Способ культивирования костного мозга больных лейкозом

Союз Соеетских

СоцНалистииеских

Республик

ОГГИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ пч 683727 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 20.02.78 (21) 2581119/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (5I) М. Кл.

А 61 В 10/00

Государственный комитет ссср по делам изооретений н открытий

Опубликовано 05.09.79. Бюллетень № 33

Двта опубликования описания 15.09.79 (53) УДК 6! 6-093 (088.8) (72) Автор изобретения

Т. И. Швелидзе (7I ) Заявитель

Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови им. академика Г. М. Мухадзе (54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КОСТНОГО МОЗГА

БОЛЬНЫХ ЛЕЙКОЗОМ

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики по клинико-морфологическим данным труднодифференцируемых случаев лейкоза.

Известен способ культивирования костного мозга больных лейкозом путем помещения клеток в гель, отстаивания, отделения надосадочного слоя, добавления плазмы крови больных хроническим лимфолейкозом и выращивания (1).

Недостатком известного способа является краткосрочность культивирования, а имен- 10. но гранулопоэза (7 — 10 суток), что не позволяет изучать процессы дальнейшей дифференциации и созревания клеток in vitro.

Цель изобретения является удлинение гранулопоэза.

Эта цель достигается тем, что костный мозг помещают в 7 — 13%-ную желатину, к надосадочноиу слою после его отстаивания добавляют 0,2 — 0,75 мл плазмы крови больных хроническим лимфолейкозом и после ее свертывания добавляют 1,5 — 2,5 мл питатель- 20 ной среды, содержащей 30 — 50% несовместимой по группе сыворотки крови донора.

Способ осуществляют следующим образом.

Костный мозг, взятый у больных путем трепанобиопсии, помещают в количестве

2 мл в 10%-ной желатине, отстаивают при комнатной температуре 1 час, отделяют пипеткой надосадочный слой, разливают на ряд пенициллиновых склянок или каррелевских чашек, добавляют сначала 0,5 мл плазмы крови больных хроническим лимфолейкозом, а после ее свертывания добавляют

2,0 мл 40%-ной несовместимой по АВО системе сыворотки крови донора, разведенной средой № 199, продувают воздухом, содержащим 5% СОа, не взбалтывая, герметически закупоривают, ставят в обычный термостат при 37 С.

Желатина в концентрации ниже 7, для осаждения клеток требует много времени, что вызывает гибель клеток. большие концентрации, выше 13%, убивают миелокариоцитов.

Добавление плазмы крови больных хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ) ниже

0,2 мл или в разведенном виде не оказывает

in vitro ростстимулирующего эффекта, а добавление больше 0,7 мл убивает клетки костного мозга.

683727

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор О. Иванова Техред О. Луговая Корректор Н. Стен

Заказ 5179/3 Тираж 672 Подписное

ЦН И И ПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Добавление сыворотки крови донора несовместимой по ABO системе ниже ЗОО/о не обеспечивает питания клеток In vitro до

1,0 — 1,5 месяцев, концентрация же выше

50 /о нарушают водно-солевой баланс клеток в эксплантатах и вызывают скорую их гибель.

Культуры перед фиксацией взбалтывают, выливают в центрифужные пробирки, центрифугируют при 1000 об/мин в продолжении 3 мин, сливают надосадочную жидкость, осадок взбалтывают, пастеровской пипеткой переносят на предметные стекла для приготовления мазков, высушивают мазки на воздухе и красят по методу КрюковаПаппенгейма для изучения морфологии, а также для ряда цитохимических реакций с целью выявления тех или иных ингредиентов.

Полученные из культур препараты не отличаются по качеству от приготовленных из нативного костного мозга.

Предлагаемый способ обеспечивает удлинение гранулопоэза до 1,0 — 1,5 месяцев, позволяет выявить характерные изменения при различных вариантах острого лейкоза, хронических миело- и лимфолейкозов, что особенно важно для их диагностики.

Способ культивирования костного мозга больных лейкозом путем помещения клеток в гель, отстаивания, отделения надосадочного слоя, добавления плазмы крови больных хроническим лимфолейкозом и выращивания, отличающийся тем, что, с целью удлинения гранулопоэза, костный мозг помещают в 7 — 13о/о желатину, к надосадочному слою после его отстаивания добавляют

11

0,2 — 0,75 мл плазмы крови больных хроническим лимфолейкозом и после ее свертывания добавляют 1,5 — 2,5 мл питательной среды, содержащей 30 — 50 /, несовместимой по группе сыворотки крови донора.

Источники информации, принятые во вни2о мание при экспертизе

1. Проблемы гематологии, 1975, т. 20, с. 49 — 53.