Способ получения активных производных динуклеотидов

. г . 4 ((;«,(э«« „у

1. « . -. - .

Своз Сааетскмх

Соцмалмстмчесимх

Республик

<(((666183 (6!) Дрполиительное к авт. свил-ву(22) Заявлено 15. 06. 77 (21) 2496673/23 — 04 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— г (51) М. Кл.

С 07 H 19/04//

С 07 Н 21/00

Гесударственнвй немвтет

СССР не делам нзебретенне н етнрмтна

Опубликовано 05. 06. 79. Бюллетень № 21

Дата опубликования описания 05. 06. 79 (53) УДК 547. 963, .32 (088.8) С. H. Загребельный, В. Ф. Зарытова, Д. Г. Кнорре, Э. Г. Лубенец, А. Г. Хмельницкий и С. М. Яснецкая (72) Авторы изобретения

Новосибирский институт органической химии Сибирского отделения

АН СССР и Специальное конструкторско — технологическое бюро биологически активных вешеств (71) Заявители (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АКТИВНЫХ ПРОИЗВОДНЪ|Х

ДИНУКЛЕОТИДОВ

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения активных производных, динуклеотидов, которые могут быть использова- . ны для нарашивания олигонуклеотидной цепи блоками и для синтеза нуклеиновых кислот.

Известен способ получения активного производного динуклеотида путем взаимодействия динуклеотида с избытком арилсульфохлорида триизопропилбензолсульфохлорида (1). Полученное активное производное затем может быть использовано для наращивания олигонуклеотидной цепи.

Сушественным недостатком известного способа является необходимость использования большого избытка триизопропилбензолсульфохлорида, что приводит к накапливанию в реакционной смеси окрашенных примесей, загряэняюших целевой продукт, усложняет отделение олигонуклеотидов от продуктов превращения и вызывает частичное сульфонилирование нуклеоэидной компоненты.

Целью изобретения является упрощение про. цесса.

Укаэанная цель достигается использованием в качестве арилсульфохлорида полистиролсульфохлорйда,. что позволяет избежать сульфонили2 рования нуклеоэидной компоненты и искпючить дополнительные стадии очистки целевого продукта.

Предлагаемый способ получения активных производных динуклеотидов заключается во вэаимо5 действии соответствующего динуклеотида в абсолютном пиридине с полистиролсульфохлоридом.

Пример 1. Синтез 5 — Π— тритил — (тимидилил— ((. (3 —.5 ) — тимидилил — (3- 5 ) — тимидина (TrdTpd- трат).

10 174 мг (0,2 ммоль) 3 — Π— ацетил — (тимидилил—

-3 5 ) — тимидина t dTpdT (Ас) ) в 8 мл абсолютного пиридина и 700 мг (3 ммоль) полимерного сульфохлорида (полистиролсульфохлорида) перемешивают 15 ч, фильтруют в колбу с 48 мг

15 (0,1 ммоль) 5 — Π— тритилтимидина (TrdT) в сухой камере. Реакционную смесьупаривают на ротационном испарителе в условия, исключающих попадание влаги, до объема 2 мл. Через 3 ч вводят 70 мг (0,3 ммоль) полимерного сульфохлорида и перемешивают 10 ч. Реакционную смесь обрабатывают последовательно 2 мл воды в течение 1 ч при комнатной температуре и 5 мл 10%— ного раствора аммиака в течение 2 ч при комнат.

6661Я3

Формула изобретении

Составитель Л. Никулина

Техред И. 6абурка

Корректор O. Билак

Редактор T. Шарганова

Тираж 512 Подлисное

ЦНиИПИ Государственного комитета СССР ло делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Рвушская наб„д. 4/5

Заказ 3091/19

Филиал IIII "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 ной температуре, упаривают, маслянистый ocrBroK растворяют в SO мл 20%--ного этанопа, наносят на колонку 1,5 х 20 см с ЛЕЛŠ— молселектом

А — 25 и хроматографнруют в градиенте концентраций триэтиламмонийбикарбонатного буфера (ТЕАЬ1 or 0,05 до 0,45 М (1 л х 1 л). 11родукт реакции элюируют при концентрации буфера 0,37 М, Выход TrdTpdTpdT 1500 о.е. (70% в расчете на

TrdT), Пример 2. 4. интез 5- -Π— тритил-(3 - . 5 )-- I0 тимидилил — (3 5) — тимидил ил — (3 — 5) --дез оксиаденилил — (3 — 5) — 3 — О-дезоксиаденина (TrdTpdTpdApdA) .

140 мг (0,11 ммоль) 5 — фосфорил — и бензоилдезоксиаденилил — (3 5) — 1ч — бензоил — 3 — Π— дезВ( оксиаденина (рейд, pdA (Ac) 1 в 1,2 мл абсолютного пиридина и 0,4 г (1,7 ммоль) полимерного сульфохлорида перемешивают, отделяют раст* вор от полимера и добавляют к 0,5 мл раствора дициклогексилмочевинного производного TrdTpdT 20 полученного из 43 мг (0,05 ммоль) TrdTpdT u

103 мг (0,5 ммоль) дициклогексилмочевины, Реакционную смесь выдерживают 20 ч при комнатной температуре, обрабатывают 2 мл воды в течение 24 ч при комнатной температуре для удаления диплклогексилмочевинной защиты, осадок отфильтровывают, промывают 50% — ным пириди4 нам (3 х S rv<1. Фильтраты обьелиняют, упарнваюг, маслянистыи остаток обрабатывают концентрированным раствором аммиака лри 50 С в те" челне 3 ч и упарнвают досуха. Остаток обрабатывают 30 мл смеси хлороформ — вода (1:5). Водный слой наносят на колонку (2 х 25 см) с ДЕАЕ молселектом А -25 и хроматографируют в гра/ц+ енте концентрацией ТЕАБ в 20% — ном этаноле or

0,1 до 0,6 М (1 л х 1 л). Продукт реакции элюируют при концентрации буфера 0,45 M. Выход

TrdTpdTpdApdA 600 о.е. (54% в расчете на TrdTpdT) при 260 нм.

Способ получения активных производных динуклеотидов путем взаимодействия соответствующего динуклеотица с арилсульфохлоридом в абсолютном пиридине, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве арилсульфохлорида используют полистиролсульфохлорид

11сточники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Бадашкеева А.Г. и др. Активные фосфорилирующие производные и олигонуклеотидном синтезе.

ДАН 222, N 1, с. 97 (1975) .