Способ получения аденилил-5-метилендифосфоната- @ а

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

3(59 С 7 Н 19 10

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ИОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA (21) 3390591/23-04 (22) 05.02.82 (4e) 30.10.83. Бюл. Р 40 . (72 ) К. Х. Зихерман (71) Институт белка AH СССР (53) 547.455.07(088.8) (56) 1. Патент США 9 3238191, кл. 260-211,5, опублик. 1966.

2. Myers Т.С., Nakamyps, К., Flezher G.W. Phosphonic Acid Analogs

of Nucl eoside Phosphates I. The

Syntesis of S -Асlепуlуl Methy lendipI

hosphonate, à Phosphonic Acid Analog

ATP-"G. Chem. Soc. 1963, 85, 3292.

3. Jount R, G. Adtnylyl TmidodiphOsphonatе апй ATP Analog Containing а PNP-Linkage. — "В i ochem! s t ry", 10, ° 2484 (1921 ) (прототип ) .

ae>SUnn À (5.4) (57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛДЕНИЛИЛ-5-ИЕТИЛЕНДИФОСФОНАТА-Ма путем взаимодействия активированного производного аденилавой кислоты с метилендифосфонатом в инертном органическом растворителе в присутствии пиридина с последующим выделением целевого продукта из реакционной смеси на анионообменнике< о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью увеличение выхода целевого продукта, в качестве активированного производного адениловой кислоты используют морфолид адениловой кислоты, а в ка)честве инертного органического растворителя применяют 2-хлорфенол.

2. Способ по п.1, о т л и ч а ю- g

O шийся тем, что метилендифосфонат и пиридин применяют в эквимолярных количествах.

1051099 о о

4денин - рисова — Π— Р— О - Р— О Н5+ ХО -Р— бН - P — ОН

1 1

ОН 0(- БН5 ОН ОН

О 0 0 О

П (! II II

4 3анин-риЫа — Π— g — Π— Р— ар — Р— ОН+НО -Р— О < БНАЯ

I 1 I

ОН ОН 0Н 0 6Н

О О . 0

Н Г вЂ” h ц — O — Р— 1 O+eO-P — бН вЂ”.Р— ОН ° O

ОН ОН AH

4денин - риАма

О 0 О ) ll 11

О Р 0-Р- Н,-Х-ОН+ он он он.

-43енин -рибоза

Изобретение относится к способам получения аденилил-5-метилендифосфо.ната-Ма — АРФ-реактива, используе- мого в молекулярной биологии и биохимии.

Известно несколько методов получения АМДФ. Так, например, АМДФ может быть получен в результате взаимодействия адениловой кислоты с метилендифосфонатом в водно-пиридиновой среде в присутствии большого избытка дициклогексилкарбодиимида в качестве конденсирующего агента. . Выход 16% (1 .

АМДФ получают с выходом 40-52%. Очист- ка целевого продукта проводится . на анионообменных смолах (3 .

Недостатком известного метода является относительно невысокий, выход продукта, который можно обьяснить протеканием побочных реакций.

Цель изобретения — увеличение вы хода АМДФ.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения аденилил-5-метилендифосфоната-Na путем взаимодействия активированного производного адениловой кислоты с мети-!

П р им е р 1. К 0,57 г метилендифосфоната добавляют 18 мл свежеперегнанного 2-хлорфенола и эквивалентное количество (0,108 мл) пиридина для образования соли. Затем 55 при перемешивании и предохранении от влаги добавляют тремя порциями с промежутком 12- 16 ч 0,51 г морфолида адениловой кислоты. После растворения последней порции смесь выдержи- 60 вают в течение 4 сут в темноте при комнатной температуре. Затем упаривают наполовину в вакууме на бане с температурой не выше 60 С, доливают 80 мл воды и отгоняют оставшийся

Другой метод заключается в реакции аденилил-амидата с метилендифосфонатом в смеси растворителей — 2-хлорфенола и пиридина. Выход 22% (21.

К недостаткам указанных методов можно отнести низкие выходы целевых продуктов.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения аденилил-5-метилендифосфоната-Na путем взаимодействия Р" -аденозина-Р -дифенилпирофосфата с метилендифосфонатом в смеси пиридина и диметилформамида с последующим выделением целевого продукта на анионообменнике. лендифосфонатом в инертном органическом растворителе в присутствии пиридина с последующим выделением целевого продукта из реакционной смеси на анионообменнике в качестве активированного производного адениловой кислоты используют морфолид адениловой кислоты, а в качестве инертного органического растворителя применяют

2-хлорфенол.

Кроме того, метилендифосфонат и пиридин применяют в эквимолярных количествах.

Выход целевого продукта 68%.

Процесс происходит по схеме:

I растворитель и воду. К остатку добавляют 10 мл воды, доводят триэтиламином дс рН 8,6 и проводят градиентное элюирование триэтиламин- бикарбонатным буфером с рН 8,6 (2 л 0,03 M+

+ 2 л 0,4 M) на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой размером 3,5х80 см, предварительно уравновешенной 0,03 M триэтипамино-бикарбонатнык буфером с рН 8,6, За ходом элюирования следят по изменению поглощения элюатом ультрафиолетового света с длиной волны 260 ммк. АМДФ появляется в элюате без посторонных примесей по истечении приблизительно 2 л раство1051099

Составитель И. Корсакова

Редактор Н. Кешеля Техред Т.Маточка Корректор A. Ильин

Заказ 8598/26 Тираж 387 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035", Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. ужгород, ул. Проектная, 4 ра. По истечении еще 0,5 л раствора его элюирование заканчивают. Пик

АМДФ может быть отличен по его величине от пиков примесей, также поглоцающих ультрафиолетовый свет, или же электрофоретически. 5

Получают раствор триэтиламмоний соли. АМДФ, которую путем пропускания через колонку с 2 мл Dowex 50х4 преврацают в обычно применяемую натриевую соль АМДФ и последнюю лиофили з ируют (выход 6 8 Ъ от теоретич еского) .

Полученная натриевая соль АМДФ электрофоретически гомогенна и ее молекулярная экстинкция E >< равна

15400.

Таким образом, применение изобретения позволяет значительно повысить выход целевого продукта.