Способ определения изоэнзимов лактатдегидрогеназы

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ аи663329

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительный к патенту— (22) Заявлено 12.09.75 (21) 2171403/28-13 (51) М. Кл.

G01 NЗЗ/!6 (23) Приоритет — (32) 12.09.74 (3! ) P 2443741.0-52 (ЗЗ) ФРГ

Государственный ноинтет

СССР ее делам нзобретеннй и атнрытнй

Опубликовано 15.05.79. Бюллетень № 18

Дата опубликования описания 25.05.?9 (53) УДК615. .475 (088.8) I

Иностранец

Вальтер Лампрехт (ФРГ) (72) Автор изобретения

Иностранная фирма

«Коммандитгезельшафт Шварцхаупт» (ФРГ) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИЗОЭНЗИМОВ

ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ

При исследовании сыворотки или плазмы исследуемую пробу при помощи буферного раствора триэтаноламин — NaOH доводят до значения р1-! 6,3 — 6,4. При этих значениях рН изоэнзимы ЛДГ 4 и 5 легко определяются. Наличие лактатдегидрогеназы 5 является показанием присутствия карцпном, поэтому точное и чувствительное определение может быть использовано для раннего определения, карцином.

При исследовании влагалищной жидкости, значение рН которой равно 4, проводят определение при помощи буферного раствора трпэтанолампн — МаОН, рН устанавливают в пределах от 6,3 до 6,4.

Влагалищную жидкость исслсд, юг при помощи тампонов или ленты, на которые наносят следующий состав, мл:

Триэтаноламин — NaOH-буфер рН 7,0

Na-лактат (натриевая соль

D, Z — молочной кислоты) 67,5

Фснозим метосульфат 0,1

Никотинамидадениндинуклеотид

Нитроголубойхлортстразол

1,5

О,Ъ

Изобрстение относится к области медицины и может быть использовано в качестве средства для раннего определения патологических изменений в организме.

Известен способ определения изоэнзимов лактатдсгидрогеназы путем взаимодействия 5 в буферной среде лактата и никотинамидаденин-нуклеотида до пирувата (11. Однако известный способ не обеспечивает высокой точности определения изоэнзимов 4 и 5..

Целью изобретения является повышение

10 точности определения изоэнзимов 4 и 5.

Эта цель достигается тем, что взаимодействие ведут в буферной среде при allaчении рН в пределах от 6,0 «о 6,5.

Кроме того, в качестве буферной среды применяют раствор триэтаноламина и NaOH.

Определение лактатдсгидрогсназы (ЛДГ) имеет больпгос значение при исследовании жидкостей тела. Если эти энзимы у здоровых людей задерживаются главным образом в тканях, то при патологическом росте ткани, при лейкемии и других заболевани!1 их обнаруживают в большой концентраций в сыворотке или другой жидкости тела (например, влагалищной).

f .,1

:. .е в и ° е °

1 гс. qи; i<»н я. б..олиот яка M Б А

663329

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор Л. Новожилова Техред О. Луговая Корректор О. Ковинская

Заказ 2602/65 Тираж 1089 Подписное

ЦН И И П И Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

I 13035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал П П П «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Вводят тампон во влагалище, при этом жидкость вЛагалища вступает в реакцяю с изоэнзимами ЯД!, имеющимися во влагалйще„при Жачении рН 6,0 — 6,5, предпочтительнд „, 3 — «6;4.+

" ", Дрц утсбюиФЯДГ /во влагалищной жид„, зкос1и пбдтверждается тем, что спустя 5—

10 мин тампон окрашивается в синий цвет.

Состав для проведения исследования наносят на носитель, например тампон, любым известным способом, затем высушивают и хранят его в светозащигценном месте до применения.

Состав можно наносить также на хлопчатобумажную ленту в форме шнура.

Тампоны с составом могут быть применеnbl не только врачом, а каждая женщина может провести исследование сама. Так окрашивание тампона в синий цвет после

15 — 30-минутного пребывания во влагалище, свидетельствует об опасности патологиl ческого изменения и является сигналом для посещения врача.

Для сохранения тампона до посещения врача, необходимо его дезинфицировать, это производят путем погружения использованного тампона в 20О/р-ный раствор парамида.

Было проведено исследование на 100 здоровых жешцинах и больных carinoma colli

iteri, carcinoma corparis u carcinoma insiti.

Тампон вводили на — 30 мин. После его извлечения были обнаружены следующие цветовые изменения: нет окраски — результат отрицательный у здоровых женщин; розовая окраска — у здоровых женшин (в том числе и у беременных до !5 дней); светло-голубая окраска с фиолетовыми

==" точками — — тиагноз «зона перерождения»; голубая или синяя окраска — карцин, что совпадает с результатом патологического исследования.

Определение in vitro, например, сыворотки или плазмы проводят в буферной среде раствора триэтаноламина и NaOH при значЪнии рН в пределах от 6,0 до 6,5.

Пример 1, Гигиенические тампоны плотно то 2-х раз обертывают клеюгцей лентой

:цириной 1 см. Оболочку тампона снимают с противоположной стороны, на которой находится вытяжная нитка. С прооирок сби- . ваю: дно, в образовавшуюся трубку вводят тампон таким образом, чтобы открытый с одной стороны тампон закрывал конец труб5 ки. Вытяжную нитку прикрепляют с другой стороны при помощи пластыря или клейкой ленты. Трубку со сторон снятой оболочки опускают в раствор, тампон впитывает 1,0 мл раствора.

Приготовленный таким образом тампон сушат вымораживанием. Высушенные тампоны удаляют из стеклянной трубки и хранят в темноте в светонепроницаемой бумаге или пленке или в цветной бумаге в защищенном от света месте.

15 Пример 2. При помогци шприца вводят

2,0 мл раствора состава для проведения исследований в тампон. Иглу шприца прокалывают через оболочку и, медленно впрыскивая, проводят иглу в продольном направлении ко второму концу тампона, этим достигается равномерная пропитка тампона. Затем тампоны сушат и замораживают.

Предлагаемый способ обеспечивает возможность быстрого и точного определения изоэнзимов лактатдегидрогеназы, что позволит быстро выявить патологические изменения в организме.

l. Способ определения изоэнзимов лактатдегидрогеназы путем взаимодействия в буферной среде лактата и никотинамидадениннуклеотиода до пирувата, и выявлению изоэнзимов по появлению синего окрашивания, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения изоэнзимов 4 и 5, взаимодействие ведут в буферной среде при значении рН в пределах от 6,0 до 6,5.

2. Способ по и. 1, отличающийся тем, что в качестве буферной среды применяют раствор триэтаноламина и NaOH.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе !. Biochemica Biophisyca Acta 1968, v 159

h 2, рр. 236 — 244.