Способ определения концентрации общего холестерина в плазме крови

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ОБЩЕГО ХОЛЕСТЕРИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ путем экстракции холестерина органическими растворителями и последующего проведения цветной реакции, о т- , личающийся тем, что, с целью повьш1ения точности, кровь берут в объеме 0,05-0,1 мл, прибавляют 0,950 ,90 мл физиологического раствора, содержащего 0,3-0,4% формалина, холестерин экстрагируют из плазмы 6-10 объемами смеси хлороформа и метанола

СО1ОЭ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСГ1УБЛИН (191 (11) зш С 01 Й 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3581650/28-13 (22) 22. 02. 83 (46) 30.09.84. Бюл. Р 36 (72) Э.П. Цыганов (53) 612.397.81(088.8) (56) 1. Колб В.Г., Камьппников В.С.

Клиническая биохимия. Минск, 1976, с. 156.

2. Abell L.L. et al. "J.Biol. Chem", 1952, 195(1), 357-366 (прототип). (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ОБЩЕГО ХОЛЕСТЕРИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ путем экстракции холестерина органическими растворителями и последующего проведения цветной реакции, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности, кровь берут в объеме 0,05-0,1 мл, прибавляют 0,950,90 мл физиологического раствора, содержащего 0,3-0,4Ж формалина, холестерин экстрагируют из плазмы 6-10 объемами смеси хлороформа и метанола (1:1), экстракт промывают водой и спектрофотометрически определяют концентрацию холестерина в плазме.

1116395, 2

Изобретение относится к медицине и биологической химии, в частности к способам определения концентрации общего холестерина в плазме крови.

Известен способ определения концентрации общего холестерина в плазме или сыворотке крови 1 ).

Недостатком известного способа является использование венозной крови для последующего получения плазмы 1Î или сыворотки, что создает трудности при обследовании больных, особенно при повторном взятии крови для наблюдения динамики процессов и при обследовании детей. 15

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ определения концентрации общего холестерина в малых обьемах сыворотки крови, вклю- - 2О чающий омыление липидов, экстракцию холестерина петролейным эфиром, промывку экстракта водой и последующее фотометрирование $2).

Недостатком данного способа явля- 2g ется длительность выполнения анализа, необходимость использования специаль .ного оборудования для микроанализа и невысокая точность.

Цель изобретения — повышение точ- 3ц ности.

Поставленная цель достигается тем, что при определении концентрации общего холестерина в плазме крови согласно с пос обу, включающему экстрак-; цию холестерина органическими раство,рителями и последующее проведение

/ цветной реакции, кровь берут в объеме 0,05-0,1 мл, прибавляют 0,950,90 мл физиологического раствора, содержащего 0,3-0,4% формалина, холестерин экстрагируют из плазмы

6-10 объемами смеси хлороформа и ме- танола (1:1), экстракт промывают водой и спектрофотометрически опреде- 45 ляют концентрацию холестерина в плазме.

Способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. Кровь в количест- о ве 0,05 мл берут из пальца, вносят в центрифужную пробирку с 0,95 мл физиологического раствора, содержа" щего 0,35 . формалина, перемешивают, центрифугируют при 1500 об/мин, от- 55 бирают 0,7 мл в центрифужную пробирку, приливают 4,5 мл смеси хлороформа и метанола (1: 1) и 1,5 мл воды, перемешивают, центрифугируют, верхни& слой удаляют, хлороформный слой переносят в другую пробирку, хлороформ отгоняют, к сухому остатку приливают

1,5 мл 0,1 -ного раствора хлорного железа в ледяной уксусной кислоте и

1,0,мл концентрированной серной кис- лоты, перемешивают, нагревают на кипящей водяной бане 1 мин. Оптическую плотность раствора измеряют с помощью ФЭК при длине волны 560 нм против цветного реактива. Стандартные пробы обрабатывают аналогичным образом. Одновременно определяют величину гематокрита с помощью микрометода.

Концентрацию холестерина в плазме рассчитывают по формуле:

Концентрация общего

Еоох К холестерина, мг%

E с где E ð и Š— оптическая плотность опытных и контрольных проб, соответственно;

К вЂ” коэффициент, рассчитанный для данной величины гематокрита

lIo формуле:

0 1 х 100

0,7 + V где 0,1 — содержание холестерина в стандартной пробе, мг;

V — объем плазмы, мл, соответствующий объему полученной крови (рассчитывают по величине гематокрита);

0,7 — величина аликвоты. При взятии крови у 70 мужчин и

74 женщин различных возрастных групп получают следующие результаты, мг .:

17-29 лет — 196+9 и 204+7; 30-39 лет—

220+12 и 237+14; 40-49 лет — 205й17 и 239+7 и старше 50 лет — 232+6 и

229+23 соответственно.

Пример 2. При параллельных определениях концентрации общего холестерина в плазме крови двух обследуемых с помощью предлагаемого способа получены следующие результаты;

196, 194, 188, 190, 194, 188, 186 и

190 мг и 282, 286, 290, 292, 296, 280, 280 и 286 мг . Точность метода, рассчитанная для первого и второго случая, составляла 12, 1 и «+2,5% соответственно.

Пример 3. При определении концентрации общего холестерина в

3 1116395 4 плазме крови одних и тех же обследуе- гаемому способу и способу-прототипу мых (определения проводили с интерва- получены следующие результаты, мг Х: лом 4-7 дней) с помощью предлагаемого ?7,5 н 75,0; 67,8 и 70,6; 80;5 и способа получены следующие результа- 81,5; 52,3 и 52,0; 72,0 и 70,0; ты, мг Ж: 280 и 287; 204 и 212; 196 110,0 и 113,0 соответственно. Средние и 178; 238 и 244; 305, 296 и 308; значения равны 76,6 и 77,0 мг Х соот348, 296 и 323; 194 и 188; !64 и 172; ветственно, т.е. результаты, полу296, 300 и 304; 170 и 176 при первом ченные с помощью предлагаемого спо.и повторных определениях соответствен- соба и способа-прототипа, хорошо со но. гласуются.

Способ дает хорошую воспроизводимость результатов. Время, затраченное на проведение

Пример 4. При определении 6 анализов по предлагаемому способу, концентрации холестерина в плазме :составило 75 мин, а по способу-протокрови 6 интактных кроликов по предла- 1 типу более 3 ч.

Составитель В. Кузьмичев

Редактор А. Ревин ТехредЛ.Коцюбняк Корректор Е. Сирохман

Заказ 6924/37 Тираж 822 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4