Способ количественного определения глюкозы

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

РЕСкУблмк

<1>732734 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 160977 (21) 2524932/23-04 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Опубликовано 050580. Бюллетень НР1 7

Дата опубликования описания 050580 (51)М. Кл.2

G 01 N 21/24

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 543.432 (088. &) (72) Авторы изобретения

В.П. Гаврилов, А,А. Туманов и Е.A. Таранкова

Научно-исследовательский институт химии при Горьковском государственном университете им. Н.И. Лобачевского

{71) Заявитель (5 4 ) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ГЛЮКОЗЫ

° Недостаток способа — его длительность и сложность. 15

Наиболее близким к описываемому изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определени я глюкозы путем обработки - =-з:лэнруе- 20 мой пробы ледяной уксусной кислотой, парааминобензойной ки=лотой при 100оС с последующим охлажде -:и=-.."ü. и спектрофотометрированием полученного раствора (23, 25

Недостатком способа является ниэ <ая чувствительность определения (0 5-1, 2 мг/мл) .

Цель изобретения — повышение чувствительности определения. он

Спектры поглоще ни я гли ко э илами на (N-n-карбоксифенил е -Д-гликоэилами—

Щ на) и парааминобензойной кислоты в

Изобретение относит ся к аналитической химии, а именно к способам количественного определения глюкозы.

Известен способ количественного определения глюкозы путем обработки анализируемой пробы иодатом калия, серной кислотой с последующей отгонкой образовавшегося формальдегида и обработкой его сульфитом натрия .и хромотроповой кислотой, и спектрофотометрированием полученного раствора (1) .

Поставленная цель достигается обработ кой анализируемой ттробы ледяной уксусной кислотой, парааминобензойной ки слотой в и эопропиловом спирте при 70 — 75oC с последующим охлаждением и обработкой охлажденного раствора соляной кислотой до рН 0,99-1,01 и спектрофотометрированием полученного раствора.

Отличием способа является проведение обработки в присутствии иэопро пилового спирта при 70-75 С и последующая обработка охлажденного раствора соляной кислотой до рН О, 991,01.

В результате прямой конденсации углеводов и парааминобенэойной кислоты в укаэанных условиях образуется гли козил амин

СН ОН

0 о> -Он+н к- у-СОои

2 но

ОН нн -соон

732734

Таблица 2

n = 5; =. 0,95

Глюкоза, мг/мл

0 i 01

0,01 1 0,002

0,05 + 0,010

0,10 +0,010

0,29+ 0,03

0,49+ 0,04

1,02+ 0,03

2,01 + 0,01

3,03+ 0,07

4,02+ 0,15

5,05+ 0,19

0,05

0i10

0,30

0,50

1,00

2,00

3,00

4i00

5,00

Т а б л и ц а 3

n=5; =0,95

n = 5; = 0,95>

Глюкоза, мг/мл

Глюкоз а, мг/мл

Вне

0,10 + 0,040

0,3О + 0,1О

0,48 + 0,10

0,97 + 0,19

3,01 + 0,53

4,02+ 0,60

0,10

О, 01+ О, 002

О, 05+0, 01 0

0,10+0,009

0,2920 03

0,01

0i 30

0,05

0,50

0,10

li0

0,30

3,00

0,49+0, 04

4,00

1,02+0,03 2, 01 0,01

3, 03 0, 07

4, 0210,15

1,00

2,00

3100

4,00

5,05 0,19

5,00

0,1 н. растворе НСР существенно различаются. B результате ионизации электронно-допорной аминогруппы спектр поглощения парааминобенэойной кислоты сдви гает ся в коротковолновую о бласт ь с максимумом при рН 0,99-1,01 225 нм.

Это обеспечнвает возможность определения гликоэиламина в присутствии парааминобензойной кислоты. Определение гликоэиламина осуществляют в указанных условиях путем измерения оптической плотности растворов при — 290 нм в кварцевых кюветах (6 — 1 см) . Нижний предел обнаружения, характеризуемый молярным коэффициентом светопоглощения (зкстинкции), составляет для гликозиламина

14 2 10з, что обеспечивает целесообразность применения предлагаемого способй для определения углеводов и углеводметаболицирующих микроорганизмов и анализа процессов микробно- 20 логического окисления сточных вод.

П р н м е р 1. В пробирки со шлифами помещают 1 мл водного раствора глюкозы (О, 01-5, О мг/мл) и последовательно добавляют 0,3 мл ледяной 25 уксусной кислоты и 3 мл 1%-ного раствора парааминобенэойной кислоты в изопропиловом спирте.

Растворы энергично перемешивают и помещают на 60 мин в термостат ЗО при 70 С, затем на 30 мин в холодильник (3-4ОС). Непосредственно перед измерением разбавляют растворы в

25 раз 0,1 í. НСР (рН 1,0) и измеряют оптическую плотность при Л„ — ?90 нм в кюветах (K = 1 см) на спектрофотометре СФ-16. Результаты проведенного определения глюкозы представлены в. табл.1.

Таблица l

Пример 2. Способ по примеру 1, отличающийся использованием температуры термостатирования растворов 75 С.

Результаты определения представлены в табл.2.

Пример 3. Способ по примеру 1, отличающийся использованием температуры термостатирования растворов 80 С.

Результаты определения представлены в табл.3

Повышение температуры термостатирования выше 80бС нецелесообразно, так как приводит к изменению объема анализируемой смеси вследствие выкипания.

Пример 4. Способ по примеру 1, отличающийся использованием температуры термостатирования боос.

732734

Результаты определения представлены в табл.4.

Таблица 4

n = 5;,(.= О, 95

Глюко э а, мг/мл

Вве (О

3,00

4,00

5,00

Инт ерв ал температур термост атирования 70 С вЂ” 75 C является оптимальным при проведении процесса, так как обеспечивает максимальный диапазон определяемых содержаний (О, 01Таблица 6

Ре агент ос

Парааминобензойная кислота

О, 5-1, 2 не отмечена 1-1, 5

470

100 (из вест— ный способ) мг/мл крови

Парааминобензойная кислота О, 01-5, О (настоящи и способ) 290 70-75

1,5

Формула изобретения

Способ количественного определения глюкозы путем обработки анализируемой пробы ледяной уксусной кислотой, парааминобензойной кислотой при нагревании с последующим охлаждением и спектрофотометрированием полученного раствора, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения чувствительности определения, обработку ведут в присутствии изопроS5 бО

ЦНИИПИ Заказ 1550/8 Тираж 1019 Подписное

Филиал ППП Патент, r.Óæãoðoä, ул. Проектная, 4

0,10

0,30

0 50

1,00

2,00

0,10 + 0,005

0,28 0,01

0,51 + 0,02

1,03+ 0,04

1,99 + 0,08

3,02 а 0,15

4,01+ 0,24

5,10 + 0,25

5,00 мг/мл) и минимальную среднюю ошибку определения (5%) .

Зависимость ошибки определения от определяемых концентраций представлена в табл.5.

Таблица 5

15 60 0,10-5, 00 5

70 О, 01-5, 00 5

75 0,01-5,00 5

80 0,10-4 00 20

Преимуществом настоящего способа перед известным является то, что он создает возможность определения

>S углеводов в интервале 0,01-5, О мг/мл.

Результаты сравнения показателей точности, чувствительности и длительности настоящего и известного способов представлены в табл.б. пилового спирт а при температуре

70-75 С с последующей обработкой охлажденного раствора соляной кислотой до рН 0,99-1,01.

Йсточники информации, принятые во внимание при эксперт эе

1. Коренман И.М. Фотометрическнй анализ . Методы определения органических соединений. М., Химия, 1970, с. 207.

2. Там же, с, 157--158 . (прототип),