Способ определения активности полифенол-оксидазы

Ь П ИСХЙИ Е

ИЗЬБРЕТЕН ИЯ М F 6; F3tO . Ч >;я

+rLTQlk ° ь- . ° . i/4 1 . м

Союз Советски к

Социалистических

Республик 706771

К АВТОРСКОМУ СВЙДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 12 01.78 (21) 2574701/23-.04 с присоединениент заявки М (51) М. Кд.

6 О! N 31/14

Ввударстванвй квинтет

СССР

Io а@вам изобретений и вткрьпий (23 } Приоритет

Опубликовано 30.12.79. Бюллетень %48

Дата опубликования опйсаиия 30.12.79

4а;" N (53) УДК

543.42б ..(088.8) (72) Автори изобретения

"t

Д. И. Стом, С. С. Тимофеева и Н. А. Казаченко

Научно-исследовательский институт биологии при Иркутском государственном уййверсйтете им. А. А. Жданова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПОЛИФЕ110ЛОКСИДАЗЫ

Изобретение относится к области аналити- 6,5 — 8,0 и измерении люминесценции полученческой химии, а именно к способам определе-; ного раств6ра. ния активности полифенолоксидазы. -: Эскулетин принадлежит к классу природных

Известен способ определения активности поли-" фенольных соединений — кумаринов.— .ы.=; фенолоксидазы, основанный на измерении колй - " " " Предлагаемый способ позволяет определять честна поглощенного кислорода f11 .. активность полифенолоксидазы с высокой

Недостатком способа является невысокая "-„, — - чувствительностью при концентрации Г = точность определения. ==-=-: - =-: 10 М.

Наиболее близок к описываемому по техни- ; - - Пример. 50 мг ацетонового препарата, ческой сущности и достигаемому результату приготовленного из клубней картофеля или

„--,:- 10 с способ определения активности полнфенолок-" водорослей нителлы вносят в колбу с 50 мл сидазы, заключающийся в обработке анализиру- 5 10" М раствора эскулетина в фосфатном ющей пробы субстратом-хлорогеновой кислотой буфере при рН б,75 и через некоторые промес последующим спектрофотометрировайием по- жутки времени отбирают пробы ло 2 — 3, мл лученного раствора (2). переносят в кювету с 1 = 1,5 мм, записываНедостатком способа является низкая чувст- ют спектр люминесценции на спектрофотомет1$ вительность (минимальная определяемая кон- ре МР$ = 50. центрация равна 10 М) . Активность выражают как изменение интенЦель изобретения — повышение чувствитель- - снвности свечения за 5: или 10 мин 1 мг прености определения. . 20 парата.

Поставленная цель достигается описываемым Интенсивность свечения растворов зскулетиспособом определения активности полифенол-: ., на (10 и 5 ° 10 М) при добавлении фермснтоксндазы, заключающимся в обработке анали-- --., ных препаратов нителлы и картофеля {! ) мгlмл) зируемой пробы зскулетином при рН среды:" . . приведена в табл. 1.

706771

1 ! аблица!

Время от начала

Интенсивность свечения в нтенсивность свечения в пытах с препаратом нителлы при концентрации эскулетина опытах с препяратом карто феля при концентрации эскулетина опыта, мин

10-4М 5 10-ЗМ

10 «М

5 10 М

0,90

0,79

0,89

0,96

0,77

0,73

0,76

0,57

0,75

0,68

0,70

0,68

0,70

0,67

0,50

Продолжение таблицы 3

7,0

2О

7,5

0,25

0,30

0,28

0,32

Препарат

0,27

8,0

0,33

5 мин 10 мин

Нителла 0,20 0,28

Формула изобретения

Картофель 0,15 0,20 (клубни) Таблица 3

0,20

0,25 (,75

Составитель .Л.Соломенцева.

Редактор А. Соловьева Техред О. Андрейко Корректор Н.Горват

Заказ 8214/38 Тираж 1073 Подписное

И!1ИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушска» наб., д. 4/5

Финиян ЦП!! "!1атент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Активность полифенолоксидаэы в ацетоновых препаратах нителлы и картофеля приведенът в табл. 2., Таблица 2

Оптимальной областью, пригодной для аналитических определений люминесцентным методом, является область рН от 6,5 до 8,0.

Активность препаратов фенолоксидаз при различных рН (изменение интенсивности люминесценции за 5 мин 1 мг препарата) приведена в табл. 3.

Способ определения активности полифенол 0 оксидазы путем обработки анализируемЬй пробы субстратом, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности определения, в качестве субстрата используют эскулетии, обработку ведут при рН сре35 ды 6,5 — 8,0 и измеряют люминесценцию полученного раствора.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе !.Йель g.Í."TÚt рвЕ рйепотоМ о1 ТоЬо40 со с!пд 1тЗ Раг1 с рсй,!ой ЬДю1ыо INeta-! зов,тчм "ДгсЫч S ocbern В орЪю.1968,!!ЧФ, р 198-2о8.

2. Мет,е " E.С. 6wavS !!.Э- Занге,ct ересЬорЪо о1пЕ1г1с acid "51ocbem.3 орИ е. Дс4а 4958,Ì28,р 638-639