Способ определения вирулентности микобактерий туберкулеза

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУЛЕНТНОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА путем заражения морских свинок культурой микобактерий под твердую оболочку голодного мозга с последующим учетом поражения органов, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, учитывают появление параличей задних конечностей, и при появлении паралича до 19,2 дней после заражения определяют высокую степень вирулентности, на 19,3-24,1 день - среднюю степень вирулентности и йа 24,2-30 день - слабую степень вирулентности. § (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3360013/28-13 (22) 15.09.81 (46) 07.10.83. Бюл. 9 37 (72) О.. В. Гращенкова и М. П. Зыков (71) Ленинградский научно-исследовательский институт туберкулеза (53) 576.8.093.35(088.8) (56) 1. "Микробиологические методы исследования при инфекционных забо .леваниях . M., "Медицина", 1949, с. 117-120.

2. Зыков М. П., Поти С. Д. и Руле Е. Ускоренный метод определения вирулентности туберкулезных мико-. бактерий. — "Журнал гигиены, эпиде миологии, микробиологии и иммунобиологии", 1972, М 16, с. 397-403 (прототип).

„„SU„„104 1 А

И5П С 12 и 1/00 // С 12 é 1/00

С 12 R 1/32 (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУЛЕНТ.НОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА путем заражения морских свинок культурой мнкобактерий под твердую оболочку головного мозга с последующим учетом поражения органов, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью ускорения способа, учитывают появление параличей задних конечностей, и при появлении паралича до 19,2 дней после заражения определяют высокую степень вирулентности, на 19,3-24,1 день — среднюю степень вирулентности и на 24,2-30 день — слабую степень вирулентности.

1046281

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при бактериологическом обследовании больных туберкулезом.

Изнестен биологический способ определения нирулентности микобак" 5 терий туберкулеза, предусматривающий заражение подопытных животных возбудителем туберкулеза ннутримышечно, внутривенно, интратестикулярно или аэрогенно, после чего наблю- fp дают за животньпли н течение 3-5 мес. вплоть до их гибели с последующим их вскрытием, оценкой поражения внутренних органов, выделением микобактерий иэ органов и на основе этого заключением о вирулентности Во3будителя E1 ).

Однако этот способ сложен и ха-. рактеризуется низкой оперативностью, исследования, что приводит к снижению эффективности противоэпидемичес-ких мероприятий и удлиняет .сроки лечения больных.

Известен также способ определения вирулентности микобактерий; туберкулеза путем заражения морских свинок .культурой мико6актерий под твердую оболочку головного мозга с последующим учетом поражения органон 2 l.

Однако известный способ опредеЛения вирулентности также характери- зуется большой сложностью и продол-. жительностью.выполнения, обусловленными большим количеством учитываемых ,параметров. 35

Цель изобретения — ускорение способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определеI ния нирулентности микобактерий ту" беркулеза, включающему заражение морских снинок культурой микобактерий под твердую оболочку головного мозга и последующий учет поражения органов, учитывают появление парали- 45 чей задних конечностей, и при появлении паралича до 19,2 дней после заражения определяют высокую степень вирулентности, на 19,3-24,1 день среднюю степень вирулентности и на . 50

24,2-30 .день - слабую степень вирулентности. !

Пример. Эаражение морских свинок весом 250-450 г производят в дозе 0 1 мг влажного веса. Суспензию культуры готовят путем тщательного растирания последней в ступке .при постепенном добавлении стерильного физиологического раствора, доводя взвесь до концентрации 1 мг/мл.

Исследование каждого штамма проводят на четырех морских свинках примерно одинакового веса.

Заражение животных осуществляют следующим образом. В области теменного бугра выше глазной впадины спрана от срединной линии черепа освобождают от волос кожу и выщипывают шерсть. Предварительно дав глубокий наркоз и обработав место операции спиртом, делают разрез кожи размером 1,0-1,5 см, отстоящий на

0,5 см вправо от срединной лйнии и на 3 см вверх от задней глазной линии. Кожную рану расширяют скальпелем, надкостницу разрезают и тщательно отпрепаровывают, затем высушивают стерильным тампоном. Справа от срединной плоскости, чтобы не повредить продольный венозный синус, с помощью конического фиссурного бора нысверливают углубление, не проникая в полость черепа. Инфекционный материал н объеме 0,1 мл вводят непосредственно под тнердую обо лочку мозга. Для этого последнюю прокалывают в сделанном углублении иглой шприца и сразу, опустив шприц горизонтально, продвигают, иглу вбок на 1 см и наружу под оболочку и медленно нпрыскивают суспенэию. Иглу выводят иэ полости черепа быстрым движением, что предупреждает вытекание введенного материала. С целью предупреждения нытекания крони или ликвора отнерстие в кости черепа на 5-10 с прижимают мягкими тканями.

Края раны стягивают лигатурными шнами с помощью обычной хирургической иглы, которые затем смазывают йодом или клеолом.

Вирулентность Средний срок появления параличей, дни

Весьма высокая

17,0

17,1-19р2

Высокая

Средняя

Слабая

19,3-24,1

24,2-27,0

Не менее 27,1

Весьма слабая

После заражения свинок помещают в клетку и один раэ н день оценивают их состояние. При появлении параличей задних конечностей пораженную параличем снинку извлекают из клетки и забивают путем создания воздушной эмболии, зарегистрирован число дней от момента заражения до появления паралича. Если через месяц после заражения у всех или части свинок не развиваются параличи, их также забивают, считая, что Паралич развился на тридцатый день.

Оценка степени нирулентности по средней геометрической срока появленин параличей представлена н таблице.

104б281

Ю

Составитель П. Бонарцев

Редактор Г. Безвершенко Техред:И.Метелева Корректор A. Повх

Заказ 7бб4/24 Тираж 523

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Подписное

Ф

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная„ 4

Использование предлагаемого способа в 3-5 раз по сравнению с анологами и в 2 раза по сравнению с прототипом позволяет сократить сроки наблюдения за подопытными животными и объемы исследований.