Способ получения -мидов-нуклеозид-5-трифосфатов

П: а !то т,1.. Н,а НЕСЬаЯ..ио,в,:а Ым 1

Союз Соеетсюа

Соцмалмстимесимх

Раструб(тмк

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ (il) 616265 * т

К АВТОРСКОМУ СВИДВТВДЬСТВУ (6!) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 22.04,74 (21) 2016 96 2/23-04

2 (Sl) M. Кл.

С 07 H 19/00 с присоединением заявки № (23) Приоритет— (43) Опубликовано 25,07.78,Бюллетень № 27 (45) Дата опубликования описания 20.06.78

Государственна(й комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

{53) УЙК 547,963,32, .07(088.8) (72) Авторы изобретения

Г, Т, Бабкина и Ll Г. Кнорре (71) Заявитель

Новосибирский институт органической химии

Сибирского отделения АН СССР (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ -АМИДОВ

Н УКЛЕОЗИД-5 -ТРИФОСФАТОВ

-фенилендиамин, хлоргидрат 1, 10-диамино-7,8,9, 10 тетрагидронафталина, тт -аэиданилин, имидаэол. Выход g -амиI нов нуклеоэид-5 трифосфатов составляет

85-90%, Пример 1, Получение g -анилида

1 аденозин-5 трифосфата.

Реакцию водорастворимого карбодиимида с аденоэин-5 -трифосфатом

I (АТФ) проводят в термостатированной кювете с погруженными в нее стеклянным и каломельным электродами для измерения рН среды с помошью потенциометра ЛПУ-01, Реакционная смесь содержит 45 мкмоль АТФ, 380 мг водорастворимого карбодиимида, объем peagционной смеси 15 мл, температура 11 С. рН 5,6 поддерживают при непрерывном подтитровывании 0,5 н. соляной кислотой, контролируя рН с помошью потенциометра

ЛПУ-01, Через 30 мин добавляют 0,5 мл анилина.

Реакционную смесь наносят на колонку (К 100 мл) с ииэтиламинээтилцеллклозой (ДЭАЭ-целлюлозой) в бикарбоПредлагается способ получения новых соединений, которые могут найти применение в биологической химии и фармацевтической промышленн ости.

Нуклеозид-5 -трифосфаты обычно при( меняются в качестве промежуточных веществ в синтезе различных лекарственных препаратов и витамииов(1).

Предлагаемые -амиды нуклеозид-5-трифосфаты обладают повышенной реакционной способностью.

Способ получения )(-амидов нуклеозид-5 -грифосфатов, заключается в том, что ( нукле озид-5 — трифосфат обрабатывают !

15-20-кратным избытком водорастворимого карбодиимида в водной среде при рН 5,0-6,0 и температуре 10-15 С с последуюшей обработкой амином алифатического или ароматического ряда или азидом. 20

В качестве аминов алифатического или ароматического ряда или азидов обычно испол ьзуют этилен ди амин, гексамети"1 лендиамии, ацилин, бензиламнн, (P -фенилэтиламин, циклогексиламин, морфолин, 25.»»» 1а иа.пммиа». °:а а» аи»

f ъ„ .. и С : й< » !

6 16265 натной форме и хроматографируют в линейном градиенте концентрации триэтиламмонийбикарбонатного буфера (рН 7,5), Концентрация буфера в смесителе 0,01 М, в резервуаре - 0,3 М. Объем смесителя и резервуара по 1 л, Скорость элюиро- 5 вания 30 мл/час, объем фракций 12 мл.

Фракции пика, соответствующие продукту, собирают и упаривают на ротационном ис0 парителе при 30 С.

Полученный продукт анализируют мето-10 дом хроматографии на бумаге, проведением кислотного гидролиза, снятием

УФ-спектров и спектров SIMP (5 Г, Пример 2 Получение g --бенэиламида гуаноэин-5 трифосфата.

Реакцию водорастворимого карбодиимида с гуанозин-5 трифосфатом (ГТФ) проводят в термостатированной кювете с погруженными в нее стеклянным и каломель. ным электродами для измерения рН среды с помощью потенциометра ЛПУ-01, Реакционная смесь содержит 45 мкмоль ГТФ, 380 мг водорастворимого карбодиимида, объем реакционной смеси 15 мл, темпе25 ратура 11 С, рН 5,6 поддерживают при непрерывном подтитровывании 0,5 н. соляной кйслотой, контролируя рН с помощью потенциометра ЛПУ-01, Через 30 мин добавляют 5 ммоль (0,5 мл) бензиламина.

Реакционную смесь наносят на колонку (> 100 мл) с ДЭАЭ-целлюлозой в бикарбонатной форме и хроматографнрую в линейном градиенте концентрации триэтиламмонийбикарбонатного буфера (рН 7,5). Концентрация буфера в смесителе 0,01 М, в резервуаре 0,3 М, Объем смесителя и резервуара по 1 л, Скорость элюирования 30 мл/час, объем фракций

IO 2 мл, Фракции пика, соответствующие продукту, собирают и упаривают на ротао ционном испарителе при ЗО С, Полученный продукт анализируют методом хроматографии на бумаге, прове45 дением кислотного гидролиза, снятием

УФ-спектров и спектров ЯМР (2" Р).

Пример 3. Получение g -амида

l аденозин-5 - трифосфата 1, Реакцию водорастворимого карбодиимида с аденоэин-5 - трифосфатом проводят . в термостатированной кювете с погруженными в нее стеклянным и каломельным электродами для измерения рН среды с помощью потенциоме тра ЛПУ-Ol, Реакционная смесь содержит 45 мкмоль АТФ, . 380 мг в одораств оримого кар бо дии ми да, объем реакционной смеси 15 мл, тем, пература 11 С, рН 5,6 поддерживают при непрерывном подтитровывании 0,5 и, соляной кислотой, контролируя рН с помощью потенциометра ЛПУ-01, Через 30 мин добавляют 5 ммоль (1, 17 г) основания 1, 10-диамино-7,8,9, 10-тетраги дронафталина, Реакционную смесь наносят на колонку (100 мл) с йЭАЭ-целлюлозой в бикарбонатной форме и хроматографируют в линейном градиенте концентрации триэтиламмонийбикарбонатного буфера (рН 7,5) „

Концентрация буфера в смесителе 0,01 М, резервуара О,ЗМ. Объем смесителя и резервуара по 1 л. Скорость элюирования

30 лят/час, объем фракции 12 мл. Фракции пика, соответствующие продукту, собирают и упаривают на ротационном исо парителе при 30 С.

Полученный продукт анализируют методом хроматографии на бумаге, проведением кислотного гидролиза, снятием

УФ-спектр ов, Пример 4. Получение g - (Я-азидо) анил и да а дено зин-5 тр ифосфата ) .

Реакцию водорастворимого карбодиимида ( с аденозин«5 -трифосфатом проводят в термостатированной кювете с погруженными в нее стеклянным и каломельным электро дами для йзмерения рН среды с помошью потенциометра ЛПУ-01, Реакционная смесь содержит 45 мкмоль АТФ, 380 мг водорастворимого карбодиимида, объем реаокционной смеси 15 мл, температура

11 С, рН 5,6 поддерживают при непрерывном подтитровывании 0,5 н. соляной кислотой, контролируя рН с помощью потенциометра ЛПУ-01. Через 30 мин добавляют 5 ммоль (0,67 г) g -аэиданилина.

Реакционную смесь наносят на колонку (V 100 мл) с 0ЭАЭ-целлюлозой в бикарбонатной форме и хроматографируют в линейном градиенте концентрации триэтиламмонийбикарбонатного буфера (рН 7,5)

Концен трация буфера в смесителе 0,01 М, в резервуаре 0,3 М. Объем смесителя и резервуара по l л. Скорость элюирования 30 мл/час, объем фракций 12 мл.

Фракции пика, соответствующие продукту, собирают и упаривают на ротационном испарителе при 30 С, Полученный продукт анализируют методом хроматографии на булыге, прове дением кислотного гид олц;м, снятиел1

УФ-спек тров, Реакция и дет и 0 слепую:"и.й схеме:

616265

Составитель В, Жестков

Редактор О, Кузнецова Техред А. Богдан Корректор Д. Мельниченко

Заказ 4016/25 Тираж 559 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Рауп ская нлб„д. 4/5

Филиал ППП Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 о и температуре 10-15 С и амином али-, фатического или ароматического ряда или ази дом.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что в качестве аминов алифатического или ароматического ряда или азидов используют етилендиамин, гексаметилен, анилин, бенэиламин, 3 - енилэтиламин, циклогексилмшн, морфолин, 11 -фенилендиамин, хлоргидрат

1, 10-диамино-7,8,9, 10-тетрагипронафталина, Ц -аз иданилин, ими даэол, Источники информации, принятые во

5 внимание при экспертизе:

1, Кочетков Н, К, и ир. Химия углеводов, М„"Химия", 1967,