Способ определения гликозаминогликанов сыворотки крови
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ СЬШОРОТКИ КРОВИ путем обработки сыворотки фосфорно-вольфрамовой кислотой, выделения гликозаминогликанов , электрофореза и окрашивания алциановым синим, отличающийся тем, что, с целью повышения разрешающей способности способа и сокращения времени определения , проводят диск-электрофорез в 9-10%-ном полиакриломидном геле при рН 7,8-9,0 и силе тока 2 мА на одну трубку.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК (19) (11) 8 2 А (51)4 G 01 N 33/48
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
Il0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНЯТИЙ (21) 3625322/28-13 (22) 15.07.83 (46) 15.09.85. Бюл. № 34 (72) А.П.Зверяев, Н.М.Золотарева и П.И.Исаев (71) Волгоградский государственный медицинский институт (53 567.8.097.29(088.8) (56) Меркурьева P.Â. Электрофоретическое разделение сывороточных мукопротеидов на фракции. — Лабораторное дело, 1966, № 1, с. 712716. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ путем обработки сыворотки фосфорно-вольфрамовой кислотой, выделения гликозаминогликанов, электрофорезаи окрашивания алциановым синим, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения разрешающей способности способа и сокращения времени определения, проводят диск-электрофорез в 9-10%-ном полиакриломидном геле при рН 7,8-9,0 и силе тока 2 мА на одну трубку, !
25
Составитель Н.Туляева
Редактор М.Бандура Техред M.Ïàðoöàé Корректор Л.Пилипенко
Заказ 5612/24 Тираж 897 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4
1 11788
Изобретение относится к медицинской химии, а именно к способам анализа гликозаминогликанов сыворотки крови методом электрофореза, и может быть использовано в диагностических целях в клинике и в других областях народного хозяйства, где применяется аналитический электрофорез.
Цель изобретения — повышение разрешающей способности способа и со- 10 кращение времени определения.
Пример . Берут 0,5 мл сыворотки, к которой прибавляют 4,5 мл физраствора и 2 мл 1,8 М хлорной кислоты, через 10 мин центрифугируют. К полученному элюату прибавляют 1 мл 57.-ной фосфорно-вольфрамовой кислоты в 2 н, соляной кислоты, через 10 мин центрифугируют, полученный осадок растворяют s 0,2 мл фосфатного буфера рН 7,0 при добавлении 0,1 мл 0,1 í. NaOH. Затем к раствору прибавляют 5 мл 96%-ного этанола, центрифугируют, осадок высушивают. Полученный осадок раст12 2 воряют О, 1 мл трис-глицинового буфера рН 8,3, вносят 0,05 мл раствора в одну трубку с 10Х.-ным разделяющим полиакриламидным гелем, вместо концентрирующего геля используют сефадекс G-200. Затем проводят диск" электроАорез в. трис-глициновом буфере рН 8,3 при силе тока 2 мА на одну трубку в течение 1 ч. После извлечения гелей из трубок их фиксируют 10 мин в смеси метанол:вода:
;уксусная кислота=10:10:1, далее проводят окрашивание в 1Ж-ном растворе алцианового синего в 7Х-ной уксусной кислоте в течение 30 мин. Затем проводят электрофоретическое обесцвечивание в 7Х-ной уксусной кислоте 20-30 мин (положительный электрод со стороны целлофана), после чего в гелях выявляют 5-7 фракций, окрашенных в синий цвет, которые были идентифицированы с помощью стандарт- ных веществ (хондро-4 сульфат, гиалуроновая кислота). Первая фракция соответствует хондроитинсульфатам, седьмая — гиалуроновой кислоте.
