Способ определения нуредала в биологических объектах

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

(1890249

Союз Советских

Социалистических

Респубпик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ау (22) Заявлено 16. 04. 80 (21) 2911891/28-13 с присоелинением заявки МвЂ” (23) П рноритетвЂ”

Опубликовано 15. 12. 81. Бюллетень 1та 46

Дата опубликования описания 15. 12. 81 (51)М. Кл.

G 01 N 33/48

Государатвеный коинтет

СССР оо делам нзебретеннй н отхрытнй (53) УДК 612.13 (088.87 (72) Автор изобретения

P.B.Êóçüìèíûõ

«рте,«тном

1 1 Х (1 ««« .«-

Иркутский государственный медицинск и институт (7l ) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НУРЕДАЛА

В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЬЕКТАХ

Изобретение относится к медицине, в частности к токсикохимическому анализу, и касается техники определения нуредала в биологических объектах.

Наиболее близким по своей сущности к изобретению является способ определения нуредала в биологических объектах путем экстракции органическим растворителем с последующей хроматографией экстракта в тонком слое в системе органических растворителей и выявлением зоны нуредала проявляющим реагентом (15.

Недостатком известного способа является низкая селективность, так как ванадат аммония используют для идентификации многих препаратов производных изоникотиновой кислоты, и невысокая чувствительность определения нуредала (20 мкг), а также длительное время проведения анализа, вследствие двукратного хроматографирования в системе растворителей и предвари,тельного высушиванйя пластинки в течение 30 мин.

Цель изобретения - повышение точ.ности и ускорение .способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения нуредала в биологических объектах путем экстракции органическим растворителем с последующей хроматографией экстракта в тонком слое в системе орга10 нических растворителей и выявлением зоны нуредала проявляющим реагентом, экстракцию проводят хлороформом,полученный экстракт хроматографируют в системе растворителей хлороформ:эта1S нол:аммиак, взятых в соотношении

20,0: 10,0:0,2- 1,0, а в качестве проявляющего реагента используют 2 М раствор молибдата натрия. . Способ осуществляют следующим образом.

Биологический объект, содержащий нуредал, растирают, переносят в колбу и экстрагируют хлороформом в грех890

t5 формула изобретения кратном повторении. Затем экстракт фильтруют в мерную колбу емкостью

50 мл и разбавляют хлороформом до метки, На стартовую линию пластинки

"силуфол" размером 5 11 наносят микрокапилляром 0,01 мл раствора в виде пятен диаметром 1 мм для проведения хроматографии. Хроматографируют в системе растворителей хлороформ:этанол:

: аммиак, взятых в соотношении 20,0:

: 10,0:0,2- 1,0. Пробег фронта растворителя 10 см. Далее пластинку подсу.шивают, и в качестве проявляющего реагента используют 2 М раствор молибдата натрия.

Проведение экстракции нуредала из биологического объекта хлороформом в трехкратном повторении позволяет полнее экстрагировать нуредал. Использование смеси растворителей хлороформ:этанол:аммиак в предлагаемом соотношении повышает чувствительность идентификации в 4 раза.

Изменение соотношения первых двух компонентов смеси нежелательно,так как приводит к наложению зон нуредала и экстрактивных веществ.

Количество аммиака в смеси можно варьировать в зависимости от природы исследуемого объекта, при этом содержание аммиака в смеси 0,2 ч позволяет отделить нуредал от экстрактивных веществ, выделенных из печени.и крови,а при содержании аммиака 1,0 ч. отделить нуредал от экстрактивных веществ мочи и таблеточной массы.

Использование 2 M раствора молибдата натрия в качестве проявляющего реагента позволяет получить краснобурое окрашивание только с нуредалом при его низких концентрациях.

249

/ зона исследуемого вещества получается более четкой и располагается в центре пластинки (Ы = 0,53-0,027)

Затем хроматограмму помещают в систему растворителей хлороформ:этанол:

:аммиак, взятых в соотношении 20:10: о

:1,0 ° Пробег фронта растворителя

10 см. Пластинку подсушивают и опрыскивают 2 M раствором молибдата на1Î трия. Нуредал проявляется в виде красно-бурых пятен, Rf = 0,53-0,027.

Чувствительность проявляющего реагента по отношению к нуредалу составляет 5 мкг.

Пример 2. Из затравленных биологических объектов (кровь, моча, печень) нуредал извлекают при рН 5-6 хлороформом. Затем на стартовую линц нию пластинки силуфол" размером 5х 11

)наносят микрокапилляром 0,01 мл полученного экстракта в виде отдельных пятен диаметром 1 мм. Хроматограмму помещают в систему растворителей хлороформ:этанол:аммиак, взятых в соотношении 20:10:0,2. Пробег фронта растворителя 10 см. Пластинку подсушива. ют, опрыскивают 2 М раствором молибдата натрия. Нуредал проявляется зо в виде красно-бурых пятен, Rf = 0„530,55. Чувствительность проявляющего реагента по отношению к нуредалу составляет 5 мкг.

Предлагаемый способ позволяет с

35 высокой точностью. определять нуредал в биологических объектах и сократить время проведения анализа по сравнению с известным в 2 раза. Способ прост, общедоступен и не требует спе4р циального оборудования для его реализации.

Пример 1. Одну таблетку, содержащую 25 мг нуредала, растирают, количественно переносят в колбу и экстрагируют хлороформом 3 раза по

l5 мл при рН 5-6. Экстракт фильтруют в мерную колбу емкостью 50 мл и разбавляют хлороформом до метки. На стартовую линию пластинки "силуфол" .размером 5Xll наносят микрокапил ляром 0,01 мл полученного раствора в виде пятен диаметром 1 мм. Проведение хроматографии на пластинке "силуфол" позволяет повысить чувствительность определения нуредала, так как

45 Способ определения нуредала в биологических объектах путем экстракции органическим растворителем с последующей хроматографией экстракта в тонком слое в системе органических

50 растворителей и выявлением зоны нуредала проявляющим реагентом, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, экстракцию проводят

55 хлороформом, полученный экстракт хроматографируют в системе растворителей хлороформ:этанол:аммиак, взятых в соотношении 20,0:10,0:0,2-1,0, а

890249

Составитель А. Бражникова

Редактор О.Персиянцева Техред М. Надь Корректор Г.Огар

Заказ 10960/71 . Тираж 910

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб, д.4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная,4 в качестве проявляющего реагента используют 2 М раствор молибдата натрия °

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1 Фартушный А Ф Идентификация и определение нуредала в биологическом материале. - Фармацевтический журнал. М., "Медицина", 1979, Н 6, с.28-31.

Способ определения нуредала в биологических объектах

Способ диагностики хронического простатита // 888040

Способ диагностики остеопороза // 885882

Реактив для определения скрытой крови // 885881

Способ разделения смеси биологических частиц // 879469

Способ диагностики неврологических осложнений сифилиса // 879370

Способ определения криза отторжения трансплантированной почки // 877435

Способ выявления капиллярной сети надпочечников // 877393

Способ приготовления гистологического препарата твердой мозговой оболочки спинного мозга // 877392

Способ определения коагуляционных свойств крови // 875281

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750