Способ количественного определения пантотеновой кислоты в жидкой питательной среде
Союз Советсник
Социалистических
Республик
Оп ИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ!!ч699013
Ж
J о (61) Дополни гельное к авт. свид-ву (22) Зая влено 26.06.78 (21) 2625748/28 — 13
1 (5l ) М. Кл.
Г 12 К 1/00 с присоединением заявки .%
Гвоударстооннь!й комитет (23) Приоритет до делам нэобретеннй н открьпнй
Опубликовано 25.11.79 Бюллетень J% 43 (53) УДК576.8. . 093. 1 (088.8 ) Дата опубликования описания 25,11.79 (72) Авторы изобретения
Н. А. Хозова и 10 Г. Сучков (71) Заявитель
Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумнь1й институт (54) СГ!ОГОБ КОЛИЧЕГТВЕННОГО ОП1 ЕДЕЛЕНИЯ ПАЕ1ТОТЕНОВОЙ1
КИСЛОТЫ В ЖИДКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ
Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологии.
Известен способ количественного определения пантотеновой кислоты в жидкой питательной среде путем внесения в нее тест-культуры с
5 последующим инкубированием и определением количества пантотеновой кислоты по мутности среды 11).
Чувствительность способа составляет
10-з
Однако известный способ ие обеспечивает высокой точности.
Целью изобретения является повьппсиие точности способа.
Это достигается тем, « п в качестве тест
15 культуры Используют штамм jersinia pestis
Ev Pan 1.
Штамм jersinia pestis EV Pan 1 получен из вакцинного штамма EV после возггейсзвия нитрозометилмочевиной из числа вариантов, устойчивых к налидиксовой кислоте, и обладает стабильно высокой избирательной реакцией на этот витамин. Штамм jersinia peszis EV Рап 1 депонирован в коллекции Всесоюзного ордена
Трудового Красного Знамени иаушо-исследовательского института Микроб и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиологобиохимическимн признаками.
Культурально-морфологические признаки.
Полиморфные, грамнегативиые палочки с закругленными концами, длиной 1.-2 мкм и шириной 0,3 — 05 мкм. Жгутиков нс имеет. спор не образует. Бульон Хоттингсра, хлопьсвидиый осадок, бульон прозрачный. Агар Хоттингсра.
Колонии диаметром 0,5 — 2 мм с припо,-н яты м зернистым центром, окрашенные в сероватый цвет и имеющие фестончатую периферическую зону.
Физиолого-биохимические свойства.
Оптимум роста 26 — 28 Г. Устанавливает глюкозу, мальтозу, маннит, арабинозу, галактозу, маннозу. Восстанавливает нитриты. Желатину не разрушает. Индол не обра !уст. Сероводород выделяет. Продуцирует пестицин 1. Грела
Джексона — Берроуза с темином. Образует иепигментированные колонии.
Авирулентен для белых мьиией при подкожном введении от 10 до 1() микробных клег я
Составитель Е. Дубовицкая
Техрсд Н.Бабурка Корректор Н. Задерновская
Редактор О. Степина
Тираж 526 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., n. 4/5
Заказ 7448/26
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4
3 6990 ток и для морских свинок до 10 микробных клеток.
Требует для роста наличия в питательной среде метионина, фенилаланина, треонина, цистеина и патотеновой кислоты или пантотената кальция.
Способ иллюстрируется следующим примером.
Э ,Для получения опытной суспензии используют 48 ч культуру, выращенную при 28 С на плотной агаровой среде. Готовят густую взвесь 1О в физиологическом растворе, отмывают клетки центрифугированием с целью освобождения от питательных веществ, вновь ресуспендируют в физиологическом растворе до концентрации
2 10 микробных клеток (м.к) в 1 мл по оп- 15 тическому стандарту мутности и ставят в термостат при 28 С на 3 ч для истощения внутриклеточных запасов витаминов.
8 качестве основной используется синтетическая среда на фосфатном буфере М/15 рН 20
7,1 — 7,2 (Na2HPO4 — 66,6 г КН2Р04 — 33,4 г, вода — 1000 мл). Непосредственно перед опытом вносят стерильно следующие компоненты в 100 мл основы: (NH4)g $04 20% — 0)5 мл, MgSO4 7Н О 10% — 0,25 мл, Глюкоза 40%
0,5 мл, раствор сульфита натрия до концентрации 0,1% и аминокислоты — метионин, треонин, фенилаланин и цистеин-в дозах 0,01 мг/мл.
Готовят два параллельных ряда пробирок с последовательными десятикратными разведениями исследуемой питательной среды. Разводят до 10 основной синтетической средой без добавления лантотеновой кислоты.
Для построения стандартной кривой роста тест-штамма два параллельных ряда пробирок
13 заполняют по 4,5 мл основной синтетической среды с добавлением пантотеновой кислоты, в количествах 102 1Q 1 10- 10 г 10-з
10 мкг/мл. Затем в каждую пробирку, как в опытном, так и в стандартных рядах, вносят по 0,5 мл истощенной суспензии тест-штамма, создавая посевную концентрацию 200 млн м.к./мл.
Посевы помещают в термостат при 28 С.
После выдерживания посевов в течение 1 сут производят ежедневное определение интенсивности роста тест-штамма путем измерения мутности среды с помощью нефелометра, Использование изобретения позволяет определить количество пантотеновой кислоты в преде10-4 /
Формула изобретения
Способ количественного определения пантотеновой кислоты в жидкой питательной среде путем внесения в неЕ тест-культуры с последующим инкубированием и определением количества пантотеновой кислоты по мутности среды, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве тесткультуры используют штамм jersinia pestis
EV Pan l.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Одинцова Е. И. Микробиологические методы определения витаминов. М., 1959, 119—
120.
