Способ определения цист простейших кишечника в пробах из окружающей среды

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИСТ ПРОСТЕЙШИХ КИШЕЧНИКА В ПРОБАХ ИЗ .ОКРУЖАЮШЕЙ СРЕДЫ, включающий обработку материала консервантом с красителем и приготовление мазков-отпечатков, отличающийся тем, что, с целью выявления жизнеспособных цист, обработку проводят при 17-24°С в консерванте, содержащем мертиолят, формалин , спирт этиловый 96-градусный, генцианвиолет и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, мае. %: Мертиолят0,0016-0,0018 Формалин 40%-ный4,1-4,4 Спирт этиловый 96-градусный10,4-10,9 Генцианвиолет0,023-0,029 § Физиологический раствор Остальное и по степени прокращиваемости клеток определяют наличие жизнеспособных цист в пробах.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

4(SD G 01 N 1/28; А 61 В 10/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ, К АВТОРСКОМУ(СВИДЕТЕЛЬСТВУ (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИСТ

ПРОСТЕЙШИХ КИШЕЧНИКА В ПРОБАХ

ИЗ.ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ, включающий обработку материала консервантом с красителем и приготовление мазков-отпечатков, отличающийся тем, что, с целью выявления жизнеспособных цист, обработку проводят при 17 — 24 С в консерванте, содержащем мертиолят, формалин 40%-ный, спирт этиловый 96-градусный, генцианвиолет и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Мертиолят 0,0016 — 0,0018

Формалин 40%-ный 4,1 — 4,4

Спирт этиловый

96-градусный 10,4 — 10,9

Генцианвиолет 0,023 — 0,029 а

Физиологический раствор Остальное и по степени прокрашиваемости клеток определяют наличие жизнеспособных цист в пробах.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3316590/28-13 (22) 15.07.81 (46) 07.01.85. Бюл. № 1 (72) И. К. Падченко, И. М. Локтева, А. И. Стовбун, В. В. Таран и А. Е. Лаптева (71) Киевский научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и паразитологии (53) 615.475 (088.8) (56) 1. Турдыев А. А. К методике лабораторной диагностики амебиаза. — Медицинская паразитология и паразитарные болезни.

1966, т. 35, № 5, с. 572 — 574.

2. Нефедов В. П., Гомзякова Н. В.,Сомова Л. А., Садовская Г. М. Определение функционального состояния животных клеток методами витальных красителей в люминесцентной микроскопии в условиях переживания и роста в перевиваемой культуре. — Непрерывное управляемое культивирование микроорганизмов. М., 1967, с. 191 — 194.,.SU„„1133493 A

1133493

Изобретение относится к медицине, а именно к области лабораторных исследований при выделении микроорганизмов из проб окружающей среды.

Известен способ определения цист простейших кишечника в пробе, заключающийся в фиксации и окрашивании мазков раствором Люголя (1).

Однако данный способ не дает возможности определить жизнеспособные цисты.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности является способ определения цист простейших кишечника в пробах из окружающей среды, включающий окрашивание витальными красителями (2).

Однако известный способ также не позволяет выявлять жизнеспособные ц исты, поскольку краситель не содержит консерванта, что приводит к размножению бактерий в пробе.

Цель изобретения — выявление жизнеспособных цист.

Цель достигается тем, что при способе определения цист простейших кишечника в пробах из окружающей среды, включающем обработку материала консервантом с красителем и приготовление мазков-отпечатков, обработку проводят при 17 — 24 С в консерванте, содержащем мертиолят, формалин 40 /ц-ный, спирт этиловый 96-градусный, генцианвиолЕт и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, мас, /о.

Мертиолят

Формалин 40О/0-ный

Спирт этиловый

96-градусный 10,4 — 10,9

Генцианвиолет 0,023 — 0,029

Физиологический раствор Остальное и по степени прокрашиваемости клеток определяют наличие жизнеспособных цист в пробах.

0,0016 — 0,0018

4,1 — 4,4

Способ осуществляют следующим образом.

Отбирают пробы из окружающей среды, к пробе добавляют консервант в соотношении 1:2 при 17 — 24 С. Далее из пробы готовят мазки, которые исследуют под микроскопом и по степени проникновения красителя в клетки определяют жизнеспособность цист микроорганизмов. При уменьшении или увеличении температуры при обработке процент гибели цист простейших в пробах увеличивается в 1,3 раза.

Пример 1. Берут пробу сточной воды в количестве 10 л на разных этапах ее очистки. Из проб сточной воды получают осадок методом механического обогащения.

К осадку при 17 С добавляют консервант, содержащий мертиолят, формалин 40 /оный, спирт этиловый 96-градусный, генцианвиолет и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, мас. о/0..

Мертиолят 0,0016

Формалин 40О/р-ный 4,1

Спирт 3THAOBbIH

96-градусный 10,4

Генцианвиолет 0,023

Физиологический раствор Остальное

Далее готовят мазки, которые исследуют од микроскопом.

Цисты простейших, не окрашенные красителем, являются жизнеспособными, и по их содержанию определяют общее количество жизнеспособных цист в пробах воды. Дегенерирующие цисты окрашиваются красителем в фиолетовый цвет.

В таблице даны сроки хранения жизнеспособных цист лямблий в консерванте при

17 — 24 С.

Срок хранения Содержание цист в консерванте лямблей (О/0)

Живые Дегенерирован

24ч

72ч г 75 дн.

97 3

97 3

95 5

Пример 2. Пробы почвы смешивают с консервантом в соотношении 1:2 при 24 С.

Консервант содержит мертиолят, формалин

40О/р-ный, спирт этиловый 96-градусный, генцианвиолет и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, мас. /о.

Мертиолят 0,0018

Формалин 40О/д-ный 4,4

Спирт этиловыи

96-градусный 10,9

Генцианвиолет 0,029

Физиологический раствор Остальное

Далее готовят мазки, которые исследуют под микроскопом.

Цисты простейших, не окрашенные красителем, являются жизнеспособными, и по их содержанию определяют общее количество жизнеспособных цист в пробах воды.

Изобретение. позволяет сохранить жиз45 неспособные цисты в пробах за счет состава консерванта, приводящего к гибели сопутствующей микрофлоры и других клеточных элементов, о чем свидетельствует их интенсивное окрашивание красителем, тогда как цисты простейших сохраняют свою жизнеспособность до 94 — 95О/р в течение 2 мес. от забора пробы. Это особенно необходимо при оценке эпидемиологической роли отдельных факторов передачи, эффективности и качества дезинвазионных мероприятий в очагах кишечно-протозойных инвазий, при определении эффективности лечения больных и прогнозировании развития инвазионного процесса.