Способ получения фрагментов рибонуклеиновых кислот
О,, Kni
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союз Советских
Социалистических
Республик (ii) 722921 (6! ) Дополнительное к авт, свид-ву (22) Заявлено 310778 (21) 2650987/23-04 с присоединением заявки № (23) Приоритет (51)М. Кл.2
С 07 Н 21/02//
A 61 К 29/00
Государственный комитет
СССР по делам изобретений и открытий
Опубликовано 250380 Бюллетень ¹ 11 (53) ДК547.963.
° 3,07 (088.8) Дата опубликования описания 260380 (72) Авторы изобретения
О,Б. Степанова, В.Г. Метелев, В.Д. Смирнов и Н.П. Родионова
Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. N.B. Ломоносова (7! ) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФРАГМЕНТОВ РИБОНУКЛЕИНОВЫХ
КИСЛОТ
ЗО
Изобретение относится к усовершенствованному способу получения фрагментов рибонуклеиновых кислот (PHK), соединений, которые могут при- 5 меняться в биохимических исследованиях и генетической инженерии, Известен способ получения фрагментов дезоксирибонуклеиновых кислот (ДНК), заключающийся в инкубации НК с комплементарным к заданному участку ДНК олигодеэоксирибонуклеотидом, связанным с агентом, модифицирующим ДНК, с последующим выделением фрагментов изменением рН-сре-. ды (1) . Однако данный метод поэволя!
5 ет получать фрагменты только ДНК, поскольку PHK устойчива к такому изменению рН.
Известен также способ получения фрагментов РНК, в котором PHK гидролизуют рибонуклеаэами, специфическими к определенным основаниям (2), Недостатком известного способа является то, что оснований, составляющих цепь РНК, всего четыре (не считая миноров) и получение фрагментов заданной структуры способ не обеспечивает.
Белью изобретения является обеспечение строго направленного расщепления РНК, Это достигается тем, что PHK инкубирует с олигодеэоксирибонуклеотидом комплементарным к заданному участку PHK с последующим расщеплением
PHK в области образовавшегося комплекса обработкой рибонуклеазой Н, Предлагаемый способ получения фрагментов РНК заключается в инкубации PHK с олигодеэоксирибонуклеотидами комплементарными к заданному участку РНК, в последующем расщеплении PHK в области образовавшегося комплекса обработкой рибонуклеазой
Н(РНКаэа Н) .
Пример 1 ° 30.мкг PHK бактериофага М $2 (3659 нуклеотидных звеньев) инкубируют с 1,5 мкг октадезоксирибонуклеотида деэоксицитидилил-(3 -5 ) -тимидилил-(3 -5 )— цитидилил-(3 -5 ) -аденилил-(3 -5 )—
-тимидилил-(3 -5 ) -гуанилил-(3 -5 )-тимидилил-(3 -5 ) -тимидина комплементарного участку PHK между 1745 и 1752 нуклеотидными звеньями в
0,05 мл буфера (рН 7,9) в течение
30 мин. при 4 С. Затем добавляют
I А % 4, ) ° 4 % у « ° L gf ° ° > 1 " е ° ° "L °
722921
Формула изобретения за
Составитель Л. Никулина
Редактор Н. Данилович Техред О.Андрейко Корректор М, Нигула
Заказ 307/14 Тираж 495 Подписное
БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5
ФИЛИАЛ ППП Патент, r. Ужгород, ул, Проектная, 4
0,3 единицы РНКазы Н и выдерживают
5 ч при той же температуре, .Реакцию останавливают добавлением додецилсульфата натрия до концентрации 0,5% и смесь прогревают в течение 4 мин при 70 С, Продукты реакции, исследованные методом электрофореза в 3%-ном олиакриламидном геле, отличаются по подвижности от исходной PHK но образуют одну зону из-за близости молекулярных весов получающихся фрагментов (0,6 10 и
0,58 10 ), Пример 2, 40 мкг РНК бактериофага М82 инкубируют с 2 мкг додекадезоксирибонуклеотида деэокситимидилил-(3 -5 ) -тимидилил-(3 -5 )—
-тимидилил-(3 -5 ) -цитидилил-(3 -5 )—
"цитидилил-(3 -5 ) -аденилил-(3 -5 )—
-тимидилил-(3 -5 ) -цитидилил-(3 -5 )-тимидилил-(3 -5 ) -тимидилил-(3 -5 )-тимидилил-(3 -5 ) -тимидина комплементарного участку PHK между 1679 и
1690 нуклеотидными звеньями в
0,05 мл буфера (рН 7 9) в течение
30 мин при 4оС, Затем проводят обработку 0,3 единицы РНКаэы Н в тече- 25 ние 5 ч при 4ОС, Реакцию останавливают добавлением этилендиаминтетраацетата до концентрации 0,1% и смесь прогревают 4 мин при 70 С. Продукты реакции, исследованные методом электрофореза в ЗЪ-ном полиакриламидном геле, образуют две дискретные зоны (О 63 х 10 мол, вес. и 0,55 х
Я.О мол, вес.
Способ получения фрагментов рибонуклеиновых кислот (РНК), о т л и ч а ю щ и.й с я тем, что, с целью обеспечения строго направленного расщепления PHK PHK инкубируют с олигодезоксирибонуклеотидом комплементарным к заданному участку PHK c последующим расщеплением PHK в области образовавшегося комплекса обработкой рибонуклеазой Н.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1.. Кнорре Д.Г, Аффинная модификация белков, нуклеиновых кислот и их комплексов, Мол. биол, П, 1304-1310.
1977, 2; w. Fiers. R. Contreras, F. Ducrincs, G. Haegeman, D.lserentant, J.Herregaert, W.Min Jou, F.
MoQemans, 4.Raeymaercers А. Vanden Bernhe
G.VoQckaert N,3sebaert "Complete nucQeoti8e SeCpence of t>acteriophage MS2 RNA" Nature, 260, р. 500, 1976 (прототип) .
