Штамм @ @ тэпв-4 для идентификации энтеропатогенных наг- вибрионов 4-го фаготипа

 

Штамм Phagum cholericum ТЭПВ-4, Ф 111 (Коллекция бактериофагов Тбилисского научно-исследовательского института вакцин и сывороток МЗ СССР), используемый для идентификации энтеропатогенных НАГвибрионов 4-го фаготипа.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК зш В 65 В 51/10

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (2l ) 3637977/28-13 (22) 25.08.83 (46) 23.11.84. Бюл. № 43 (72) Н. Ф. Быстрый, К. К. Лебедев, В. А. Элькина, Н. С. Солодовников, А. К. Адамов, М. Н. Алиев, А. Б. Тепляков и А. В. Пилипенко. (71) Всесоюзный ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» (53) 576.858.9(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР по заявке № 3560292/28-13, кл. С 12 N 7/00, 12.01.83.

2. Авторское свидетельство СССР № 586200,кл. С 12 N 7/00, 1977 (прототип).

„,SU 1125160 A (54) ШТАММ PHAGUM CHOLER ICUM

ТЭПВ-4 ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ

ЭНТЕРОПАТОГЕННЫХ НАГ-ВИБРИОНОВ 4-ГО ФАГОТИПА. (57) Штамм Phagum cholericum ТЭПВ-4, Ф 111 (Коллекция бактериофагов Тбилисского научно-исследовательского института вакцин и сывороток МЗ CCCP), используемый для идентификации энтеропатогенных НАГвибрионов 4-ro фаготипа.

1125160

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к диагностическим фагам, применяемым для ускоренной идентификации возбудителей острых кишечных заболеваний, не агглюминирующихся. холерной 0 — 1 сывороткой энтеропатогенных

НАГ-вибрионов методом фаготипирования.

Известен штамм Phagum Nag 907/2062, обладающий активностью в отношении

Nag-вибрионов 05 серовара, не относящихся к 01 группе (1).

Известен также штамм Phagum choleг1сшп-77 УП серотипа специфически активный к штаммам НАГ-вибрионов 0-56 серовара (2) .

Однако известные штаммы специфичны только в отношении штаммов 05 и 56 серовара и не действуют на остальные серовары

НАГ-вибрионов.

Целью изобретения является создание штамма фага для идентификации НАГ-вибрионов 4-го фаготипа.

Цель достигается с помощью штамма

Phogum cholericum ТЭПВ-4.

Штамм Phagum cholericum ТЭПВ-4 выделен путем селекции из популяции холерного эльтор-фага IX серотипа. Депонирован и хранится в коллекции бактериофагов

Тбилисского научно-исследовательского института вакцин и сывороток МЗ СССР под номером Ф-111. Он используется для идентификации энтеропатогенных, не относящихся к 0-1 группе НАГ-вибрионов 4-го фаго типа методом фаготипирования.

Штамм характеризуется следующими свойствами.

Морфологические признаки.

Фаг ТЭПВ-4 относится к III гомологическому ряду. Частицы фага состоят из головки гексагональной формы размером

650х605 А и короткого отростка 135 А.

Штамм Phagum cholericum ТЭПВ-4 относится к IX серологическому типу холерных фагов.

Специфичность. Штамм Phogum choleriqum ТЭПВ-4 специфически активен к штаммам энтеропатогенных не относящихся к

0 — 1 группе НАГ-вибрионам 4-го фаготипа, выделяемых от больных ОКЗ, из сточных вод и реже из открытых водоемов различных регионов, в большинстве которых они занимают второе место после шта ммов

НАГ--вибрионов 1-го фаготипа. Он абсолютно инактивен к штаммам V. parahacmolyticus. V. alginolyticus и к штаммам других видов вибрионов и близкородствен ным им микроорганизмам: Aегоmonas, Conamonas, Pseudomonar, Bacteriaceae (Schigell a, Salmonella, Kscherichia и др.).

Физиологические признаки. Фаг ТЭГIВ-4 активен, главным образом, в отношении вирулентных штаммов вибрионов эльтор и

НАГ-вибрионов 14, 34, 41 и 43 сероваров, 5

«О находящихся в шероховатой форме, что и определяет умеренную степень вирулентности последних.

Оптимальная множественность инфицирования микробной клетки 0,1 — 0,2 при плотности посевов 1.10 — 2.10 м.к./мл. Полт ный лизис в жидкой среде при указанном соотношении наступает через 3 — 5 ч инкубации при 37 С.

Физические свойства. В жидком видепри 4 — 10 С хранится 2 г, что делает его удобным для транспортировки.

Для получения штамма Phogum cholericum ТЭПВ-4 применяют специально подобранные эталонные штаммы Vibrio Nag

442 или Vibrio eltor 75 М.

Размножение фага ТЭПВ-4. Культуру штамма-продуцента Vibrio Nag 442 или

Vibrio eltor 75 М отсевают на пластинку агара Мартена: рН 7,2 — 7,6 из 3 — 4-часовой бульонной культуры. Через 18 — 20 ч инкубации при 37 С готовят 1 — 2 млрд. взвесь агаровой культуры в бульоне и 0,5 — 1,0 мл ее вносят во флакон со !00 — 150 мл того же подогретого в термостате при 37 С бульона. Посев подращивают 2 — 3 ч при

37 С до концентрации 5.10 м.к./мл. Исходя из оптимальной множественности инфекции (1:1 или 1:2), добавляют сюда маточный фаг в бульон с культурой. Смесь фага с культурой быстро переносят в бутыль (с помощью вакуума), содержащую 1 — 1,5 л также подогретого при 37 С бульона Мартена, с рН 7,2 — 7,6. Все содержимое бутыли инкубируют в термостате при 37 С и периодически помешивают.

За посевом ведут наблюдение. Нарастание мутности бульона свидетельствует о продолжающемся росте и размножении культуры микробного штамма. Через 3 — 5 ч наступает просветление бульона с посевом на 3+ или 4+; это указывает на необходи.мость прекращения инкубации. Содержимое фильтруют через стерильные фарфоровые свечи Л вЂ” 3 или Л-5 либо через асбестовые пластины «СФ».

Отфильтрованный препарат проверяют на стерильность, активность и специфичность диапазона литического действия по методикам согласно Приказу. МЗ СССР № 192 от 19.02.79 г и разливают в ампулы по 2 мл. Препарат жидкий, хранят при

4 — 10 C.

Штамм Phagum chalericum ТЭПВ-4 применяют для диагностики и идентификации

4-го фаготипа энтеропатогенных НАГ-вибрионов при их фаготипировании в разведениях 10 — 10 . Расплавленный и остуженный до 45 — 50 С 1,5 — 2О/о агар на любой основе (Мартена, Хоттингера, МП) рН 7,4 — 7,6 разливают в стерильные чашки Петри по

1125160

Составитель П. Красильников

Техред И. Верес Корректор И. Эрдейи

Тираж 693 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и от крытий

1 13035, Москва, )K — 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор Н. Пушненкова

Заказ 8411/14

20 — 25 мл и после застывания подсушивают

30 мин при 37 с. В пробирки с 3 мл 0,7о/о агара, рН 7,2 — 7,6 расплавленного на водяной бане и остуженного до 45 С, добавляют

0,2 — 0,3 мл 3 — 4 часовой бульонной культуры испытуемого штамма НАГ-вибриона, тщательно смешивают и быстро выливают на агаровую пластинку в чашку Петри.

После его застывания на газон культуры платиновой петлей 2 мм или репликатором наносят указанный фаг из всех разведений.

После подсыхания капель чашку закрывают крышкой, переворачивают вверх дном и инкубируют при 37 С. В случае необходимости получения ускоренного ответа результат учитывают через 3 — 4 ч, а при плановом обследовании допускается и позже, в пределах 18 — 20 ч.

Оценку литического действия фага ведут по 4-балльной системе: 4+ — сливной полный лизис; 3+ — множественные негативные колонии фага или полный лизис со следами вторичного роста культуры вибриона; 2+ — изолированные негативные колонии фага (не менее 10) или пятно лизиса со значительным ростом вторичной культуры вибриона. Положительным считают лизис культуры от капли фага любого разведения не ниже 2+.

Использование изобретения позволяет дополнить комплект нового препарата фагов ТЭПВ для ускоренной диагностики возбудителей ОКЗ у людей методом фаготипирования энтеропатогенных НАГ-вибрионов в качестве компонента, идентифицирующего штаммы только 4-го фаготипа.