Лечебно-профилактический препарат биосептин

Полезная модель относится к биотехнологии, а именно к производству биопрепаратов-пробиотиков в мазевой, гранулированной или капсулированной формах. Техническим результатом полезной модели является повышение эффективности действия препарата-пробиотика и расширение сферы его применения путем создания мазевой, гранулированной и капсулированной форм этого препарата для профилактики и лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, кожных заболеваний и урогенитальных инфекций. Лечебно-профилактическом препарате БИОСЕПТИН включает гелевую основу с распределенным в ее массе активным компонентом, в качестве которого используют биомассу бактерий рода Bacillus. Кроме того, препарат дополнительно содержит консервант, в качестве гелевой основы он содержит агар-агар, смешанный с биомассой спор бактерий рода Bacillus, имеющей титр в конечном препарате не менее! О⁶ кл/г, а готовая форма лечебно-профилактического препарата выполнена в виде гранул, или помещена в одноразовую цилиндрическую пустотелую разъемную капсулу, или емкость с крышкой при следующем содержании компонентов препарата (масс.%): консервант 5,0-20,0 агар-агар, содержащий бактерии рода Bacillus с титром не менее 10 ⁶ спор/г остальное до 100%. 6 з.п.ф., 3 табл., 3 ил.

Полезная модель относится к биотехнологии, а именно к производству биопрепаратов-пробиотиков в мазевой, гранулированной или капсулированной формах.

Традиционная терапия бактериальных заболеваний включает широкое использование антибиотических препаратов. Однако указанные препараты часто токсичны, обладают неспецифическим бактерицидным действием, в том числе подавляют эндогенную микрофлору, что приводит к развитию различных осложнений, например дисбактериозов. Поэтому в последнее время предложены новые антибактериальные препараты, обладающие выраженной активностью против патогенных и условно-патогенных бактерий и не нарушающие микробиоценозов человека. В настоящее время существует целый ряд биопрепаратов из бактерий рода Bacillus, подавляющих рост патогенных и условно-патогенных бактерий: Биоспорин, Бактиспорин, Бактисубтил, Ветом, Субалин, Ветомгин, Ветоцил и др. Их терапевтическая эффективность определяется комплексным действием широкого набора метаболитов, которые способны продуцировать живые микробные клетки штаммов бактерий, входящих в состав препаратов. Хорошим лечебным эффектом обладают препараты на основе бактерий рода Bacillus для лечения гнойно-воспалительных заболеваний и бактериальных вагинозов, обладающие сравнимой с антибиотиками эффективностью и не дающие осложнений в виде аллергий и дисбактериозов.

Аналогом заявляемой полезной модели является известный лечебно-профилактический биопрепарат Бактиспорин на основе антагонистически активного штамма Bacillus subtilis 3H для лечения широкого круга заболеваний, выпускаемый в ампулах и используемый перорально в виде раствора (Патент РФ №21303166, кл. А 61 К 35/74, С 12 N 1/20, опубл. 20.05.1999.).

При такой препаративной форме нужны высокие дозы препарата для достижения нужного эффекта лечения при некоторых видах заболеваний, например,

дисбактериозе, бактериальном вагинозе. Жидкая форма препарата неудобна при накожном, ректальном или вагинальном применении.

Ближайшим аналогом заявляемой полезной модели является средство для лечения урогенитальных заболеваний, включающее введение препарата Биоспорина в виде тампонов или свечей (Патент РФ №2131258, С 12 N 1/20, А 61 К 35/74, опубл. 10.02.99). Суппозиторий Биоспорин впервые был предложен для лечения кишечного дисбактериоза и состоит из двух штаммов: Bacillus subtilis 3 - аэробного микроорганизма и Bacillus licheniformis 31 - анаэробного микроорганизма (4). Такое сочетание штаммов было предложено в связи с тем, что в просвете кишечника существуют условия для жизнедеятельности как аэробных микроорганизмов (тонкий кишечник), так и анаэробных (толстый кишечник). В просвете урогенитального тракта (терапевтическая область) преимущественно существует аэробная или факультативно аэробная микрофлора. Анаэробная микрофлора существует в пристеночной области слизистой урогенитального тракта за счет своих адгезивных свойств (т.е. способности прикрепляться к клеткам, выстилающим слизистую).

Однако суппозитории применяют ректально или вагинально и неудобны при накожном или пероральном применении.

Техническим результатом полезной модели является повышение эффективности действия препарата-пробиотика и расширение сферы его применения путем создания мазевой, гранулированной и капсулированной форм этого препарата для профилактики и лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, кожных заболеваний и урогенитальных инфекций.

Указанный технический результат достигается тем, что в лечебно-профилактическом препарате БИОСЕПТИН, включающем гелевую основу с распределенным в ее массе активным компонентом, в качестве которого используют биомассу бактерий рода Bacillus, согласно полезной модели, он дополнительно содержит консервант, в качестве гелевой основы он содержит агар-агар, смешанный с биомассой спор бактерий рода Bacillus, имеющей титр в конечном препарате не менее 10 ⁶ кл/г, а готовая форма лечебно-профилактического препарата выполнена в виде гранул, или помещена в одноразовую цилиндрическую пустотелую разъемную капсулу, или емкость с крышкой при следующем

содержании компонентов препарата (масс.%):

агар-агар, содержащий бактерии рода

Биомасса спор бактерий рода Bacillus содержит штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В 7048, и/или штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В 7092, и/или штамм бактерий Bacillus licheniformis ВКПМ В 7038.

Причем, биомасса спор разных штаммов бактерий рода Bacillus в препарате содержится в равных соотношениях.

Разъемная пустотелая капсула выполнена из материала, плавящегося под действием температуры организма, например из желатина, вместимостью от 0,5 до 3 г.

Емкость под мазевую форму выполнена из солцезащитного стекла или полимерного материала, а содержание препарата в емкости находится в диапазоне от 35 г до 500 г.

Кроме того, на поверхность гранул препарата может быть дополнительно нанесен энтеросорбент с получением частиц в готовой форме размером от 0,1 до 3,0 мм. В качестве энтеросорбента используют активированный уголь, или карболонг, или ацетилфталилцеллюлозу в количестве не менее 10% от массы препарата.

На фиг.1 представлена в разрезе гранулированная форма препарата БИОСЕПТИН. На фиг.2 изображена упаковка с мазевой формой препарата БИОСЕПТИН. На фиг.3 представлена капсулированная форма препарата БИОСЕПТИН.

Штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В 7048 относится к аэробам. Это грамположительная бактерия, образующая споры. Штамм размножается при 15-50°С. Оптимальный рост наблюдается при температуре 36-37°С. Штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В 7048 продуцирует антибиотик широкого спектра действия, подавляющий рост и развитие грибков, стафилокков, стрептококков и синегнойной палочки.

Штамм бактерий Bacillus licheniformis ВКПМ В 7038 относится к аэробам.

Это грамположительная палочка, способная образовывать споры. Штамм бактерий Bacillus licheniformis ВКПМ В 7038 продуцирует антибиотик широкого спектра действия, подавляющий рост грибков, стафилокков, стрептококков и синегнойной палочки.

Рекомбинантный штамм бактерий Bacillus subilis ВКПМ В 7092 получен путем трансформации штамма Bacillus subtilis ВКПМ В 7048 рекомбинантной плазмидой ДНК рВМВ 5, содержащий ген альфа-2 интерферона. Полученный штамм IC-16 депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) ГНИЙ Генетика под номером ВКПМ В 7092. Плазмида рВМВ 5 способна реплицироваться в бациллах и содержит в своем составе ген альфа-2- интерферона человека, промотор для экспрессии этого гена, сайт посадки рибосом (SD-сайт) и сигнальный пептид альфа-амилазы В. amyloliquefaciens для секреции интерферона в культуральную среду, а также несущую устойчивость к канамицину.

Исследована антибиотическая активность производственных штаммов Bacillus subtilis ВКПМ В 7048. ВКПМ В 7092 и Bacillus licheniformis ВКПМ В 7038 по отношению друг к другу как составных частей комплексных препаратов. При этом можно сделать вывод, что антагонизм клеток Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis не является существенной помехой для их совместного использования в препаратах.

Гранулированная форма препарата БИОСЕПТИН выполнена в виде монолитной частицы 1 (фиг.1), состоящей из гелеобразной субстанции препарата, распадающейся под действием влаги, органических кислот и температуры организма в желудочно-кишечном тракте, следующего состава (масс.%):

агар-агар, содержащий бактерии рода

Частица 1 покрыта слоем 2 энтеросорбента. В качестве энтеросорбента используют активированный уголь, или карболонг, или ацетилфталилцеллюлозу в количестве не менее 10% от массы препарата.

Мазевая форма препарата БИОСЕПТИН имеет следующий состав (масс.%):

агар-агар, содержащий бактерии рода

Мазевую форму 3 препарата БИОСЕПТИН фасуют в емкость 4 (флакон) с крышкой 5, которая выполнена из солцезащитного стекла или полимерного материала, а содержание препарата в емкости 4 находится в диапазоне от 35 г до 500 г.

Капсулированная форма 6 препарата БИОСЕПТИН имеет следующий состав (масс.%):

агар-агар, содержащий бактерии рода

которую фасуют в разъемную пустотелую капсулу 7, выполненую из материала, плавящегося под действием температуры организма, например из желатина, вместимостью от 0,5 до 3 г.

Хранят гранулированную, мазевую и капсулированную формы препарата БИОСЕПТИН при температуре 0-10°С.

Пример 1. Данные по исследованию препарата БИОСЕПТИН Действие препарата БИОСЕПТИН в мазевой форме состоит из двух этапов. На первом этапе вещества, содержащиеся в агаре и обладающие антисептическими свойствами - бацитрацины и лихениформины, уничтожают присутствующие на обработанной поверхности аэробные и анаэробные, грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы, такие как Sh. Sonnei, S. typhimurium, St. Aureus, Cand. albicicans, а также другие виды бактерий, вирусов и грибков. Протеолитические ферменты являющиеся продуктами жизнедеятельности указанных выше микроорганизмов и содержащиеся в агаре лизируют некротические ткани, не нанося вреда живым клеткам

На втором этапе действия споры, имеющихся в мази бактерий, трансформируются в вегетативные формы и обеспечивают пролонгирующее действие препарата, проявляя антагонизм относительно внешней патогенной и

условно-патогенной микрофлоры, а также обеспечивая эффекты, полученные на первом этапе. Кроме того, поскольку бактерии, входящие в состав мази являются аэробами, то они образуют на поверхности раны пленку, которая предотвращает проникновение инфекционных агентов полость раны. В виду выше сказанного раны обработанные мазью Биосептин перевязывать не обязательно.

Предварительные испытания мази, проводившиеся на животных, показали, что она не обладает токсикогенными, аллергенными, тератогенными, мутагенными, эмбриотоксическими, местнораздражающими и канцерогенными свойствами.

Мазь Биосептин позволяет обеспечить быстрое заживление ран в далеких от асептики условиях, что принципиально важно для животноводства, поскольку не всегда возможна перевязка животных, а раны обработанные мазью Биосептин перевязки не требуют. Механизм эффективного действия мази связан еще и с тем фактом, что пути распространения антагонистически активных бактерий, содержащихся в ней, совпадают с возможными путями распространения инфекции в организме животного.

Из проведенных нами и другими исследователями экспериментов следует, что эффективность мази Биосептин существенно повышается в случае если защитные системы макроорганизма, включая иммунитет работают исправно. В настоящее время установлено, что животные и люди со здоровым иммунитетом практически не встречаются. В этой связи, прежде чем заниматься лечением раны ветеринарному врачу желательно провести курс коррекции иммунного статуса животного. Данный эффект можно получить путем проведения «субтилитерапии» гранулированными или капсулированными препаратами БИОСЕПТИН. Экспериментально было установлено, что применение некоторых штаммов Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis при парентеральном и пероральном пути введения обеспечивает индукцию эндогенного интерферона в организме животных (Табл. 1). Индукция эндогенного интерферона обеспечивает антивирусную и антибактериальную защиту организма животных. Эндогенный интерферон обеспечивает лечебный эффект в опытах на мышах, инфицированных Sallmonella typhimurium.

Немаловажно также для успешного лечения ран предварительная субтилитерапия с целью увеличения фагоцитарной активности лейкоцитов крови (Табл. 2) и нормализации микробиологического состава желудочно-кишечного тракта (Табл. 3).

Для проведения процедуры субтилитерапии в деловой практике ветеринарии в настоящее время успешно применяются ветеринарные лечебно-профилактические препараты серии БИОСЕПТИН в гранулированной или капсулированной формах. В таблице 3 приведены данные одного из поставленных экспериментов, целью которого было выявление закономерностей в изменении микробиологического циноза в желудочно-кишечном тракте крупного рогатого скота.

Из представленных в Таблице 3 данных видно, что микрофлора в желудочно-кишечном тракте полностью нормализовалась.

Пример 2. Испытание мази БИОСЕПТИН при лечении гнойных ран у крупного рогатого скота

Для определения эффективности мази Биосептин сформировали две опытных и контрольную группы из крупного рогатого скота в возрасте 1-2 месяца в количестве 5 голов в каждой.

Раны у животных 1-й опытной группы обрабатывали мазью Биосептин с кратностью 1 раз в день в сочетании с традиционной схемой лечения (введение антибактериальных препаратов, витаминов и др.).

Раны животных 2-й опытной группы обрабатывали мазью Биосептин с кратностью 1 раз в день до выздоровления. Животных контрольной группы лечили следующими препаратами: линимент синтомицина 10%, ихтиоловая мазь, фракция АСД, березовый деготь и др.

Результаты исследований. Критериями оценки эффективности действия препарата служили продолжительность и характер заживления ран.

У животных 1-й опытной группы на вторые сутки после применения мази Биосептин в сочетании с традиционной схемой лечения уменьшилось выделение гнойного экссудата из ран, исчез зловонный запах, снизилась болезненность, уменьшилась отечность вокруг ран. На (3-4)-е сутки полностью прекратилось выделение экссудата, полость ран очистилась от гнойной массы, ткани уплотнились, и произошла грануляция по всей поверхности ран. Размер ран уменьшался в среднем со скоростью до 0,2 см в сутки. На 4-е сутки по окружности ран появился ободок эпителизации. В зависимости от величины раны и ее состояния заживление полностью завершилось на (6-8)-е сутки. Заживление ран происходило по вторичному натяжению.

У животных 2-й опытной группы на (4-5)-е сутки образовались грануляции розового цвета по всей поверхности ран, но видимый процесс заживления по сравнению с 1-й опытной группой был более длительным. Полное заживление ран по вторичному натяжению наступило в среднем к 10-му дню.

У животных контрольной группы раны, имеющие небольшое количество мертвых тканей, покрылись грануляциями на 5-й день (значительно позднее это происходило при ранах с обширной зоной нежизнеспособных тканей). Полное освобождение ран от мертвых тканей и сплошное покрытие их грануляционной тканью происходило через 2 недели, после чего нарастал эпителий. Полное заживление наступало в среднем к 14-16 дню.

Заключение. Мазь Биосептин обладает выраженным терапевтическим действием при лечении гнойных ран. При применении мази Биосептин в сочетании с традиционной схемой лечения сокращается продолжительность лечения в среднем на 8 дней, в чистом виде на 5 дней по сравнению с аналогами из контроля. Применение мази Биосептин без традиционной схемы лечения 1 раз в день увеличивало продолжительность лечения на 3 дня по сравнению с 1-й опытной группой. Оптимальной схемой применения мази Биосептин является назначение ее раз в сутки в сочетании с традиционной схемой лечения.

Применение мази Биосептин в сочетании с традиционной схемой лечения ускоряет процесс заживления гнойных ран за счет сокращения фазы самоочищения, уменьшается количество обработок, при этом снижаются затраты на перевязочные материалы, медикаменты и затраты труда ветеринарных работников

Пример 3. Испытание мази БИОСЕПТИН при лечении кандидомикозов и дерматитов у собак

Для определения эффективности мази Биосептин при лечении кандидомикозов и дерматитов у плотоядных исследования проводились в УНПЛ при факультете ветеринарной медицины НГАУ. Для этого сформировали 3 опытных и 1 контрольную группы из собак в возрасте от 6 месяцев до 2-х лет в количестве 5 животных в каждой.

У животных 1-й опытнй группы пораженные части тела обрабатывали мазью Биосептин 2 раза в день в сочетании с традиционной схемой лечения (обработка 3% раствором перекиси водорода и 10% эмульсией синтомицина) до выздоровления.

Животных 2-й опытной группы обрабатывали мазью Биосептин при кандидомикозах 2 раза в день с интервалом 12 часов в сочетании с противогрибковыми препаратами (нистатин, леворин) до выздоровления.

Животным 3-й опытной группы применяли мазь Биосептин 2 раза в день с интервалом 12 часов до выздоровления.

Животных контрольной группы лечили следующими препаратами:

линимент синтомицина 10%, перекись водорода 3%.

Результаты исследований. Критериями оценки эффективности действия препарата служили продолжительность лечения, выраженность течения и степень рецидивирования процесса.

У животных 1-й опытной группы на 5-й день с момента начала лечения в сочетании с традиционной схемой наблюдалось снижение общего экссудативного процесса, место воспаления

очищалось от корочек экссудата, зуд не выражен, температура слегка повышена, отмечалось формирование демаркационного регенеративного валика. На 7-й день лечения происходило заживление раны по первичному натяжению и формирование Рубцовых спаек.

У животных 2-й опытной группы на 5-е сутки не отмечалась болезненность участков воспаления, экссудация носила незначительный серозный характер, среднее время заживления (9±1,4) дня. Заживление шло по первичному натяжению с восстановлением шерстного покрова животных.

У животных 3-й опытной группы на 5-й день после лечения отмечали отсутствие местной температуры, гнойного экссудата. Болезненность участка не выражена. Заживление наблюдалось на (6±1,3) день с образованием корочек и полным восстановлением шерстного покрова.

У животных контрольной группы отмечено удлинение сроков заживления до (9±1,6) дня. На 5-й день с момента лечения вялотекущее серозно-катаральное воспаление, зуд кожи выражен менее чем до начала лечения. Заживление под струпом.

При наблюдении за животными в течение 30 дней после окончания лечения не выявлено случаев рецидивов и отмечалось восстановление шерстного покрова у животных опытных групп. В контрольной группе выявлено 20% возникновения рецидивов.

Заключение. Мазь Биосептин обладает выраженным терапевтическим действием при лечении. Применение мази Биосептин в сочетании с традиционной схемой снижает продолжительность лечения и заживления, профилактирует рецидивы. Применение мази Биосептин как этиопатогенетического средства, позволяет использовать данный препарат, как единственное средство при лечении гнойно-катаральных дерматитов. Включение мази Биосептин в традиционные схемы лечения кандидомикозов значительно улучшает течение процесса и профилактирует развитие ассоциируемых форм дерматитов.

Наиболее оптимальной схемой лечения гнойно-катаральных дерматитов является применение мази Биосептин 2 раза в день с интервалом 12 часов в течение 7 дней.

Оптимальной схемой лечения кандидомикозов мазью Биосептин является следующая - обработка 2 раза в день с интервалом 12 часов в течение 10 дней.

1. Лечебно-профилактический препарат, включающий гелевую основу с распределенным в ее массе активным компонентом, в качестве которого используют биомассу бактерий рода Bacillus, отличающийся тем, что он дополнительно содержит консервант, в качестве гелевой основы он содержит агар-агар, смешанный с биомассой спор бактерий рода Bacillus, имеющей титр в конечном препарате не менее 10 ⁶ кл/г, а готовая форма лечебно-профилактического препарата выполнена в виде гранул или мази, которая помещена в одноразовую цилиндрическую пустотелую разъемную капсулу или емкость с крышкой при следующем содержании компонентов препарата, мас.%:

2. Лечебно-профилактический препарат по п.1, отличающийся тем, что биомасса спор бактерий рода Bacillus содержит штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В 7048, и/или штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В 7092, и/или штамм бактерий Bacillus licheniformis ВКПМ В 7038.

3. Лечебно-профилактический препарат по пп.1 и 2, отличающийся тем, что биомасса спор разных штаммов бактерий рода Bacillus в препарате содержится в равных соотношениях.

4. Лечебно-профилактический препарат по п.1, отличающийся тем, что разъемная пустотелая капсула выполнена из материала, плавящегося под действием температуры организма, например из желатина, вместимостью от 0,5 до 3 г.

5. Лечебно-профилактический препарат по п.1, отличающийся тем, что емкость под мазевую форму выполнена из солнцезащитного стекла или полимерного материала, а содержание препарата в емкости находится в диапазоне от 35 г до 500 г.

6. Лечебно-профилактический препарат по п.1, отличающийся тем, что на поверхность гранул препарата дополнительно нанесен энтеросорбент с получением частиц в готовой форме размером от 0,1 до 3,0 мм.

7. Лечебно-профилактический препарат по п.1, отличающийся тем, что в качестве энтеросорбента используют активированный уголь или карболонг, или ацетилфталилцеллюлозу в количестве не менее 10% от массы препарата.