Штамм @ @ тэпв-2,используемый для идентификации и диагностики энтеропатогенных наг-вибрионов 2-го фаготипа

 

Штамм Phagufe cholericum ТЭПВ-2 № Ф-110 (коллекция бактериофагов Тбилисского научно-исследовательского института вакцин и сывороток МЗ СССР), используемый для идентификации и диагностики энтеропатогент ных НАГ-вибрионов 2-го фаготипа.

(lgl (и) SU

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

y g С 12N7

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЦЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНЯТИЙ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3645646/28-13 (22) 01. 08. 83 (46) 23.10.84. Бюл. У 39 (72) Н.Ф.Быстрый, A.Â.Ýëlêèíà, Н.Г.Пхаладзе, Н.С.Солодовников и A.Ô.Èåëüíèêîâà (71) Всесоюзный ордена Трудового

Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт

"Микроб" (53) 576 .8.077.5(088 ° 8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР к 586200, кл. С 12 Б 7/00, 1977 (прототип) . (54) ШТАММ PHAGUN CHOLERECUM ТЭПВ-2, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАПИИ И ДИА НОСТИКИ ЭНТЕРОПАТОГЕННЫХ НАГ-ВИБРИОНОВ 2-ГО ФАГОТИПА. (57) Штамм Phaguin cho1ericum ТЭПВ-2

У Ф-110 (коллекция бактериофагов

Тбилисского научно-исследовательского института вакцин и сывороток

М3 СССР), используемья для идентификации и диагностики энтеропатоген-. ных НАГ-вибрионов 2-го фаготипа.

1 11200

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к ускоренной идентификации возбудителей острых кишечных заболеваний, вызван. ных вибрионами неагглютинирующнх холерной 0-1 сывороткой методом фаготипирования.

Известен штамм Phagum cholericum

77 VII серотипа, активный к штаммам НАГ-вибрионов 56-го серовара (1) . 10

Однако штамм Phagum cholericum

77 VII серотипа проявляет активность только к штаммам НАГ-вибрионов

56-ro серовара.

Целью изобретения является полу- 15 чение штамма, позволяющего иденти-, фицировать и диагностировать энтеропатогенные НАГ-вибрионы 2-го фаготипа.

Цель достигается с пояощью штам- 20 ма Phagum cholericum ТЗПВ-2 9 Ф-110 выделенного путем селекции из йопуляции музейного холерного фага А.

Штамм Phagum cholericum ТЭПВ-2 депонирован в коллекции бактериофагов25

Тбилисского научно-исследовательского института вакцин и сывороток

М3 СССР Ф Ф-110, и характеризуется следующими свойствами.

Штамм Phagum cholericum ТЗПВ-2 относится к VI серологическому типу холерных фагов по классификации, принятой в СССР.

Морфологические признаки . Фаг

ТЭПВ-2 относится к 111-у гомологическому ряду, Частицы фага состоят из

35 головки гексагональной формы размером о 498х464 А и короткого отростка 115А..

Специфичность. Штамм Phagum cholericum ТЗПВ-2 специфически активен к

40 штаммам энтеропатогенных вибрионов, не относящихся к 0-1 группе второго фаготипа, вьделяемых от больных ОКЗ, из сточных вод и открытых водоемов в различных регионах СССР. Он абсо45 лютно инактивен к штаммам других ви1 дов вибрионов и близко родственных микроорганизмов V. porahaemolyticus, V. a1ginolyticus, Aегоmonas, Сошашо-. паз, Plesiomonas, Pseudomonas, Pro-

teus, Escherichia, Salmonella,3higeK1а, А1са118епез „СИгоЬасйет.

Физиологические признаки . Фаг

ТЭПВ-2 активен в отношении штаммов вибрионов эльтор и НАГ, находящихся в гладкой и К-формах.

Оптимальная множественность инфицирования микробной клетки 0,1I

18 2 ,0, Z при плотности посева 1 10 —

2 107 м.т./мл. Полный лизис в жидкой среде при укаэанном соотношении наступает через 3-4 ч инкубации при

37 С.

Для штамма Phagum cholericum

ТЭПВ-2 применяют специально подобран ные эталоннйй штамм Vibrio cholerae

R-1(145) .

Размножение фага ТЭПВ-2. Культуру штамма-продуцента V. cholerae

R-1(145) отсевают на пластинку агара

Мартена рН 7,2-7,6 из 3-4 ч бульонной культуры. Через 18-20 ч инкубации о при 37 С отбирают типичные колонии, отсевают их на косяк агара Мартена с рН 7,2-7,6. Через 18-20 ч инкубации .при 37 С производят смыв выросшей культуры на косом агаре 5-ю .мл бульо на Мартена, затем 0,4 мл этого смыва вносят в 100 мл подогретого в термостате бульона Мартена. Это обеспе-. чивает концентрацию 2 10 микробных клеток вибриона в 1 мл среды.

Исходя из оптимальной множественности инфекции в бульон с культурой добавляют маточный фаг.

Содержимое засеянного флакона осторожно перемешивают и инкубируют ф при 37 С. За посевом ведут наблюдение. Наростание мутности бульона свидетельствует о продолжающемся росте и размножении культуры микробно- . го штамма. Через 3-5 ч наступает просветление бульона с посевом на 34 или 4+, что указывает на необходимость прекращения инкубации . Содержимое фильтруют через стерильные бакте,риальные свечи Л-3 или Л-5.

Отфильтрованный препарат проверя ют на стерильность, активность и специфичнос ть. и разливают в ампулы по 2мл.

Препарат в жидком виде хранят в. течение 3-х лет при 4"10 С. о

Штамм Phagum cholericum ТЭПВ-2 применяют для идентификации и диагностики штаммов энтеропатогенных вибрионов 2-ro фаготипа в разведениях. 10 — 10 . Расплавленный и остужен о ный до 50 С 22-ный агар, приготов ленный на любой основе: Мартена, Хоттингера, МП, прн рН 7,4-7,6 разливают в стерильные чашки Петри по 2025 мл. Застывший агар подсушивают

30-40 мин и вторым слоем наносят культуру испытуемого штамма в 0,77 агара с таким же рН. Затем на газон культуры бактериологической петлей

1120018

Составитель А.Маныкин

Редактор Н.Джуган Техред С.JIeresa Корректор О.Тнгор. Заказ 7693/21 Тираж 521. Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж"35, Раушская наб., д. 4/5

В @а ° 4 1

Филиал ППП"Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 нли репликатором наносят фаг по од" ной капле из всех разведений. Чашки, с подсохшими каплями закрывают крышками и инкубируют при 37оС. Через 3-,, 4 ч можно учитывать результат, который отмечается появлением стерильных пятен на газоне культуры в местах нанесения капель фага.

4

Использование штамма Phagum choler icum ТЭПВ-2 позволит идентифицировать энтеропатогенные НАГ-вибрионы только 2 — го фа готипа и позво, лит установить эпидсвязи в микроочагах между больными, а также между больными и внешней средой.