирует .через циркуляционную трубу ко дну колонны. В этом варианте концентрация сахара в дополнительном количестве свежей питательной среды для выращивания культуры, которая должна непре" рывно подаваться через входную трубу ко дну колонны, должна поддерживаться повышенной, например до 250400 мг/мл, для устранения снижения концентрации сахара, вызванного разбавлением циркулирующей порцией бульона. Кроме того, концентрация сахара в среде для выращивания культуры, которая непрерывно загружается в коПри реализации предлагаемого спо- 50 соба на принципе непрерывного дейст- вия используется колоннообразное реакционное оборудование, упакованное иммобилизованными микроорганизмами.

Цилиндрическая колонна, обращенная 55 колонна конической формы, колонна, снабженная циркуляционной трубой, или любая серия, или комбинация на их ос555 4 нове могут быть использованы в качест-. ве колоннообразного реакционного оборудования. В случае использования в качестве реакционного оборудования цилиндрической колонны среду для выращивания культуры, содержащую в предпочтительном варианте 50-100 мг/мл ферментируемого сахара вместе с питательными веществами, отличными от ферментируемого сахара, необходимыми для роста микроорганизмов, подают непрерывно через один из концов колонны с целью превращения сахара в этанол, а среда, содержащая полученный таким образом этанол, вытекает из колонны через другой конец. Скорость загрузки среды.для выращивания культуры регулируется таким образом, чтобы концентрация сахара в потоке, покидающем колонну, не превышала 207 его первоначальной концентрации, в предпочтительном варианте — не более

10 мг/мл. Затем в колонну непрерывно подают дополнительное ко. ичество свежей питательной среды для выращивания культуры, содержащей не менее

200 мг/мл сахара, скорость загрузки среды для выращивания культуры регулируется так, чтобы концентрация са"

1 ,хара в вытекающем потоке составляла не более 207 от его первоначальной концентрации, т.е. не более 10 мг/мп.

1181555 лонну, может постепенно увеличиваться до 250-400 мг/мл с течением времени. При реализации предлагаемого способа иммобилизованные микроорганизмы

5 сохраняют исключительно высокую продуктивность, направленную на синтез этанола, в течение длительного промежутка времени, при этом этанол вырабатывается с высокой концентрацией, 10 например, 100-200 мг/мл. Кроме того, можно использовать целую серию колонн в соответствии с непрерывным принципом действия.

Например, непрерывный способ осуществляется с использованием серии цилиндрических колонн и подачей свежей питательной среды для выращивания культуры в первую колонну с такой скоростью подачи, чтобы концентрация сахара в вытекающей жидкости из первой колонны снижалась до величины, не превышающей 20% его первоначальной концентрации, в предпочтительном варианте — до величины, не превышающей

10 мг/мл, затем загружают дополнительное количество свежей питательной среды для выращивания культуры, содержащей не более 250 мг/мл сахара, во вторую колонну вместе с жидкостью, вытекающей из первой колонны, и т.д., повторяя аналогичную процедуру загрузки для последующих колонн. Можно испольэовать данную колонну, регулируя скорость подачи

35 свежей питающей среды для выращивания культуры, таким образом, чтобы концентрация сахара в ее некоторой части снижалась до величины, не превышающей 20 . от его первоначальной концентрации, подавая дополнительное количество свежей среды для выращивания культуры, содержащей сахар, в ту часть колонны, где снижается концентрация сахара повторяя затем эту проЭ

45 цедуру загрузки в последующих частях колонны.. Эти варианты реализации предлагаемого способа могут увеличить выход этанола за единицу времени, кроме того, этанол может образовы50 ваться непрерывно с высокой концентрацией и весьма эффективно.

Отделение среды после завершения реакции превращения может быть осуществлено известными способами, например дистилляцией, центрифугированием, декантацией и т.п, При использовании колонны бульон можно легко отделить в виде потока, вытекающего из нее.

Активность иммобилизованных микроорганизмов, направленная на синтез этанола, определяется при помощи определения количества образующегося этанола, концентрация ферментируемого сахара определяется в пересчете на глюкозу. . Пример 1. Дрожжи Saccharomyces sake АТСС 2б422 смешивают с 20 мл стерилизованного 4,5 в.о. водного раствора каррагинана при 37 С. Смесь по каплям добавляют из сливного наконечника в 2 . в.о. водный раствор хлорида калия (200 мл) с целью получения сферических гелей с диаметром 4 мм.

Питательную среду приготавливают в результате смешивания в воде, % в.в.: экстракт дрожжей 0 15 хлорид аммония 0,25, кислый бифосфат калия

0,55, гептагидрат сульфата магния

0,025, хлорид кальция 0,001 лимонная кислота 0,1 и хлорид натрия 0,25 и поддерживают рН на уровне 5,0.

В полученную среду добавляют глюкозу с концентрацией 10 в.с. и полученные гели инкубируют в содержащей глюкозу среде 500 мл при легком

О встряхивании при 30 С в течение 60 ч с целью выращивания дрожжей в гелях.

Полученные таким образом иммобилизованные дрожжи обладают активностью, направленной на синтез этанола, которая равняется 50 мг этанола/мл геля/ч.

Иммобилизованные дрожжи 20 мл контактируют с питательной средой содержащей 10% в.с. глюкозы (20 мл) при

30 С в течение 1 .ч. Когда концентрация оставшейся глюкозы в среде снижается до 2 мг/мл, добавляют дополнительное количество свежей питательной среды, содержащей 40% в.о. глюкозы (5 мл), и реакция превращения глюкозы в этанол продолжается еще в течение 1 ч при тех же условиях. Затем стадия добавления питательной среды, содержащей 40 в.о. глюкозы (5 мл), повторяется три раза с интервалом в

1 ч. В результате иммобилизованные дрожжи сохраняют свою активность, направленную на синтез этанола, на уровне 50 мг/мл геля/ч в течение периода реакции, после проведения реакции превращения в течение 5 ч получается среда, содержащая этанол в концентрации 125 мг/мл (40 мл).

1181555

Пример 2. Способ осуществляют аналогично примеру 1. Активность, направленная на синтез этанола, вы деленных иммобилизованных дрожжей не снижается даже после выделения и ста5 дия получения этанола повторяется десять раз, в результате получают среду, содержащую этанол с концентрацией 125 мг/мл (40 мл), в .конце каждой реакции превращения, продол-, жавшейся в течение 5 ч.

Пример 3. Иммобилизованные дрожжи 20 мл приготавливают аналогично примеру 1. Затем их помещают в цилиндрическую колонну (объем 30 мл), в которую через один из концов. загружают питательную среду, содержащую

10Х в.о. глюкозы, со скоростью о

20 мл/ч при 30 С, при этом дрожжи всплывают и выходят из колонны через другой ее конец с той же скоростью.

После инкубирования в течение 60 ч

0 при 30 С, в течение которого подача среды продолжается с .упомянутой скоростью, скорость подачи бульона доводится до 7 мп/ч с тем, чтобы вытекающий поток содержал глюкозу с концентрацией не более 10 мг/мл. При этих условиях концентрация глюкозы в пита30 тельной среде, которую подают в колонну, постепенно увеличивается таким образом, что концентрация глюкозы в нем достигает ЗОХ в.о. в пересчете на бульон через 120 ч. В течение этого периода активность иммобилизованных дрожжей, направленная на синтез этанола, не снижается и в результате вытекающий из колонны поток содержит этанол в концентрации 150 кг/мл. Кроме того, когда питательная среда, содержащая ЗОХ в.о. глюкозы, непрерывно поступает в колонну со скоростью

7 мл/ч, иммобилизованные дрожжи в колонне сохраняют свою стабильную активность в течение более 1 мес, а вытекающий поток содержит этанол со средней концентрацией 146 мг/мл.

Пример 4. Получение этанола осуществляется с использованием цилиндрического колоннообразного реакционного оборудования, содержащего три колонны. Каждая колонна (объем

30 мл) подготавливается аналогично примеру 3, т.е. упаковывают колонны иммобилизованными дрожжами и подают питательную среду, содержащую 10Х в.с. глюкозы, со скоростью 20 мл/ч при 30 С в течение 60 ч. Затем колонс ны соединяются между собой. Питательную среду, содержащую 10Х в.л. глюкозы, подают в нижнюю часть первой колонны через трубу со скоростью

20 мп/ч при 30 С. Вытекающий иэ коо лонны поток подают во вторую колонну вместе с питательной средой, содержащей 40Х в.с. глюкозы, через загрузочную трубу со скоростью 5 мл/ч, Вытекающий из второй колонны поток подают в третью колонну вместе с пита,тельной средой, содержащей 403 в.о. глюкозы, через загрузочную трубу со скоростью 5 мл/ч. В результате, из третьей колонны через выходную трубу вытекает поток, содержащий этанол в концентрации 100 мг/мл со скоростью 30 мл/ч.

Пример - 5. Способ осуществляют аналогично примеру 4, только

20% в.о. 5Х-ного водного раствора мелассы используется вместо 10Х в.о. глюкозы в исходной питательной среде (100 мг/мл в пересчете на глюкозу) и концентрация водного раствора мелассы в дополнительной питательной среде постепенно увеличивается до

60Х в.о. с целью непрерывного получения вытекающего потока, содержащего этанол в концентрации 142 мг/мл со скоростью 5 мл/ч.

Пример 6. Получение этанола осуществляют с использованием кони/ ческого колоннообразного реакционного оборудования. В коническую колонну (объем 30 мл) помещают иммобилизованные дрожжи 20 мл, полученные согласно примеру 1, подают питательную среду, содержащую 10Х в.о. глюкозы, в нижнюю часть колонны через загрузочную трубу со скоростью 20 мл/ч о при 30 С, среду выводят из колонны в ее верхней части через трубопровод с той же скоростью. После инкубирования при 30 С в течение 40 ч (при о этом среду подают с приведенной скоростью) скорость подачи изменяется до 6 мл/ч с тем, чтобы вытекающий поток содержал глюкозу в концентрации, не превышающей 10 мг/мл. При этих условиях концентрация, глюкозы в пи тательной среде, которую подают в ко" лонну, постепенно увеличивается так, чтобы концентрация глюкозы в ней достигла 35Х в.о. в пересчете на среду спустя 72 ч. В течение этого периода активность иммобилизованных дрожжей, направленная на синтез эта 55 10

В питательную среду добавляют глюкозу с концентрацией 10 в.о. и полученные гели инкубируют в содержащем глюкозу бульоне 500 мл при 30 С в течение 90 ч в атмосфере азота с целью выращивания в них анаэробных микроорганизмов. Активность полученных таким образом иммобилизованных анаэробных микроорганизмов, направленная на синтез этанола, составляет 77 мг этанола/мл геля/ч.

Иммобилизованные анаэробные микроорганизмы 20 мл контактируют с питательной средой, содержащей 10Х в.л. глюкозы (20 мл), при 30 С в течение

45 мин. Когда концентрация оставшейся глюкозы в среде снижается до 2 мг/мл, добавпяют дополнительное количество свежей питательной среды, содержащей

40 . в.о. глюкозы (5 мл), и реакция превращения глюкозы в этанол продолжается еще в течение 40 мин при тех же условиях. Далее стадия добавления питательной среды, содержащей 40 в.о. глюкозы (5 мл), повторяется три раза с 40-минутными интервалами. В

1результате иммобилизования анаэробные

1 микроорганизмы сохраняют свою активность, направленную на синтез этанола, на уровне 77 мг этанола/мл геля/ч и после взаимодействия в течение

200 мин получается бульон, содержащий этанол с концентрацией 125 мг/мл (40 мл).

Пример 9. Иммобилизованные анаэробные микроорганизмы, полученные согласно примеру 8, выделяют декантацией, Повторяют операции по примеру 8

- с использованием выделенных иммобилизованных микроорганизмов для получения этанола. Активность выделенных иммобилизованных анаэробных микроорганизмов, направленная на синтез этанола, не снижается даже после выделения и получения этанола в течение десяти раз, в результате в конце каждой реакции превращения, продолжающейся 200 мин, получается среда, содержащая этанол с концентрацией

125 мг/мл (40 мл).

Пример 10. Способ осуществляют аналогично примеру 1, только в колонну помещают иммобилизованные анаэробные микроорганизмы согласно примеру 9 в количестве 20 мл, а затем подают питательную среду, содержащую 10 в.л. глюкозы со скоростью 30 мл/ч при 30 С в течение 90 ч. Затем колонны соединяют последователь9 :11815 иола, не снижается и в результате в вытекающем потоке концентрация этанола составляет 175 мг/мл.

Пример 7. Получение этанола осуществляется с использованием цилиндрического колоннообразного реак5 ционного оборудования, содержащего трубу для циркулирующего потока, при помощи которой часть среды, вытекающей из колонны, подается в нижнюю часть колонны, т.е. в колонну, упакованную иммобилизованными дрожжами

25 мл, полученными согласно примеру 1, затем подают 20Х в.о. водный раствор молазы (100 мг/мл в пересчете

15 на глюкозу) в нижнюю часть колонны через трубу со скоростью 25 мл/ч при о

30 С, в результате иммобилизованные дрожжи всплывают и среду выводят из колонны через ее верхнюю часть с той

20 же скоростью. После инкубирования о в течение 40 ч при 30 С (при этом среду подают с указанной скоростью) в колонну подают 50Х в.о. водный раствор молазы (250 мг/мл в пересчете на глюкозу) со скоростью 10 мл/ч, при

25 этом часть среды, вытекающей из колонны, циркулирует в нижнюю часть колонны через трубу со скоростью

100 мл/ч. Концентрация молазы в потоке, циркулирующем через трубу, снижается до величины, не превышающей

10 мг/мл в пересчете на глюкозу. При этих условиях активность иммобилизованных дрожжей, направленная на синтез этанола, не снижается и через 35 трубу непрерывно вытекает жидкость, содержащая этанол с концентрацией i25 мг/мл, так как концентрация водного раствора молазы в бульоне, который загружается в колонну, разбав- 40 ляется при помощи среды, циркулирующей через трубу.

Пример 8. Одна колония

Zymomonas mobilis IP0 13756 смешивается со стерилизованным раствором 4 (4 5 в.о.) каррагинана 20 мл при

37 С. Смесь по каплям добавляют из сливного наконечника в 2Х в.о. водный раствор хлорида калия 200 мл с целью получения шарообразных гелей с диаметром 4 мм. Приготавливают питательную среду при помощи перемешивания в воде,. в.о.: экстракт дрояокей 0,15, хлорид аммония 0,25, кислый бифосфат калия 0,55, гептагидрат сульфата маг-55 ния 0,025, хлорид кальция 0,001, лимонная кислота 0,1 и хлорид натрия

0 25 рН смеси доводят до 6,8.

1181555

Составитель Л.Пашинина

Редактор Л.Гратилло Техред Ж.Кастелевич

Корректор, И. Эрдейи

Заказ 5958/64 Тираж 524

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, кл.Проектная, 4 но. Питательную среды, содержащую

iO7. в.о. глюкозы, подают в нижнюю часть колонны через трубу для подачи ее со скоростью 30 мл/ч при .30 С. Вытекающую из колонны жидкость направляют во вторую колонну вместе с питательной средой, содержащей 407. в.л. глюкозы, подаваемой через трубу со скоростью 7 мл/ч. Вытекающую иэ второй колонны жидкость подают в третью 10 колонну вместе с питательной средой, содержащей 407 в.о. глюкозы, через трубу со скоростью 7 мл/ч. Таким образом,вытекающая жидкость, содержащая этанол сконцентрацией 100мг/мл,непре- 1> рывно поступает из третьей колонны через выходную трубу со скоростью 44мл/ч °

Пример 11. Способ осуществляют аналогично примеру 8, только вместо глюкозы в питательной среде 2б (100 мг/мл в пересчете на глюкозу) используют 207 в.о. водный раствор мелассы, причем концентрация последнего постепенно увеличивается до

607в.о.с цельюполучения среды,содержащей этанол в концентрации 125 мг/мл (40мл ),в результате реакциипревраще ния мелассы в этанол в течение 3 ч.

Пример 12. Способ осуществляют аналогично примеру 7. В колон-, ну помещают иммобилизованные анаэробные микроорганизмы 25 мл, которые получают по примеру 9, в нижнюю часть колонны через трубу подают 207. в.о. водный раствор мелассы (100 мг/мп в пересчете на глюкозу) со скоростью

40 мг/ч при 30 С в течение 90 ч. Поток, поступающий иэ верхней части колонны через трубу, имеет ту же скорость. Затем в колонну подают 507. в.о. раствор мелассы (250 мг/мл в пересчете на глюкозу) со скоростью

15 мл/ч, одновременно часть среды, вытекающей из колонны, циркулирует в нижнюю часть колонны через циркуляционную трубу со скоростью 100 мл/ч.

Концентрация водного раствора меласы, циркулирующего через трубу, снижает" ся до величины, не превышающей

iO мг/мл в пересчете на глюкозу. При этих условиях активность иммобилиэованных анаэробных микроорганизмов, направленная на синтез этанола, не снижается и через трубу непрерывно вытекает поток, содержащий этанол в концентрации 125 мг/мл, так как концентрация водного раствора мелассы, который загружается в колонну снижается за счет циркулирующей среды.