1 (23) 2640560/04 (22) 10.07.78 (46) 30.10,93 Бюл. Ия 39-40 (73) Белорусский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии; Инстйтут биоорганической химии АН БССР (72) Жаврид С.В„Вотяков ВИ„Шашихина M.Í„×åïнов EM„. Ахреи АА; Михайлолуло ИА; Макаренко

МВ„Квасюк ЕИ. (64) ПРОИЗВОДНЫЕ.ДИЦИТИДИИ-6 -ПИРОeoceAMf ЙРОЯВЛЯКИЦИЕ ЙРОЮВОВИРУСНУЮ А1ЛИВНОСТЪ

689202

Изобретение относится к новым производным класса нуклеиновых кислот, общей формулы:

$$$

NH, 0Н а- А-0-R

I н 0 ! 0

О-Р-О-R, где Е--01с или

0Н

ОН обладающих противовирусной активностью.

В современной медицине известны ингибиторы вирусов, а именно производные О2. 2 -ангидро-1-фО-арабинофуранозил)-цитозина, обладающие вирицидной и цитоксической активностью. Данных о том, что упомянутые производные обладают ингибирующей активностью в отношении вирусов герпеса и адено. не имеется.

Известны также производные 2,2 -цик1 лоцитидина формулы

$$$ .НЧ

03, где R1=CO. Н или Н2РОз.

Й2=-Н или Н2РОз.

Y=H или ОН, X=H. СНз. или Hal, обладающие противоопухолевой и противовирусной активностью. Данных об активности в отношении вирусов герпеса и адено не имеется.

Целью изобретения является расширение ассортимента противовирусных препаратов, проявляющих ингибирующее действие в отношении вирусов герпеса и адено.

Поставленная цель достигается путем синтеза прои з водны х дицитидин-5 -пирофосфата. основанного на известной реакции конденсации нуклеозид-5 -монофосфата в присутствии дициклогексилкарбодиимида.

Настоящий способ получения производных дицитидин-5 -пирофосфата за2 ключается в том. что безводный 0,2 циклоцитидин-5 -монофосфат или безвода ная пиридиниевая соль 2 . 3 . N -триацетиларабинофуранозилцитозин-5 -монофосфат подвергаются конденсации в пиридине в присутствии дициклогексилкарбодиимида с последующим выделением целевого продукта путем обработки реакционной смеси эфиром, водой. и хроматографическим разделением на колонке с ДЕАЕ-целлюлозой. Пример 1. P .Р -ди(0 .2 -циклоцити2 дин-5 )-пирофосфат.

5 К навеске 0,2 -циклоцитидин-5 -моно1 фосфата (0,2 г., 0,65 ммоль), высушенной упариванием с пиридином (Зх20 мл). приливают 4 мл безводного пиридина, 5 мл диметилформамида и прибавляют дициклогексилкарбодиимид 0,9 г (4,3 ммоль). Реакционную смесь выдерживают lO сут при комнатной температуре и выливают в эфир (0,5 л). Эфир декантируют. К остатку приливают 5 мл воды и экстрагируют эфиром. Водный слой отделяют и наносят на колонку с . ДЕАЕ-целлюлозой ДЕ-32 (АсО-, 1,6х45 см, элюируют водой; Получают 0,075 r (39 >) Р, P. -ди(0 вЂ”, 2 -циклоцитидин-5 пирофосфата.

2 2 1

Т.пл. 227 С (с разл.), Rf 0,19.

20 УФ: Л Н20 (нм) (сс-10 ): 232 (14,7). 263 (16,4).

Пример 2, P,P -ди(арабинафуранозилцитозин-5 )-пирофосфат.

Пиридиниевую соль 2 .3 .N -триацетилараби нофураназил цитозин-5 -монофосфата 0.53 г (1 ммоль) высушива1от упариванием с пиридином (3х20 мл), растворяют в 10 мл безводного пиридина, прибавляют 1,2 г (5.8 ммоль) дициклогек30 силкарбодиимида и оставляют на 10 дней при комнатной температуре. К реакционной смеси приливают 20 мл воды. экстрагируют эфиром.,водный раствор упаривают. Для удаления ацетильных групп остаток обрабатывают водным аммиаком (25 р ИН10Н, 72 ч при 20 С). Упаривают, наносят на колонку . с ДЕАЕ-сефадексом А-25 (НСОз, 1.8х30 см) и хроматогафируют s линейном градиенте концентрации триэтиламмонийбикарбона40 та (1л 0,05 M вЂ” 1 н 0.2 M ТЕАБ). Водный раствор упаривают с пиридином и пропускают через колонку с ионообменной смолой Дауэкса 50х12 (Н -форма). Получают

0.26 г (83 ) P .Р -ди(арабинофуранозилци45 тозин-5 )-пирофосфата. T.пл. 208 С (с разн.), Rf 0.12.

YФ: Л Н20 (нм)(с:10 з): 275 (17,5).

Антигерпетическое действие производных дицитидин-5 -пирофосфата оценивалось по снижению цитопатогенной активности вируса, репродуцированного в присутствии соединений в культуре ткани фибробластов куриных эморионов (ФЭК). Активность в отношении аденовируса 3 типа также оценивалась по снижению цитопатогенной активности вируса, репродуцированного в культуре ткани пассируемых кожно-мышечных клеток эмбриона человека в присутствии соединений.

689202

Таблица1

Влияние производных дицитидин-5-пирофосфата на инфекционную активность вируса герпеса

Примечание: ти1р вируса 4,5-3.5 lg ТПДвл.

Максимально переносимая концентрация испытуемых соединений в культуре ткани ФЭК составляла 1600 мкг/мл (табл.1).

P P -ди(0,2 -циклоцитидин-5 )-пирофосг г фат в концентрации 400 мкг/мл вызывал снижение титра вируса на 3.0 Ig ТПД50.

Концентрации значительно более низкие (100. 50, 25; 10. 5 и 2) также вызывали ингибицию вируса герпеса на 4,5 вЂ” 2;0 1д. Минимально действующей была концентрация в

1 мкг/мл, которая вызывала снижение титра вируса на 2,0 lg. Химиотерапевтический индекс Р,Р -ди(0,2 -циклоцитидин-5 )-пиро1 2 . 2 l фосфата составлял 1600.

Р, Рг-ди(араби нофура нозил цитозин-5 )пирофосфат в концентрации 400 мкг/мл вызывал.сни>кение титра вируса на 3.5 Ig. В концентрациях 100. 50,25,10 и 5 снижение титра вируса составляло 3,5 вЂ” 2,0 Ig. Минимально действующей у этого вещества была концентрация в 2,0 мкг/мл.. Химиотерапевтический индекс P .Р -ди(арабинофу1 2 ранозилцитозин-5 )-пирофосфэта был равен

800.

В табл,2 представлены данные изучения производных дицитидин-5 -пирофосфата в отношении аденовирусэ 3 типа. Оба производных дицитидин-.5 - пирофосфатэ проявили выраженное антивирусное действие. Так. Р .Р -ди(0,2 -циклоцитидин-5 )-! 2 2 1 пирофосфат в концентрации 400 мкг/мл вызывал снижение титра вируса на 2.6 Ig, В

5 концентрациях 200, 100 и 50 мкг/мл титр вируса был снижен на 2-1,66 Ig ТПД о. Минимально действующая концентрация была равна 25 мкг/мл, В этой концентрации отмечалось снижение титра вируса на 1,33 l .

10 Химиотерэпевтический индекс P,Pди(арабинофуранозилцитозин-5 )-пирофос фата был равен 32, Представленные данные свидетельствуют о том. что производные дицитидин-5

15 -пирофосфата являются высокоактивными веществами в отношении вируса герпеса и аденовируса 3 типа. Предлагаемые вещества могут быть использованы в экспериментальных исследо20 ваниях для лечения эденовирусных и герпетических инфекций. (56) Патент Великобритании. Йт 1422214. кл. С 2 С, опублик. 1976.

25 Патент Великобритании

N 1386334. кл. С 2 р, опубл. 1975.

1асоЬ T.М., Khorana К.G. Polynucleotldes

ХХХ. J.Am.Chem.ßîñ. 86(8). 1630 вЂ” 35 (1964).

689202

Таблица2 излияние производных дицитидин-5 -пирофосфата на инфекционную активность аденовирусэ 3 типа где

if0 я

Составитель

Техред М.Моргентал

Редактор Колоскова

Корректор М. Петрова

Тираж Подписное