Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма бактерий, используемого для биологической очистки промышленных сточных вод, содержащих роданиды, в частности коксохимических производств.

Известны штаммы роданразрушающих микробов, близких к роду Pseudomonas non ligusactes и сходных с Bact.

Thiocyanoxi daus Happold.

Морфологические признаки штаммов: коррткие, мелкие, утолщенные палочки, напоминающие кишечные, но размером меньше в 4-5 раз.

Длина клеток 0,2-0,5 мкм. Неподвижны. Окрашиваются по Граму отривЂ” цательно или в неопределенный розовато-голубой цвет. физиологические признаки. Аэроб.

Оптимальная температура жизнедеятельности 25-30 С. Оптимальный рН 6,87,2.

Культуральные свойства. При росте на агаризованной элективной среде образует колонии в виде росинок.

На мясо-пептонном агаре вырастают подобные колонии, но более крупные, при этом среда:окрашивается в желтозеленый цвет, После культивирования на мясо-пептонном агаре теряет способность окислять роданиды.

Биохимические свойетва. Не изменяют молока и сахары, не продуцируют индол и сероводород, не разжижают мясо-пептонную желатину (1).

Известен штамм Thiobaciffus Thiocuanoxidaus, разрушающий роданиды в сточных водах.

Морфологические свойства. Мелкие, короткие палочки с округленными кра. рйи, похожие на коккобактерии. Длиtta клеток 0,5-0,7 мкм, ширина 0,20,3 мкм. Располагаются отдельно, спор не образуют. Окрашиваются по

Граму отрицательно. Слабо окрашивают-. ся метиленовым синим и фуксином. Подвижны. Размножаются делением. Форма .и величина клеток постоянны.

Культуральные признаки. На твердых элективных родановых средах образует очень мелкие, прозрачные, круглые колонии, Подобные колонии

Вырастают на мясо-.пептонном агаре.

Растут на питательных средах с промышленными сточными водами, содержащими роданиды.

Биохимические признаки. Не фер- ментируют лактозу, сахарозу, не образуют индол, выделяют сероводород, Не ферментируют маннит, мальтозу (2 1.

Недостатками штамма являются низ кая интенсивность разложения роданидов в промышленных сточных водах (80 г/м сут), медленное развитие бактерий (5-6 сут) незначительный прирост биомассы и низкая удельная скорость роста бактерий.

Целью изобретения является интенсификация процесса очистки промышленных сточных вод от роданидов более активными штаммами микроорганизмов, Цель достигается использованием штамма Pseudomonas aerug inosa В-2197 при очистке промышленных сточных вод, содержащих роданиды на биохимических установках коксохимических производств.

Штамм отличается от известных своими морфологическими, физиологическими и культуральными признаками, а также выраженной способностью окислять роданистые соединения в промышленных сточных водах химического и коксохимического производства.

Штамм Pseudomonas aeruginosa

В-2197 получен методом селективной адаптации на содержащих роданиды питательных средах, г;

Вода водопроводная 1000

ИН СВ 0,2-0,4

К НРО, 0,5

КН1Р 4 . . 0 5

ИОЬО+ 0,1-0,2

FeSO Следы с последующим скринингом .наиболее активных и стабильных форм.

Источником выделения штамма является сточная вода коксохимического производства. !!!тамм имеет следующую характери" стику.

Иорфологические признаки. Палочки прямые с закругленными концами, размер 0,5-, 0,6<1-3 мкм. По методу

116,4

Грама окрашиваются отрицательно. диор не образуют, подвижны. Размножаются делением.

Физиологические признаки. Аэробы и факультативные анаэробы, оптимальная температура роста 25-35ОС, максимальная 43ОС, Культуральные свойства. На мясо1 п птонном агаре штамм образует ко36 лонии двух типов. первый диаметром

2-5 мкм, гладкие с блестящей поверхностью, выпуклые, сероватого цве га, ровным краем, полупрозрачные, второй диаметром 2-3 мм, вначале выпук>s лые, полупрозрачные, сероватого цвета, уплотненные с шероховатой поверхностью и неровными краями. Агар вокруг колоний чаще окрашивается.

При высеве в пробирку с агаром Хотрз тингера вызывает позеленение верхней части столбика агара, Штамм приводит к помутнению мясо-пептонного бульона с последующим развитием слизистой пленки серовато-зеленого р цвета. Пленка при встряхивании с питательной средой не смешивается. На разведенном бульоне Хоттингера культура образует зеленый пигмент. На среде Ллоскирева растет в виде нез больших (до 1,5 мм в диаметре) колоний, гладких, выпуклых,. блестящих, сероватого цвета, прозрачных в про ходящем свете. На содержащей роданиды синтетической плотной питательной среде образует мелкие, бесцветные

КОЛОНИИ °

Биохимические свойства. Ферменти. рует глюкозу в аэробных условиях и не ферментирует при культивировании под слоем вазелинового масла, расще- . пляет ксилозу и галактоэу, не разлагает лактозу, сахарозу, сорбит, не гидролизует крахмал.

Утилизирует аргинин в аэробных и анаэробных условиях. Желатин разжижает через 48 ч, Молоко пептонизирует, не изменяя резко реакцию среды.

Восстанавливает нитраты до азота.

На среде Кларк а образует ацетилметизкарбинол (ацетоин), Проба на оксидазу положительная. Родамины разрушают на 903 в течение суток (при исходном его содержании 200 мг/л) .

Штамм депонирован во Всесоюзном научно-исследовательском институте генетики и селекции промышленных микроорганизмов и ему присвоен шифр, ЦМПИ-В"2197.

S 9661

Культивирование в лабораторных условиях. Выделенный штамм сохраняют в лабораторных условиях на жидкой родановой среде, состава, r ", Водопроводная, у вода 1000

NHpCNS 0,2-0,4

КН PO 0 5

MgSO» . 0,1-0,2

FeSO+ Следы to

Для сохранения степени адаптации штамм содержат на плотной 23-ной агаризованной и жидкой среде, приготовленной на сточной воде из аэро. тенка биохимической установки (со- 15 держание Фенолов 1-3 мг/л, родани" дов 200-250 мг/л, аммиак общий в пределах 2000 мг/л, летучий аммиак (МНУ-й) 300-600 мг/л, связанный ам» миак до 1500 мг/л).

Роданазная активность штамма поддерживается путем пересевов 1 раз

16 6 в мес. После инкубации в течение

24 ч при 30ОС штамм хранят при комнатной температуре (или 1-4 C) в темноте.

Пример использования штамма Preudomonas aeruginosa В-2197 для обеэроданивания промышленных сточных вод.

Роданазная активность штамма проверена на лабораторной установке со сточными водами коксохимических производств. Основные параметры бактериального обезроданивания промышленных сточных вод следующие: оптимальная температура процесса обезроданивания 28-30 0. рН 7,8-8,0. В результате испытаний, проведенных в ферментаторах периодического культивирования микроорганизмов, определены оледующие параметры обезроданивания, которые приведены в таблице.

966116 с

1 Ингредиенты !

1 !

Содержание роданидов в конце процесса обезроданивания, мг/л

Время обезроданивания, ч

Концентрация, мг/л

° е еееееае

200-250

500

5 и менее

ИН, СНЬ кн Ро

500

К НРО4

100

И!1804

Следы

250-300

FeS04

Не обнаружено

36-48

Роданиды

Фенолы

1-5

Общий азот

1500 -,2000 15"20

Цианиды

Смолы и масла

50-60

230"250

Не обнаружено

Роданиды

1-5

Фенолы

1500"2000

Общий азот

Цианиды

Смолы и масла

15-20

50-60

36-48

400-500

Не обнаружено

Роданиды

Фенолы

1 "5

15-20

Общий азот

Цианиды

Смолы и масла

50-60

Ю ЮФЮВ ЮЭФОФ ВЭВЭО ВВЮЮ

1 ! 1

C 1

Щ 1

x a

v e э х

У.Ф I

1- 5

O h !51 х и

c3a v!

1 !

1 ! о

lO I

1 о

1О 1

Ю 1

I" 1

1 .1

1родлагаемый штамм интенсивно развивается на родановых синтетических средах и ИПА уже в первые сутки. Разрушает роданиды на 99,83 за 18 ч"-(при исходном их содержании 250 мг/л ).5S

В динамике обезроданивания многократно изучались Ферментативныессвойст.ва штамма и существенных отклонений от характеристик исходного штамма не отмечено. Периодическая культура штайма Pseudomonas aeruginosa В-2197 в процессе опыта исследована по следующим показателям: удельная скорость роста время удвоения биомассы и продолжительность различных Фаз развития.

Формула изобретения

Составитель М.Ларина

Редактор А.Химчук Техред.Л. Пекарь Корректор О. Билак

Заказ ираж 505 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий.

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ИПП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 9, 9661

По сравнительно короткой лаг-фазе экспоненциальный период развития культуры наступает уже через 3-5 ч культивирования..По исследованным параметрам роста периодической культуры в предлагаемый штамм охарактеризован как быстрорастущий.

Таким образом, штамм Pseudomonas

aeruginosa 8-2197 обеспечивает эффективное обезроданивание промышлен- 1Ц ных сточных вод, характеризуется высокой (f сут) скоростью роста и стабильностью ферментативных свойств.

Штамм хранится в музеях живых культур микробов Кузнецкого филиала I5

Восточного научно-исследовательского углехимического института и кафедры миЯюбиологии Новокузнецкого института усовершенствования врачей.

Штамм бактерий P s cud omona s ae r uginosa В-2197 депонирован в Цент, ральном музее промышленных микроорганизмов института "ВНИИгенетика", регистрационный номер ЦМПИ 8-2197, используемый для очистки промышленных сточных вод коксохимических производств от роданидов.

l, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Путилина Н.Т. Микробиология.

1561, 1ХХХ, вып.. 2, с. 294-298.

2. Юровская Е.М. Бактерии, окисляющие роданиды в промышленных сточных водах. - Микробиологический журнал, т. 33, 1т 2, 1971, с. 141-145.