Штамм гриба реniсilliuм сусlорiuм wеsт вкм f 2146-продуцент липазы

О П И С А Н И Е " 90SISO

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-вдув (22) Заявлено 17.06.80 (21) 2942268/28-13 с присоединением заявки ¹â€” (23) Приоритет— (51) М. К .

С 12 N 15/00

Государственный комитет по делам изобретений н открытий (53) УДК 663.15 (088.8) Опубликовано 23,02.82. Бюллетень № 7

Дата опубликования описания 23.02.82

1

И. С. Звягинцева и T. Г. 1к1ирчинк

Институт микробиологии AH СССР (72) Авторы изо бретен ия (71) Заявитель (54) Ш ТАММ ГРИБА

PENICILLIUM CYCLOPIUM WEST BKMF 2146—

ПРОДУЦЕНТ ЛИПАЗЫ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, производящей ферментные препараты, и может быть использовано в кожевенной, меховой и медицинской промышленности, в мыловарении. при очистке бытовых и промышленных сточных вод для гидролиза жиров.

Известен штамм Oospora fragrans, который продуцирует липазу на среде, использующей в качестве источника углерода соевую муку и сахарозу, активную в диапазоне рН от 6 до 9 при 25 — 45 С «1).

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является штамм Penicillium roquefort! BKMF-2019 — продуцент липазы для сыроделия. Липаза гидролизует субстраты в пределах рН 2,75 — 9,0 при 4 — 60 С с максимумом активности при рН 6,0 и 45 С (2).

Недостатком этих штаммов является то, что максимальная активность продуцируемой ими липазы (2800 — 3000 л. е./мл/ч) имеет относительно ограниченные диапазоны рН (6,0 и 9,0) и температуры (не выше

45ОС) .

Цель изобретения — получение продупента липазы, которая имеет более высокую активность в широком диапазоне рН и температуры.

Цель достигается тем, что предлагается

2 штамм гриба Penicillium сусlоршгп West

BKMF 2146 (коллекция культур микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков, коллекцион5 ный номер 337). Штамм выделен с растения каланхое Дегремона (Ка1апс1тое daigremontiana Hamet et Perril). Культуру поддерживали на косяках с сусло-агаром. Внеклсточная липаза накапливалась через

t0 40 — 45 ч глубинного роста гриба на жидкой питательной среде с соевой мукой и минеральными солями, Накопление липазы определяли методом титрования по общепринятой методике Ота и Ямада. Активность

16 лнпазы в культуральной жидкости составляет 3800 — 400С л. е./мл/ч. Штамм Penicillium cyclopium West BKMF2146, в отли чие от упомянутых, синтезирует более активную внеклеточную лнпазу (до

4000 л. е./мл/час) с оптимумом действия в широких границах рН (4,0 — 10,6) и температуры (25 — 55 С).

Предлагаемый штамм имеет следующую морфолого-физиологическую характеристи25 ку.

Культурально-морфологические признаки.

На среде Чапека колонии умеренно-растущие, за 8 — 10 дней достигают 3 см. Плохо ские, бархатисто-шерстистые, нескладча4

90618

Формула изобретения

Составитель Л. Пашинина

Редактор Н. Багирова Текред А. Камышникова Корректор Т. Добровольская

Изд ЛЬ 115 Тираж 505

ВНИ14ПР1 Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, К-35, Раушская наб., и. 4/5

Заказ 946

Подписное

Загорская типография Упрполиграфиздата Мособлисполкома

3 тые, слегка зональные, с растущим белым краем. Спороносящая зона полынного цвета. Экссудат бесцветный, обратная сторона колонии желтая с розоватым оттенком.

Среду не окрашивает. Обладает специфическим резким запахом. Конидиеносцы шероховатые, одиночные или собраны в пучк«-коремии, трехярусные, асимметричные.

Веточки шероховатые 18 — 20 мкм, метулы гладкие 12 — 14 мкм, фиалиды 8 — 10 мкм.

Конидии круглые, гладкие диаметром 3—

3,5 мкм, Физиологические признаки.

Молоко пептонизирует, рН молока не изменяет. Желатину не разжижает. Крахмал гидролизует. На ломтиках моркови рост и спороношение обильные, спороножение серого цвета. На ломтиках картофеля рост и спороношение обильные, спороношение голубовато-зеленого цвета. 20

Пример. культивирование продуцента липазы Penicillium cyclopium West

BKNF2146 проводят при 28 С на качалке ь конических колбах на 750 мл с 50 мл среды следующего состава, г/л: (NH4) gSO4 — 3;

MgSO4 — 0,7; NaC1 — 1; Са (МОз) 2 — 0,4;

KH PO4 — 10; K>HPO4 — 1; дрожжевой экстракт — 0,5; СаС12 — 1; соевая мука—

20; рН среды до стерилизации 8,0. Посевным материалом служат конидии, смытые 00 водопроводной водой с 5-суточной культуры гриба, выросшего на сусло-агаре. Конидиями с одной пробирки проводится засев четырех ферментационных колб. Длительность процесса ферментации 45 ч. Уровень липолитической активности растущей культуры стабилен и не снижается до 7 сут.

Активность липазы, накапливаемой в культуральной жидкости, составляет

4000 л. е./мл/час (для эмульгированного оливкового масла) . Максимальная активность фермента сохраняется в широких

4 границах рН (4,0 — 10,6) и температуры (25 — 55 С). При рН 3,0 активность липазы снижается на 50"/О. При 5, 60 и 65 С активность липазы снижается на 30 lo. Активность липазы, находящейся в надосадочной жидкости, при хранении в течение 20 дней

uðè 4 С снижается на 40 /о.

В связи с этим продуцируемый штаммом фермент может быть использован при очистке бытовых и промышленных сточных вод, для гидролиза твердых триглицеридов в мыловарении, а также в меховой и кожевенной промышленности для обезжиривания шкур. Широкий диапазон рН и температуры, при которых сохраняется максимальная активность липазы, делает возможным ее применение в животноводстве в качестве добавок для повышения усвояемости молодняком питательных веществ корма и в медицине в качестве средства заместительной терапии при нарушении функции поджелудочной железы, так как рН желудочного тракта человека и животных изменяется от кислых до щелочных значений.

Штамм гриба Penicillium cyclopium

West В1(МР2146 (коллекция культур микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков, коллекционный номер 337) — - продуцент липазы.

Источники информации, прш1ятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР № 621724, кл. С 12 D 13/10, 1977.

2. Авторское свидетельство СССР № 608835, кл. А 23 С 19/02, 1976 (прототип) .