Способ получения биотина

 

) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОТИНА, предусмаз ривающий культивирование гриба вида Rhizopus delemar на питательной среде, содержащей глюкозу, пептон, одноэамещенный фосфат калия и водопроводную воду, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода биотина и удешевления процесса его получения, из вида Rhizopus delemar используют.штакм BKMF1428 , при этом культивирование ведут на питательной среде следующего состава, мас.%: 4,00-5,00 Глюкоза Пептон 6,00-7,50 Одноз๫ещенный фосфат 0,03-0,05 калия ВодопроводОстальное ная вода

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ .

РЕСПУБЛИН

3(50 С 12 P 1/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCNOIW <ЭИ»»ТВЪСТВУ (54 ) (57 ) СПОСОБ ПОЛУЧБНИЯ БИОТИНА, предусматривающий культивирование гриба вида Bhizopus delemar íà пита- тельной среде, содержащей глюкозу, пептон, однозамещенный фосфат калия и водопроводную воду, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью увеличения выхода бнотина и удещевления процесса его получения, из вида Rhizopus delemar используют.штама ВКИГ1428, при этом культивирование ведут на питательной среде следующего состава, мас.Ф:

Глюкоза 4,00-5,00

Пептон 6,00-7,50

Однозамещенный фосфат калия О, 03-0,05

Водопроводная вода Оставь ное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ ССОР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21 ) 3439977/28 -13 (22) 18.05.82 (46) 15.10.83. Бюл.. «38 (72) Л.И.Воробьева, Е.В.Щелокова и Е.С.Наумова (71 ) Московский ордена Ленина, ордена Октябрьской Революции и ордена

Трудового Красного Знамени государственный университет юк. М.В.Ломоносова (53) 577.164.18{088.8) (56) 1.Авторское свидетельство Ссср .

« 420668, кл. С 12 .N 1/20, 1972.

2. Ivghara S. Tochikura T. Ogata K. Studieson biosynthesis Part N.

Conversion of destiobiotintobiotin

by various kinds of microorganisms."Agricultural аиа Biological Chemistryê» 1966» «4». р 385, su„„1047956 A

1047956

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а .именно к способу получения биотина.

Известен способ получения биотина путем культивирования штамма act,inomyces iawendofusens 1586 в тече- 5 ние 7 сут при 28 С с последующим определением биотина в культуральной жидкости 1 J.

Известен также способ получения

6 нот и на, преду сма три вающий к уль тивирование гриба вида Rhi zopus delemar на питательной среде, содержащей, глюкозу, пептон, однозамещенный фосфат калия и роду. Используют штамм Rhizopus delemar H, который выращивают 5 сут на питательной среде, содержащей на 1 л водопроводной воды 10 г глюкозы, 10 r пептона, 10 г гидролизата каэеина, 0,5 г однозамещенного фосфата калия, 0,5 г двузамещенного фозфата калия, 0,5 г хлорида калия, 0,5 г сульфата магния, 0,2 г цистина, 0,2 r метионина, 0,2 r тауфина, 50 мг дестиобиотина. Количество биотина в культуральной жидкости 250 мкг/л (2 ).

Недостатками известного способа являются низкий выход биотина и высокая стоимость процесса его получения, связанная с использованием для приготовления питательной среды ЗО больших количеств дорогостоящих компонентов.

Цель изобретения — увеличение выхода биотина и удешевление процесса его получения.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения биотина, предусматривающему культивирование гриба вида Rhizopus d.elemar на питательной среде, содержащей глюкозу, пептон, одно замещенный фосфат калия и водопроводную воду, иэ вида Rhizopuв delemar используют штамм ВКМР-1428, при этом культивирование ведут на питательной среде 45 следующего состава, мас,Ъ:

Глюкоза 4,00-5,00

Пептон 6,00-7,50

Одноэамещенный фосфат калия 0,03-0,05 50

Водопроводная вода Остальное

Штамм Rhizopus delemar хранится во Всесоюзной коллекции микроорганизмов и имеет следующую характеристику.

Риэоиды коротко и слабо раэветвлены, немногочислены. Столоны слабо выражены. С тило спора н гие нос цы прямые и извилистые 10-20 мкм в диаметре, 60 простые, иногда с раздвоенным, тройчато-неправильно-мутойчатым вэдутием в месте ответвленйя, буроватые. Апофиза блюдцевидная. Стилоспорангии до 250-300 мкм в диаметре. Колонка чаще ширококоническая или приплюсну= то- шаровидная 50-120- (150) 50-". "0-(140) мкм. Спорангиоспоры (б )-8-12-(14)" 6,5-8 мкм, часто неправилЬной формы до 30 мкм длины или в диаметре. Спорангиоспоры более или менее хорошо исчерчены и сильно угловатые (особенно при старении культуры ).

Термотолерантные, выдерживают температуру 42-43 С.

Штамм растет на богатых средах.

В качестве источника углерода используют глюкозу, сахароэу, глицерин.

Требует сред, богатых аминным азотом (пептон, гидролиэат казеина).B качестве источника азота может также испольэовать аспарагин. На нитратах и амонийных солях растет плохо. К витаминам и ростовым факторам нетребователен.

Для получения биотина штамм Rhizopus ?е1етаг ВКМГ-1428 выращивают на питательной среде, содержащей глюкозу, пептон и одноэамещенный о фосфат при 30 С в течение 3 сут.

П р и м e p 1. Гриб В? з корив

delemar BKNF-1428 выращивают на скошенном сусло-агаре 5 сут. Полученным споровым материалом засевают колбы емкостью 750 мл, содержащие 50 мл среды следующего состава, мас,Ъ: (рН среды 5,0):

Глюкоза 4,00

Пептон 6,00

0,03

Вода водопроводная

Остальное

Колбы с посевом помещают на качалку и культивируют при 220 об/мин и 30 С в течение 3 сут, после чего мицелий отделяют фильтрованием нод вакуумом и определяют количество биотина в культуральной жидкости известным микробилогическим методом с Lactobacillusplantar в качестве тест-культуры. Культуральная жидкость содержит 510 мкг/л биотина.

Пример 2. Споровым материалом, полученным как в примере 1, засевают колбы объемом 750 мп, содержащие 50 мл среды следующего состава, мас.Ъ (рН среды 5,0,:

Глюкоза 5,00

Пептон 7,50

КН2РО, 0,05

Вода водопроводная Остальное

Культивирование проводят на качалке при 220 об/мин и 30 С в течение 3 сут. Культуральную жидкость отделяют фильтрованием под вауумом и определяют в ней количество биотина микробиологическим способом. Культуральная жидкость содержит

600 мкг/л биотина.

Таким образом, предлагаемый способ получения биотина позволяет более

1047956

Составитель Т.Меленьева

Техред И.Метелева Корректор B.Гирняк

Редактор Т.Веселова

Заказ 7864/28 Тираж 523 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãoðîä, ул.Проектная, 4 чем в 2 раза увеличить выход биотина, удешевить процесс его получения за счет использования более дешевой малокомпонентной среды, при этом также значительно сократить время культивирования.