Способ определения метилового эфира l-фенил-l-(пиперидил-2) уксусной кислоты гидохлорида

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

<и>934365

Союз Соеетсиик

Социалистические

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22)Заявлено 27.02.80 (21) 2888722/23-04 с присоединением заявки М— (23) Приоритет

Опубликовано 07.06.82, Бюллетень М 21

Дата опубликования описания 07. Об. 82 (5l)M. Кл.

G 0I и 31/08 тоеудвротееииыЯ комитет

СССР ае делен изобретениЯ и открытиЯ (53) УДК 543.89 (088.8) (72) Автор изобретения

С.Е.Колбина

Иркутский государственный медицинский институт (7I) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕТИЛОВОГО ЭФИРА с -ФЕНИЛ- ст .-(ПИПЕРИДИЛ-2) УКСУСНОЙ

КИСЛОТЫ ГИДРОХЛОРИДА

Изобретение относится к медицине, а именно к токсико-химическому анали-, зу, и может быть использовано при определении метилового эфира о -фенил- al. -(пиперидил-2) уксусной кисS лоты гидрохлорида (метилфенидата).

Известны способы определения метилфенидата путем идентификации его в тонком слое сорбента.

Известен способ определения метилфенидата, который экстрагируют из биологического объекта и хромотографируют полученный экстракт в тонком слое сорбента. В качестве сорбента используют силикагель. Хроматографирование осуществляется в системе растворителей хлороформ-гептан

951-ный этанол, взятых в соотношении 1: 1: 1(1).

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения метилфенидата путем обработки анализируемой пробы эфиром, с последующим хроматографированием на тонком слое сор бента — окиси алюминия. Край пластитт ки с нанесенной пробой смеси веществ и свидетеля погружают в систему растворителей пропаиол - буферная смесь, взятых в соотношении 9:1, рН смеси растворителей равен 4,0. По мере продвижения жидкостей по пластине происходит разделение смеси веществ.

Выявление зон метилфенидата проводят йод-платиновым реагентом. Зоны метилфечидата определяют по Rg=0,8 и по появлению желто-оранжевого окрашива" ни я(2 g.

Однако известные способы применяют лишь- для определения значительного количества метилфенидата (1-10мг) и не используют для определения минимального содержания вещества в исследуемом объекте вследствие малой чувствительности. Кроме того, обладают малой специфичностью идентификации, так как при исследовании

Ф биологического материала из него ,экстрагируются совместно с метилфени3 93436 датом и балластные вещества, которые на хроматограмме также дают зону

Rg = 0,8-0,9, что затрудняет определение эон метилфенидата. Поэтому известные способы не применимы для токсико-химического анализа на метилфенидат.

Цель изобретения - повышение чувствительности и специфичности определения. 10

Поставленная цель достигается способом определения метилового эфира К-фенил-ol (пиперидил-2)уксусной кислоты гидрохлорида путем обработки

"анализируемой пробы хлороформом с последующим хроматографированием на тонком слое сорбента в системе растворителей и детектированием полученной хроматограммы реагентом, в качестве органического растворителя иск пользуют хлороформ, в качестве системы растворителей используют систему хло роформ - уксусная кислота — этиловый спирт, взятые в объемном отношении

2, 5-3,5 : 0,8-1,2 : 2,8-3,2, предварительно хлорируют хроматоргамму перед детектированием и в качестве ,реагента используют о-толидин.

Экстракт метилфенидата хроматографируют на тонком слое силикагеля мар30 ки КСК, КСК ЛСЛ/254 или на тонком слое силуфола.

Установлено, что экстракцией хлороформом достигается наиболее полное извлечение метилфенидата из исследуемого объекта. Хроматографирование на тонком слое,сорбента в системе хлороформ - уксусная кислота - этиловый спирт позволяет выявить малое качество метилфенидата в исследуемом объекте. а

Используемое соотношение компонентов позволяет качественно идентифицировать 0,2-0,3 мкг метилфенидата в пятне против 1-10 мг в известном способе. При использовании данной системы растворителей повышается чувствительность идентификации почти в

5 тыс. раэ и ее специфичность. Так, величина пробега растворителей для метилфенидата в описываемых условиях составляет 0,53 0,01 при анализе на силикагеле КСК, КСК ЛСЛ/254 и +=0,49 + 0,01 на силуфоле.

Учитывая, что R балластных веществ при извлечении метилфенидата иэ биологических объектов = 0,8-0,9, наложение эон исследуемого метилфенидата и балластных веществ не прписходит, в то время как в известном способе R метилфенидата = О, 8 и Rg балластных веществ = 0,8-0,9.

Установлено, что сорбенты силикагель КСК, КСК ЛСЛ/254 и силуфол повышают чувствительность определения метилфенидата, так как позволяют получить четкую зону исследуемого вещества в центре пластинки. Хлорирование и последующее опрыскивание хроматограмм о-толидином позволяет обнаружить зоны метилфенидата в виде синих пятен.

Пример 1. Две таблетки центендрина с содержанием по 10 мг метилфенидата в каждой растирают и исчерпывающе экстрагируют хлороформом (3 раза по 5 мл хлороформа) .

Экстракт отфильтровывают и доводят объем фильтрата хлороформом до 25 мл. Затем на стартовую линию хроматографической пластинки 9х12 со слоем силикагеля КСК ЛСЛ/254 наносят микрокапилляром 0,005 мл полученного раствора метилфенидата в хлороформе в виде пятен диаметром около 1 мл. Хроматограмму развивают в системе хло роформ - уксусная кислота - этиловый спирт, компоненты которой берут в соотношении 3:1:3 . Пробег Фронта растворителя составляет 10 см. Затем хроматограмму высушивают на воздухе помещают в камеру для хлорирования на 1-2 мин.

Камеру для хлорирования готовят следующим образом. В камеру наливают смесь равных частей 1,5ã.-ного водного раствора перманганата калия и

104-ного раствора соляной кислоты.

После хлорирования хроматограмму выдерживают на воздухе в течение 10 мин и опрыскивают о-толидином.

Для приготовления раствора о-толидина растворяют 160 мг о-толидина в 30 мл ледяной уксусной кислоты и . доводят объем водой до 500 мл, добавляют 1 r йодистого калия. Зоны метилфенидата проявляются пятном синего цвета.

R метилфенидата на тонком слое силикагеля КСК, КСК, ЛСЛ/254 составляет 0,53+0,01. 4увствительность детектора о-толидина по отношению к метилфенидату составляет 0,2-0, 3 мкг в пятне.

Приготовление пластин для тонкослойной хроматографии.

Растворяют смесь 2,4 r силикагеля, 0,16 г гипса и 6, 7 мл воды, за934365 6 тем наносят смесь на стеклянную пластинку размером 9х12, сушат на воздухе и активируют в сушильном шкафу при Т=110 С в течение 20 мин.

Пример 2. Метилфенидат, из- 5 влеченный из затравленной биологической жидкости (кровь, моча), наносят на стартовую линию хроматографической пластинки размером 5хll со споем силуфола. Наносят, микрокапилляром 0,005 мл полученного раствора метилфенидата в хлороформе в виде пятен диаметром около 1 мм, на расстоянии 2 см наносят свидетель.

Хроматограмму развивают в системе хлороформ — уксусная кислота — этиловый спирт, компоненты берут в соотношении 3:1:3. Пробег фронта растворителей составляет 10 см.

После чего хроматограмму подсушивают 20 на воздухе, помещают в камеру для хлорирования на 1-2 мин, затем хроматограмму выдерживают на воздухе в течение 15 мин и опрыскивают о-толидином. 25

Пример 3. Две таблетки цен,тедрина с содержанием по 10 мг метил1 фейидата в каждой растирают и исчерпывающе зкстрагируют хлороформом

3 раза по 5 мл хлороформа. Экстракт отфильтровывают и доводят объем фильтрата хлороформом до 25 мл. Затем на стартовые линии хроматографических пластинок размером 9xl2 со слоем КСК, КСК ЛСЛ/254 и силуфола 5хll наносят по 0,005 мл раствора метилфенидата в хлороформе в виде пятен диаметром около 1 мм. Хро.матограммы развивают в системе хлороформ — уксусная кислота - этиловый спирт, взятых в объемном соотношении 2, 5 : О, 8 : 2,8.Пробег фронта растворителей 18 см. После подсушивания на воздухе хроматограмму помещают в камеру для хлорирования на

1-2 мин (в камеру наливают смесь равных частей 1,53-ного раствора перманганата калия и 10 -ного раство— ра соляной кислоты ), выдерживают на воздухе 10-15 мин и опрыскивают

50 раствором о-толидина. R метилфенидата на силуфоле О, 44, на сорбенте

КСК, КСК ЛСЛ/254 Rg=0 50.

Пример 4. Две таблетки центедрина с содержанием по 10 мг метилфенидата в каждои растирают и

55 исчерпывающе экстрагируют хлороформом 3 раза по 5 мл хлороформа.

Экстракт отфильтровывают и доводят объем фильтрата хлороформом до

25 мл. Затем на стартовые линии хроматографических пластинок размером

9х12 со слоем КСК, КСК ЛСЛ/254 и силуфола 5х11 наносят 0,005 мл раствора метилфенидата в хлороформе в виде пятен диаметром около 1 мм. Хроматограммы развивают в системе хлороформ — уксусная кислота — этиловый спирт (объемное соотношение 3,5:1,2:

:3,2) . Пробег фронта растворителей 10 см. После подсушивания на воздухе хроматограмму помещают в камеру для хлорирования на 1-2 мин (в камеру наливают смесь равных частей 1,Я-ного раствора перманганата калия и 103-ного раствора соляной кислоты), выдерживают на воздухе 1015 мин и опрыскивают раствором о-толидина. Rg метилфенидата на силуфоле О, 52, на сорбенте КСК, КСК

aCI1/254 = 0,56.

Предлагаемый способ позволяет с высокой чувствительностью и специфичностью качественно определить метилфенидат. В предлагаемом способе специфичность повышена за счет использования величин R, являющихся характерными для токсико-химических веществ в данных условиях эксперимента. Значительные различия в величинах R веществ свидительствуют о высокой разделяющей способности, рекомендуемой хроматографической системы по отношению к веществаи,К метилфенидата на КСК, КСК ЛСЛ/254

0,53-0,01;. корфина R -0,12; R< кодеина О, 085 0,01; R к:окаина О; .

R стрихнина 0; R< йромедола О ;

К фенобарбитала и барбамила О).

К1 метилфенидата Hà силуфоле

0 49 0,01, R морфина О, 17 2 0,02:, R2 коаеина 0,12-0,02, кокаина, стрихнина, промедола, фенобарбитала и барбамила Rg =О.

Таким образом, предлагаемый способ расширяет возможности идентификации метилфенидата, так как установлено, что важные в токсико-химическом отношении вещества: морфин, кодеин, стрихнин, кокаин, промедол, фенобарбитал, барбитал не мешают .его обнаружению, в то время как в известном способе RL метилфенидата совпадает с R балластных веществ.

Кроме того, предлагаемый способ позволяет почти в 5 тыс. раз повысить чувствительность определения.

934365

Формула изобретения

Ф

Составитель Л.Русанова

Техред А. Ач Корректор О.Билак ю

Редактор С.Крупенина

Тираж 887 Подписное

8НИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 8-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 3927/40 филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ определения метилового эфира d, -фенил- с-- (пиперидил-2) уксусной кислоты гидрохлорида путем обработ ки анализи руемой пробы орг аническим растворителем с последующим хроматографированием на тонком . лое сорбента в системе растворите,лей и детектированием полученной хроматограммы реагентом, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности и специфичности определения в качестве органического растворителя исполь,зуют хлороформ, в качестве системы растворителей используют систему хлороформ — уксусная кислота - этиловый спирт, взятые в объемном отношении 2,5-3,5 : 0,8-1,2 : 2,8-3,2, перед детектированием хроматограмму предварительно хлорируют и в качестS ве реагента используют о-толидин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Taraj В.А. Metabolism ап4

disðos1tion of methyl - phenidate 1 С studies in man and animals

1. Pharmacol and Ex р. Ther, 1974, - 191, 11 3, р. 535-547.

2. Schubert В. Detection and

Identification nf Methylphenidate in

Human Urine and Blood Samples

Actachemica Scandinavica, 24(1970), Н 2, р. 433-438 (прототип) .