Штамм erwinia саrотоvоrа мл-1-продуцент транс-элиминазы
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик
И11 М. К>. С 12 М 15/00 Государственный комитет СССР но делам изобретений и .открытий (23) Приоритвт —, РЗ) УДК 577. 15 (088. 8) Опубликовано 230982 Бюллетень ¹ 35 Дата опубликован я описания 2309.82 (72) Авторы изобретения A.Ã.Ëîáàíîê, Л.С.Капитонова и Б.A.Ìàë (71) Заявитель Институт микробиологии АН Белорусской (54) ШТАММ ERWINIA CAROTOVORA M3I-1 — ПРОДУЦЕНТ ТРАНС-ЭЛИМИНАЗЫ Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к штаммам - продуцентам пектолитических.ферментов, и может найти применение в сельском хозяйстве при ма церации растительных тканей. Известны штаммы — продуценты пектолитических ферментов например, грибы рода Rhizopus $1 J. Однако такие штаммы выделяют пектолитические ферменты, обладающие невысокой активностью трансэлиминаэы. Известен штамм Вас1?1цэро1увуха ATCC 21551, образующий пектолитические ферменты с активностью транс" элиминазы 2100-19000 ед/мг(2). Недостатками этого штамма являются дорогостоящая и сложная по составу питательная среда и низкая скорость роста (50-70 ч). Известен также штамм Cfdstridium те1sineum-22-продуцент пектолитических фержнтов, в том числе пектат-транс-элиминаэы с активностью s культуральной жидкости 360 ед/мл, а в ферментном препарате 700028000 ец/г (3). Недостатками известного продуцента являются низкая активность транс элиминазы и продолжительное. время ферментации (48 ч). Целью изобретения является получение нового штамма с высокой скоростью роста на дешевой питательной среде, синтезирующего пектолитические ферменты с высокой активностью. Предлагаемый штамм Erwinik carotovora МЛ-1 выделен из лесной подстилки в окрестностях Минска. Культура хранится .на картофельном агаре при 4-5оС в музее культур института микробиологии АН БССР и в музее культур промыаленных микроорганизм 15 .мов института нВНИИГенетика", коллекционный номер I58fN В-2031. Штамм бактерии Erwiniacarotovora МЛ-1 обладает следуюшими морфологическими и физиолого-биохимическими призна20 ками. Морфологические признаки. Колонии бесцветные, выпуклые. пикообоазные к центру с волнистыми краями. Клетки одиночные, пряьие 25 палочки 0,5-0,7Х1,5 -1,9 мк, подвижные, с перитрнхиальнымн жгутиками ,(около 8), выраженной раковины не имеют. После,5-дневного роста на картофельно-глюкоэной среде колонии достигают 12-16 мм в диаметре. 960 256 Составитель E.Âîðîáüåâà Техред М. Гергель КорректорЕ.Рошко Редактор Л. Лукач Заказ 7149/31 Тираж 505 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035. Москва Ж-35. Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент". r. Ужгород, ул. Проектная. 4 Физиолого-биохимические признаки. Аэооб. оптимум роста при 29 С. о .удельная скорость роста 0,35 ", оптимальный рН 7,0-7,2. Отношение к источникам углерода. IB процессе роста интенсивно сбражи, вает глюкозу, сахарозу, лактозу., мальтозу, аоабннозу, усваивает rngцерин, маннит. Этиловый спирт не сбраживает, крахмал не гидролиэует. При росте на картофеле образует .колонии в виде блестящего влажного налета. Отношение .к источникам азота. Утилизирует нитраты, минеральные и органические соли, пептон, аспарагин, мочевину. Желатину разжижает. Молоко пептонизирует. Содержание ГЦ в ДНК 51 мол.Ъ. Ацетоин не образует., Не выпеляет Н . Максимальная температуре роста 40 С. Пример 1. Посевной материал выращивают глубинным способом на качалке при 31 С и рН 7,0-7,2 в течение 16 ч на питательной среде следующего состава, г/л К НРО4 .7,0 КН .РО4 2,0 М яо47Н О б,2 (ИН4)1 $04 1,0 Свекловичный жом 11,25 Для выращивания культуры посевной материал вносится в питательную среду укаэанного состава в количестве.0,5%. Условия культивирования те же, что и для посевного материала. Ферментный препарат получают из культуральной жидкости путем осаждения этиловым спиртом в соотношении 1:3,5 с последующим высушиванием в вакуум-эксикаторе или путем распылительной сушки. Активность транс-элиминазы в ферментном препарате до 7200 ед/мг. За единицу активности принимается, количество фермента, вызывающее повышение оптической плотности реакционной смеси на 0,1 за 10 мин при длине волны 235 нм. Состав реакционной смеси: 0,6 мл пектата, 0,05 мл 0,01 М СаС1, 2,25 мл трис-буфера, 5 рН 8,5. Реакционная смесь в количестве 2,9 мп вносится с 0,1 мл культуральной жидкости. в 10-миллиметровую кварцевую кювету, смесь инкубируется при комнатной температуре в тече10 ние 1 мин. Пример 2. Условия культивирования те же., что и в примере 1. Питательная среда того же состава. Свекловичного жома берется 5 г/л. 1 Активность транс-.элиминазы в фермент.ном препарате до 3000 ед/мг. Пример 3. Условия культивирования те же, что и в примере 1. Питательная соеда того же состава. „О Свекловичного жома берется. 15 г/л. Активность транс- элиминазы в фер- ментном препарате до 5000.ед/мг. Ферментный препарат мацерирует стебли льна, клубни картофеля 25 и рковь в течение ?4 ч Таким образом, реализация изобретения позволяет получить высокоактивный штамм,- продуцент. трансэлиминазы обладакиций высокой ско1 ростью роста на дешевой питательной - ® !среде. Формула изобретения З5" Штамм Erwinia carotovora M3I-1 (Музей культур проьыапенных микроорганизмов института "ВНИИГенетика", коллекционный номер ЦМПИВ-2031) продуцент транс-элиминазы Источники информации. принятые .во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР 9 535347, кл. С 12 N 9/14. опублик. 1976. 2. Патент ФРГ Р 2054948, 4,,кл. С 12 D 13/10. опублик. 1972. 3. Авторское свидетельство СССР 9 622838, кл. С 12 N 9/00, 1977.
