Способ получения термостабильных коли-фагов

Союз Советски к

Социалистические

Республик

Оп ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (»>905282 (Sl } Дополнительное к авт. свнд-ву (22) Заявлено 05.09.79 (2I ) 2818227!28-13 (5! )М. Кл.

С 12 (Ч 7/00 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

3Ъвулзустеенный нве1нтет

СССР ав делен нзвбретеннй н втерытнй

Опубликовано 15.02.82 Бюллетень № 6

Дата опубликования описания 18.02.82 (53) УДК 5 (088.8) (72) Авторы изобретения

Г. H. Никовская, Л. И. Глоба и > (. Н. Ротмист ов

t

Институт коллоидной химии и химии воды AH I/êðàèíñêîé ССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕ11ИЯ ТЕРМОСТАБИЛЬНЫХ

КОЛ И-ФАГОВ

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии я молекулярной биологии.

Известен способ получения термостабильных коли-фагов и культуры бактерий в условиях непрерывной аэрации с последуюшим отставанием и отделением фаголизата (1)

Однако известный способ не обеспечивает высокого выхода коли-фагов Т2 или MR 2, так как концентрации колифагов в культурах, полученных вырашиванием их смесей с бактериями, недостаточно высоки.

Бель изобретения — повышение выхода коли-фагов Т2 или МЯ .

Эта цель достигается тем, что в способе полученич термостабильных колифагов и культуры бактерий в условиях непрерывной аэрации с последуюшим отставанием и отделением фаголизата, смесь коли-фагов и культуры бактерий культивируют при 15 — 24 С . в течение о .

20 — 90 мин, а затем при 37+ О, 1 С. в тече»ие 2,5 — 3,7 ч.

Способ осушествляют следуюшим образом.

Культивирование смеси колифагов и

5 культуры бактерий производят в две стадии. Вначале смесь выдерживают при

15 — 24 С в течение 20 — 90 мин и о одновременной аэрации, а затем повытиак т

1О температуру до 37 0,1оС, продолжаяаэрацпю. Выдерживают при этой т мпературе в течение 2,5 — 3,7 ч. Полученный фаголизат отстаивают в течение 12 ч при комнатной температуре и определяют

1$ концентрацию коли-фагов.

Пример 1. 100 мл культуры бактерии Е. (pI>(B выр(нцивают и течение Зч при аэрации на качалке (128 кач/мин) и температуре 37 С

20 до концентрации 10 клеток/..(и на (роде (i0cT(>(3а, Г/л: l 0 "С> 0 g 7,00

KHgOO43,00; дИ (>,5>(>; (-люк,>за 4.00

ЧН4 А 1,00; 4g S04 7(0 0,03;

EQUAL 0,02; l>ll,0. ) i: луче(»(у> ку»(90

Составитель 10. Алмазов

РедактоР и. КУлинец ТехРед С МиГУнова КоРРектоР Г «{азарова

Заказ 2 92/3 8 Тира >к 504- Подписное

В««ИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 туру бактерий заражают фаго л с множ»ствепностью 1: 1. (месь коли-фаг Т2 бактерии выращивают при 22{>С и аэра вин на качалке (128 кач./мин) в тече Ги» 1 ч, а затем повышают температуру до 37 С и продолжают аэрацию в течение 3 ч. Полученный фаголизат отстаивают в течение 12 ч при комнатной температуре и определяют методом агаровых слоев по Грациа концентрацию коли-фага Т2, равную 2. 10 - БОЕ/мл.

Пример 2. 100 мл культуры бактерии E. ОЙ К = 12 выращивают при 37 С н аэрации нр канапке (128кач./мин) в течение 3 ч до концентрации 10 кле8 ток/мл на среде состава, г/л: { )Н ()4, 7,00; КН РО4. 3,00; <0 И О, 50; глюкоза 4, 00; NH q М 1, 00;, 4gB04 7H{)0 0,03; С{{СР 0,02; тиамин бромпд 0,09, рН доводят до 7,4 пр помощи l н.раствора Na0H . Получспную культуру бактерий зара>кают фагом MS2 с множественностью 10: 1.

Смесь коли-фаг — бактерии выращивают прп 22СС и аэрации на качалке (128 кач./

/мпн) в течение 1 ч, а затем повышают

L температуру до 37 С и продолжают аэращпо в течение 3 ч. Фаголизат отстаивают

B течение 12 ч при комнатной температуре и определяют методом агаровых

5282 4 слоев по Грациа концентрацию коли«>ага

МД, равную 1,8 10л БОБ/мл.

Таким образом, по предложенному способу выход коли-фага Т2 2,2 ° 10

БОЕ/мл, a no ному 4,2 10 БОЕ/м по предложенному способу выход колифага М5 1,8 ° 10 БОЕ/мл, по известному 3,6.10 БОЕ/мл. Следова{9. тельно, по предложенному способу выход коли -фага можно получить в 5 раз больший, чем по известному.

Формула изобретения

Способ получения термостабильных коли-фагов путем культивирования смеси коли-фагов и культуры бактерий в условиях непрерывной аэрации с последующим отстаиванием и отделением фаголизата, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода колифагов Т2 или МЪ, смесь коли-фагов и культуры бактерий культивируют при

15 — 24 С в течение 20 — 90 мин, а затем при 37+ О, l C в течение 2,53,7 ч.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Борисов Л. Б. Энтеропатогенные кишечные палочки и их фаги. Л., "Медицина", 1976, с. 160 — 163.