Способ определения продолжительности вирусоносительства овцами, переболевшими ящуром

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Соцналнатнческик

Республик

«>946513 (6!) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 031175 (2!) 2187830/30-15

)yq j+ g> 3

A 61 В 10/00 с присоединением заявки Мо

Государственный комитет

СССР ио делам иэобретений и открытий (23) Приоритет—

Опубликовано 300782. Бюллетень !чо 28 ($3)УДК 619 616. .988.43(088.8) Дата опубликования описания 300782

И.M.Áåñïàëîâ, И.С.Егошин, Л.С.Какичева, Н.A.Ëèòâèíîâà и К.У.Буларкиев

L !

1 (72) Авторы изобретения

Киргизский научно-исследовательский ииститут животноводства и ветеринарии (7!) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ

ВИРУСОНОСИТЕЛЬСТВА ОВЦАМИ, ПЕРЕБОЛЕВШИМИ ЯЩУРОМ

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности ветеринарии, и представляет собой способ определения продолжительности вирусоносительства овцами, переболевшими ящуром, в особенности типа

A-22.

Известен способ определения продолжительности вирусоносительства овцами и крупным рогатым скотом, переболевшим ящуром A-22 и 0-1, который основывается на исследовании пищеводоглоточной слизи(1).

Известен также способ определения вирусоносительства у животных, переболевших ящуром, путем выявления вируса ящура в тканях животных: мягкого неба, язычка, гланд, слизистой оболочки языка, трахеи, пищевода(2).

В известных способах не установлены точные сроки продолжительности вирусоносительства реконвалесцентными животными. Даже у одних и тех же 25 исследователей сроки вирусоносительства животными имеют значительные колебания. Кроме того, опыты не были контролируемы и документально не подтверждены. 30

Цель изобретения — определение точных сроков вирусоносительства овцами, переболевшими ящуром для уста- . новления сроков продолжительности ограничительных мероприятий после снятия карантина по ящуру.

Поставленная цель достигается тем, что в способе, включающем выявление вируса ящура путем гистологического исследования микроафт эпидермиса языка, верхней и нижней губ и межкопытцевой щели, дополнительно исследуют соскобы из носоглотки на наличие вируса путем пассажей на новорожденных крольчатах. Исследование соскобов иэ носоглотки на наличие ящура проводят через сутки в течение 7-8 дней, а затем один раз в течение 4-10 суток на протяжении

200-250 дней.

Таким образом, способ определения продолжительности вирусоносительства овцами, переболевшими ящуром, включает комплексный метод исследований (вирусологический и гистологический) .

При изучении продолжительности скрытого вирусоноситель ства при жизни животного берут кал, мочу, кровь и соскобы из насоглотки через 12, 946513

24, 48, 72, 96 120, 168, 192 ч после экспериментального заражения овец вирусом ящура A-22, а затем один раз в 4-10 дней íà.протяжении 200-250 сут.

Для гистологического изучения 5 изменений во внутренних органах и ткаиях и определения обсемененности их вирусом ящура овец убивают в динамике инфекционного процесса через

12 ч и периодически 200-250 дней пос-{О ле заражения их вирусом ящура А-22.

Проведенные гистологические исследования позволяют определить, что вирус яцура у переболевших овец, позже 14 дней, находится в микроаф- {5 тах. эпидермиса языка, верхней и нижней губ и межкопятцевой цели.

В связи с физиологической заменой эпителия микроафты постепенно смещаются В сторону poroaoro слОя и, ПО 20 мере их слущивания, c(ðoãoâûìè чешуйками вирус попадает в ротовую полость и окружающую среду. Следовательно, продолжительность вирусоносительства и сроки ограничительных мероприятий необходимо определять по результатам вирусологических и патомОрфологических исследований..;

Вирусологические исследования проводят следуюцим образом.

Специальной ложкой берут соскобы из носоглотки. Собранную слизь и слущенный эпителий с языка помещают в стерильную чашку Петри, затем тщательно растирают в ступке с нейт- 35 ральным битым стеклом. К растертой массе добавляют стерильный физиологический раствор из расчета 1:2(3).

Полученную суспензию фильтруют через двухслойную марлевую салфетку.,4{)

К фильтру добавляют пенициллин и стрептомицин по 1000 ед. на 1 мл.

Подопытным крольчатам суспензию вводят под кожу спины в дозе 1,5-2 мп.

Наблюдение за животными проводят в 45 течение 4-5 сут.

Результаты исследования положительные, если у крольчат через 48-72, реже 96 ч,после ннокуляции исследуемого материала развиваются симптомы заболевания ящуром - прогрессирующий паралич передних и задних частей туловища с последующей их гибелью.

В сомнительных случаях проводят перепассаж (от крольчонка к крольчонку) вируса и с материалом от крольчат, проявивших хорошо выраженные клинические признаки заболевания ящуром, ставят реакцию связывания комплемента (РСК).

Вирусологические исследования показывают, что из соскобов носоглотки вирус ящура A-22 выделяют через 12, 24, 48, 72, 96, 120, 168 ч;, 8, 10, 14, 23, 43, 47, 57, 98, 140 и 148 дней после заражения. 65

Гистологические исследования проводят по обычным, принятым s гистологической технике, методам. Исследуют кусочки языка, верхней и нижней губ, межкопытцевой щели, сердца, почек, селезенки, печени, легкого, подчелюстного и брызжечкового лимфатическйх узлов, сычуга и 12-перстной кишки.

Язык.

Через 12 ч после заражения наблюдается незначительная гиперплазия клеток адветиции кровеносных сосудов дермы. У овцы, убитой через 24 ч, в дерме отмечается незначительная гиперемия, инфильтраты из лимфоидных клеток и сегментоядерных лейкоцитов,. наличие клеток с зернистой пунктуацией. Около кровеносных сосудов в местах размножения клеток адвентиции имеются щелевидные пространства, заполненные в некоторых случаях серозной жидкостью. В эпидермисе в области камбиального слоя устанавливают пустоты размером в 2-5 эпителиальных клеток (микроафты).

Аналогичные изменения происходят и через 8 дней. Лимфоидноклеточная инфильтрация дермы обширная.

У овец, убитых через 117, 180 и 190 дней микроафты обнаруживают лишь в роговом, реже блестящем слоях, что связано с постепенной физиологической заменой эпителиального слоя.

В эти сроки в дерме устанавливают незначительные лимфоидные скопления..

Верхняя губа.

Через 12 ч после заражения в Отдельных участках эпидермиса эпителиальные клетки набухли, округлились, цитоплазма их просветленная. Ядра клеток также набухшие и округлены.

У овцы, убитой через 24 ч, в эпидермисе в области камбиальиого слоя имеются пустоты, заполненные серозной жидкостью (микроафты). В дерме наблюдается гиперплазия клеток адвентиции кровеносных сосудов. Аналбгичные микроафты, .но в большем количестве, установлены в эпидермисе

s области камбиального слоя у овцы, убитой через 8 дней. Наряду с этим отмечается очаговая лимфоидно-гистиоцитарная инфильтрация дермы.

Через 117 дней микроафты обнаруживают как в роговом слое эпидермиса, так и в эпителиальном слое волосяных влагалищ. В последних в серозном содержимом имеются единичные сегментоядерные лейкоциты. Вокруг таких волосяных влагалищ обнаруживались лимфоидные инфильтраты в виде муфт.

В дерме в области гребешков устанавливают лимфоидно-гистоцитарные инфильтраты с примесью нейтрофильных лейкоцитов.

В сроки убоя 180 и 190 дней имеются лишь незначительные лимфоидные

946513 инфильтраты в дерме, иногда захватываюшие и камбиальный слой эпидермиса.

Нижняя губа.

У овцы, убитой через 12 ч после заражения, отмечают гиперплазию клеток адвентиции кровеносных сосу- 5 дов. Через 24 ч, наряду с этим, имеются мелкие вакуоли (микроафты), . в .эпителни эпидермиса вблизи камбиаль ного слоя и s эпителии волосяных влагалищ. Аналогичные изменения, но 10 более рельефно выраженные, обнаруживают у овцы, убитой через 8 дней. Необходимо отметить, что вакуоли располагаются в зернистом слое, т.е. как бы передвигаются ближе к рогово- 5 .му слою. Среди гиперплазированных клеток адвентиции кровеносных сосудов дермы много лнмфоидных элементов.

Через 117 дней микроафты обнаружи.вают лишь в блестящем или в роговом слое. В дерме отмечают значительную лимфоидную инфильтрацию. .-У овец, убитых через 180 и 190 .дней, наблюдают только незначительную ггипер"азию клеток двентиции 25 кровеносных сосудов дермы.

Межкопытцевая щель.

У овцы, убитой через 12 ч, наряду с гиперплазией клеток адвентиции кровеносных сосудов дермы, в зпидерминальных гребешках вблизи камбиального слоя отмечают очажки,.в которых между клетками обнаруживают пустоты. Ядра в таких клетках набухшие с просветленной кариоплазмой.

Через 24 ч, 8 и 117 суток в дерме об-35 наруживают значительные лимфоидногистиоцитарные инфильтраты, гиперплазия клеток адвентиции кровеносных сосудов. В зпидермисе отдельных волосяных влагалищ имеются пус- 40 тоты (микроафты ), заполненные серозной жидкостью. Вокруг таких волосяных влагалищ обычна значительная лимфоидная инфильтрация. Микроафты в эпидермисе кожи обнаруживают у овцы, убитой через 180 дней. При этом они находятся в камбиальном слое. У этой овцы также очень значительные лимфоидно-гистиоцнтарные инфильтраты в дерме.

У овцы, убитой через 180 и 190 дней, микроафты об наружив ают только под роговым слоем волосяных влагалищ.

Из приведенных вирусологнческих и патоморфологических исследований сле-55 дует, что вирус у овец, переболевших ящуром, позже 14 дней находится в микроафтах эпидермиса языка, верхней и нижней губы и межкопытцевой щели.

В связи с физиологической заменой эпи60 . телия микроафты постепенно смещаются в сторону рогового слоя и, по мере их слущивания, с роговыми чешуйками вирус попадает в ротовую полость и окружающую среду. 65

Исследования мочи кала крови и внутренних органов не приводятся/так как в укаэанном материале вирус обнаруживается кратковременно, начиная с 12 ч и до 14 суток после заражения. Не приводятся патоморфологические изменения в сердце, печени, почках, селезенке, лимФатических узлах, сычуге и 12 перстной кишки, так как специфические для ящуриой инфекции микроафты не обнаружены.

Применение способа определения про» должительности вирусоносительства овцами, переболевшими ящуром, дает экономический эффект, так как знание источников инфекции и сроков распространения вируса в окружающей cd» де поможет значительно снизить заболевание животных ящуром. Согласно существукщей инструкции о мероприятиях по предупреждению и ликвидации. ( аболевания животных ящуром от 21 мая

971 карантин с неблагополучного пункта по яшуру снимают по истечении

21 дня со дня выздоровления последнего .заболевшего животного в данном пункте. С момента заболевания и до выздоровления животного проходит

10-12 дней, после снятия карантина в течение 12 месяцев нельзя выводить и вывозить из хозяйства переболевших животных и содержать их совместно с неболевшим скотом. Таким образом, срок содержания животных в изолированных условиях составляет 396 дней (10 + 2) + 365 = 396.

Согласно предлагаемому способу установлено, что продолжительность вирусоносительства, а следовательно, карантина и ограничительных мероприятий должна равняться 200210 дням. Из этого следует, что жиВот-; ное передерживается в изолированных условиях лишних 186 дней (396-210=186).

Экономия только по одному хозяйству при наличии 100000 овец составит

1392000 р.

С помошью предлагаемого способа можно определить продолжительность вирусоносительства у других животных, переболевших ящуром, независимо от типа вируса.

Формула изобретения

1. Способ определения продолжительности вирусоносительства овцами, переболевшими ящуром, включающий выявление вируса ящура в тканях овец, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа,. выявление вируса проводят путем гистологического исследования микроафт эпидермиса языка, верхней и нижней губ и межкопытцевой щели и дополнительно исследуют соскобы из нов

946513

Составитель Л.Мурая

Редактор Н.Кешеля Техред С. Мигунова Корректор О.Билак

Заказ 5386/5 Тираж 714 Подписное

ВНИИНИ Государственного комитета СССР по делам иэобретеннй и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 оглоткй на йаличие вируса путем йассажей на новорожденных крольчатах.

2. Способ йо п.1, о т л и ч а юшийся тем, что исследование соскобов из носоглотки sa наличие вируса ящура проводят через сутки в 5 течение 7-8 дней, а затем однократно в течение 4-10 суток на протяжении 200-250 дней.

3. Способ по п.1, о т л и ч а ю-, шийся тем, что гистологические tO

ИИЖедования проводят периодически на протяжении 200-250 дней.

Источники информацйи, принятые во внимание при экспертизе

1 . "Животноводство", 1973, в 9, с. 44-46.

2. Краевая патология сельскохозяйственных животйых северной эоны

Яижйего Поволжья. - Труды Саратовской НИВС. Саратов, 1974, с. 71-74.