Способ замораживания спермы гусей
Союз Советских
Социалистических
Реся
ОП ИСАНИЕ „„9
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6I ) Дополнительное к авт. свил-ву— (22)Заявлено 21.05.81 (21) 3291342/30-15 с присоелинением заявки 1те (23) Прноритет— (5! )М. Кл.
A 61 D 7/О?
Гооудэротеенный комитет
СССР
II0 делам изобретений н открытий
Опубликовано 15. 10. 82 ° Бюллетень М 38
Дата опубликования описания 1 5 . 1 0 .82 (53) УДК636. 082.
453..5(088.8) -P. Г. Царенко, А. Д. I:óðáàòoâ и Т. Г. Мавра ина "- -" - " . "j
1, йй я -""-.. (72) Авторы изобретения
Всесоюзный научно-исследовательский институт и генетики сельскохозяйственных животных (71) Заявитель (54) СПОСОБ ЗАМОРА1 .01ВАНИЛ СПЕРМЫ ГУСЕЙ
Изобретение относится к разве дению сельскохозяйственных животных, а именно, к способам замораживания спермы гусей.
Известен способ замораживания спермы гусей, заключающийся в том, что сперму высокой активности разбавляют средой для замораживания в соотношении 1:1 и добавляют криопротектор этиленгликоль в количестве 1Оу в конечной концентрации. Раз бавление спермы и добавление этилен. гликоля проводят при комнатной температуре. Затем ставят в холодильо ник при 2-4 С на эквилибрацию, которая продолжается 1 ч. Сперму, подготовленную для замораживания, набирают охлажденными пипетками и накапывают в виде гранул объемом
0,1-0,15 мл на поверхность фторопластовой пластины, предварительно о охлажденной до 60-75 С. Гранулы выдерживают на пластине в течение 20 с. За это время сперма охлаждается до 10-12 С. Далее пластину с гранулами опускают в пары азота на
1 мин, сперма охлаждается до 40-.
50 С, затем гранулы опускают в жидо кий азот. Оттаивание гранул производят в пенициллиновых флаконах в водяной бане при 70-75 С в течение
7-10 с. Оплодотворенность яиц гусынь
Io осемененных спермой, замороженной по указанному способу была в весенний период 78,53, а осенью 44,53, Выводимость гусят от числа заложенных яиц была 64,2 и 30,53 соответственно 1,1 ).
Недостатками этого способа являют,ся сравнительно низкая оплодотворенность яиц и низкая выводимость гусят.
Цель изобретения — повышение сох о ранности биологической полноценности спермы после замораживания.
Поставленная цель достигается тем, что эквилибрацию спермы or..y50
3 . 96 ществляют в два этапа, вначале пе ред добавлением криопротектора в течение 20-30 мин, а затем после добавления криопротектора в течение 10-15 мин, причем накапывание спермы проводят на фторопластовую пластину, имеющую температуру 185190 С в течение 2-3 мин, а затем пластину с гранулами помещают s жидкий азот на 1-.2 мин. п р и м е р, Сперму гусаков высокой активности .разбавляют в соотг ношении 1:3 одной из сред, предназначенных для замораживания, и ставят в холодильник, где поддерживается температура 2-4 С.- Флако-ны закрывают резиновой пробкой. Через 30 мин в охлажденную сперму добавляют охлажденный этиленгликоль или диметилсульфоксид в количестве 53-ной конечной концентрации. Со.держание флакона быстро перемешивают круговыми движениями и ставят в холодильник еще на 10 мин. После этого флакон вынимают из холодиль. ника, определяют активность спермы после эквилибрации и, если активность спермы оказалась не ниже 4-5 баллов, ее замораживают. Для этого сперму подготовленную к замораживанию наби рают в остуженную пипетку или шприц и накапывают по 0,1-0,15 мл на фторо-, пластовую пластину, предварительно охлажденную в жидком хладагенте до
-196 С, а затем поднимают пластину
d на уровень 1,5 см. Температура пласти ны в начале накапывания должна быть
-185 С, такую температуру она приобретает через 15 с, экспозиция пластины в этом положении должна быть
2,5 мин, а скорость охлаждения 0,7 с
Затем пластину с гранулами погружают в жидкий азот, в котором она на ходится 1,5 мин, обеспечивая скорость охлаждения гранул 3,1 /с. После выхо да пластины из азота гранулы собирают пинцетом, помещая их в пенициллиновый флакон, последний ставят в контейнер сосуда Дьюара, погружая в жидкий азот или другой жидкий хладагент, Для искусственного осеменения гусынь .флаконы с гранулами спер429 4
5 мы достают из сосуда Дьюара и отогре вают в водяной бане, имеющей температуру 40-80 С, периодически встряо хивая сперму ° Держат флаконы в воде до полного оттаивания гранул. Затем быстро оценивают активность спер мы и осеменяют гусынь.
Результаты искусственного осемене ния гусынь спермой замороженно-от10 таянной представлены в таблице, показывают, что искусственное осеменение гусынь спермой, замороженнооттаянной по предлагаемому способу, обеспечивает получение более высокой
15 оплодотворенности яиц и выводимости . гусят, чем при использовании спермы,. замороженной по способу прототипа.
Так,оплодотворенность яиц гусынь в первом случае была при использоващ нии инозитол-глюкозной среды от 56,3 до 86,73, а вывод гусят от числа яиц, заложенных на инкубацию,от 45,8 до 67,7i тогда как при использовании спермы, замороженной по способу-npoz5 тотипу, оплодотворенность яиц. была лишь. 52,6-70,2, а выводимость от
38,3 до 44,Я. Разница была достоверна по второму порогу, хотя опыты были проведены в сравнимых условиях
З на птицах-аналогах., ! !
Научное и экономическое значение предлагаемого способа состоит в том, что он обеспечивает лучшую опля дотворенность яиц гусынь при исполь" зовании замороженно-оттаянной спермы чем ранее существовавшие способы;
Консервация спермы гусей ставит селекционную работу на более высокий уровень, так как дает возможность длительного хранения спермы самцов улучшателей и тем самым позволяет использовать ее тогда, когда селекционеру она нужна. Кроме того, метод низкотемпературной консервации дает возможность сохранения гено фонда гусей локальных пород, которым грозит уничтожение из-за их неконкурентноспособности, но которые могут сыграть в дальнейшем большую роль в выведении новых пород и линий.
965429
I о (6
<о а о с =с с s
О 6С
ОХо
2 о х
C Х
6l
С(CL
О1
О1
Ю аА (Z(л
Ю аА
Ш
CA л о
l
=(1
X 1
К I
1 (6 1
1 о
Х 1
3 1
I- I
О
I I.х
2 х
Э
CL о
61
Iо а о с
C о л аА (Z(л л
М\
OO о з I
l I
Ф I (X it
О !
61 1.
2 I
6l 1
1 д Р !
1 х.
2 Я
Z X
Z =С
Э Ф
% IO о о с с (6 Z л
<С\
С4 л л
-з
1 1
I 1 Z
Cl
01
1
О1 л сп о э с а
l= О
О (6 (о Р а х
1(Z
1 Х х
1 о х
r Z
Ф Э
m М
1 r» л
I х
00 -6 м
СЧ СЧ о =т
S Х
:7 %
l
1
I 1
1
1 !
I
1
I
1
I
t
1
1
1 (1
1
1
1 ! !
1
t .1 1
t
l !
1
1
1
I
I (Е
CL
Э
v с
Э
1X (6 (6 (О (б (6
С(I о
Я с а
1 ( (X о
Z о
X! (6 I о а х с
Q ( с о ! <© (- o
Х Z (C (б S (6 о
Z (C ((t
O(6O
S Z
I 1 ! . I (C
Ф
6l о а
Э
X: о с а (Z о
Ы с о
С1 (Z о с о а
I- 13 Z с о о
l
l
1
Б
C (6 с < ,а а с о
Ъ
<с о
lМ
C о
lЭ
С) 1
1.
1
1
I
I
1
I
1
1
I
I
1
1
1
1
1
1
1
I
1
1
1
1 !
I (1
I
I .< !
1 !
1
I !
l
I (.(Ъ
OO
СО OO (Zl
1 О -! м л л
1 о
S O с
S я а)х (О (О S
r Х д
I- ((< (6 о (c о >ь (X.с л(о
zzv
O (6 S
S Ф ао х
aomx
Л. л в со о Ф
Ф C 3
o ox
СО м (ц л л о
00 I
;(< с о
Са
<2 Z с о
О У о л О (A
00 Ф ( о
ca .
I- I2 х с о о м (D о
OCt
01
)
) ОЪ
О1 ОЪ л о о
С4 ъО л °
° aA
OC(Щ о м
00 00 ю м
-а л
° — 00 аА аА мъ л л » К, )
0О Л
OO СЧ л л а о ъФ l
М . О л л ъО (4 а (A
О с о
Са
<- . <Л Z с о о
I
1
1
I!
t
l
1
1, <, 1 ((О о о
< о с о
О
Э (6 (6 C
1 (6 Iса О
Ф О а а(с с
О >
I.CIO о
6; O
1 Ф О
Z C х и
I XO
О C
1 а
О (С
X (6 (6 Z
1 "K (6 О
Х а о
1 Ф X! С 6<
O (6
1 х (6 (6 с X с а
>(Ф а с
X X
1 Б (6
Z C с
2i 0
С CL.
< о
I х х
Ф Ф
l,O.V (6 6(О О
CQ C(< ((К (« (Of
7
Формула изобретения
Составитель А. Филиппова
Редактор М. Бандура Техред А.Ач (орректор Н Буряк
Заказ 7725/3 .Тираж 714 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Н-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Способ замораживания спермы гусей, включающий разбавление спермы, добавление криопроектора, эквилибра цию, накапывание спермы на фгоропластовую пластину для образования гранул и помещение гранул замороженной спермы в жидкий азот, о тл и ч а ю шийся тем, что. с целью повышения сохранности биологической полноценности спермы после замораживания, эквилибрацию спермы ,осуществляют в два этапа, вначале
965429 8
1перед добавлением криопротектора в течение 20-30 мин, а затем после добавления криопротектора в течение 10-15 мин, причем накапывание спермы проводят на фторопластовую пластину, имеющую температуру
185-190 С, в течение 2-3 мин, а затем пластину с гранулами помещают в жидкий азот на 1-2 мин. о
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе.
1, Авторское свидетельство СССР 65662 1, кл. А 6 1 0 7/02, 1976.
