Способ оценки функционального состояния лейкоцитов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (F11,650065

Сама Сааетских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 24.06.75 (21) 2147945/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 28.02.79. Бюллетень ¹ 8 (45) Дата опубликования описания 28.02.79 (51) М. Кл.-"

G 01N 33/16

Госудерстееинмк комитат

СССР (53) УДК 615.45:615.7 (088.8) по лелем изобретений н открытий (72) Авторы изобретения

А. Е. Разумовский и И. А. Комиссарова (71) Зая в итель Первый московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного

Знамени медицинский институт им. И. М. Сеченова (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ФУНКЦИОНАЛЪНОГО СОСТОЯНИЯ

Л ЕЙ КОЦИТОВ

Изобретение относится к медицине, а именно гематологии.

Известен способ оценки функционального состояния лейкоцитов путем инкубирова|ния клеток крови, добавления препарата — декортилена и цитохимического определения ферментов в этих клетках.

Однако известный способ является трудоемким.

Целью изобретения является упрощение 10 способа.

Эта цель достигается тем, что ин1кубирование лейкоцитарной взвеси производят при 37 — 38 С в течение 2 — 2,5 час.

Способ осуществляют следующим обра- 15 зом.

Венозную кровь соединяют в приборах с 3,8%-ным раствором цитрата натрия в соотношении 7: 1. Цитрат натрия должен быть свежеприготовленным, не более 1,5 — 20 ,2-х недельной давности.

Пробирку помещают в термастат при

37 — 38 С на 2,0 — 2,5 час.

Затем после оседания эритроцитов отбирают лейкоцитарную взвесь и разливают в 25 лунки из органического стекла.

После этого в лунки вводят растворы изучаемых веществ (фармакологические препараты), химические соединения, сыворотки, биологические жидкости в тех кон- 30,центрациях или соотношениях, которые необходимы.

Блок лунок прикрывают плотно пригнанным стеклом, края которого предварительно смачивают водой с целью предотвращения испарения жидкостей в процессе инкубации и изменения концентрации изучае.мых веществ.

Полученные таким образом системы взаимодействия помещают в термостат при

37 — 38 С и проводят инкубацию, во время которой периодически из лунок отбирают пробы для определения обычными цитохимическими методами уровня активности интересующих ферментов.

П ример 1. На фиг. 1 показана динамика изменения уровня активности дегидрогеназ в лимфоцитах больной С. Д. с диагнозом системная красная волчанка под влиянием декортилена в концентрации 6. 10 — 4 мг/мл, что соответствует суточной дозе 400 кг данного препарата, рассчитанной по весу, Кривая 1 — сукцинатдегидрогеназа (СДГ); кривая 2 — митохондриальная альфа-глицерофосфатдегидропеназа (м-альфа-гфДГ).

Прим ер 2. На фиг. 2 показана динамика изменения уровня активности дегидрогеназ в лимфоцитах больной С. Д. с диагнозом системная красная волчанка под влиянием декортилена в концентрации

650005

6 10- мг/мл, что соответствует суточной дозе 40 мг данного препарата, рассчитанной по весу (кривая 1-СДГ; кривая 2 — мальфа- гфДГ) .

П р им ер 3. На фиг. 3 показана динами ка изменения уровня активности дегидро геназ в лимфоцитах больной С. Д. с диагнозом системная красная волчанка под влиянием декортилена в концентрации

6 10- мг/мл, что соответствует суточной дозе 4 мг данного препарата, рассчитанной по весу (кривая 1 — СДГ, кривая 2— м-альфа-гфДГ).

П р и мер 4. На фиг. 4 показана динамижа изменения уровня активности сукцинатдегидрогеназы в лимфоцитах больной С. Д. с диагнозом системная красная волчанка под влиянием,гидрокортизона в различных концентрациях: иривая 1 — концентрация и идрокортизона 4,3 10 †MI/мл, что соответствует суточной дозе 400 мг данного препарата, рассчитанной по весу; кривая

2 — концентрация гидрокортизона 4,3 10-" мг/мл, что соответствует суточной дозе

40 м г данного препарата, рассчитанной по

;весу; кривая 3 — концентрация гидрокортизона 4,3.10- мг/мл, что соответствует суточной дозе 4 мг данного препарата,.рассчитанной по весу.

Пр имер 5. На фиг. 5 показана динамика изменения уровня активности де гидрогеназ в лимфоцитах и миелопероксидазы в нейтрофилах больной К. М. с диагнозом дизовариальная кардиопатия под влиянием хлористого калия в концентрации

7 10 — мг/мл, что соответствует одноразовой дозе 5 к данно го препарата, рассчитанной по весу (кривая 1 — СДГ; кривая

2 — м-альфа-гфДГ; кривая 3 — миелопе роксидаза (МП).

Пример 6. На фиг. 6 показана динамика изменения активности дегидрогеназ в лимфоцитах и миелопероксидазы в нейтрофилах больной Х, П. с диагнозом дизо вариальная кардиопатия под влиянием обзидана в концентрации 1,6 10 — мг/мл, что соответствует одноразовой дозе 80 мг дан5

ЗО

35 ного препарата, рассчитанной по объему крови (кривая 1 — СДГ; кривая 2 — м-альфа-гфДГ; кривая 3 — МП) .

П р и м ер 7. На фиг. 7 показана динамика изменения уровня активности дегид рогеназ в лимфоцитах и миелопероксидазы нейтрофилах больной Х. П. с диагнозом дизовариальная кардиопатия под влиянием обзидина в концентрации 1,1 ° 10 — мг/мл, что соответствует одноразовой дозе 20 мг данно го препарата, рассчитанной по весу (кривая 1 — СДГ; кривая 2 — м-альфагфДГ; кривая 3 — МП).

При воздействии на лейкоциты крови различными фармакологическими препаратами, а именно кортикосибероидами, nipoисходит динамическое изменение уровней активности ферментов. Для лейкоцитов, полученных от больных с различными заболеваниями, характерна своя индивидуальная картина динамического изменения активности ферментов, Динамика изменения активности ферментов зависит как от структуры воздействующего препарата, так и от его концентрации, которые соответствуют дозировкам препарата, рассчитанным либо по весу, либо по о бъему крови.

Предлагаем ый способ позволяет уточнить механизмы действия любого инвертирующего препарата на различные звенья жизнеобеспечения лейкоцитов. Он позволяет конкретно, для каждого больного, подобрать более рациональную схему терапии, а также обнаружить в сыворотке те вещества, которые вызывают развитие того или иного патологического процесса.

Формула изобретения

Способ оценки функционального состояния лейкоцитов путем инкубирования клеток крови, добавления препарата — декортилена и цитохимического определения ферментов в этих клетках, о т л и ч а ю щ и йся тем, что, с целью упрощения способа, инкубирование лейкоцитарной взвеси производят при 37 — 38 С в течение 2 — 2,5 ч. аоо

7ОП

Ь

4 000

Z0 !

0О

П70г

000 впп

700 †-7 аппо

000 о .jпо

300 гоо !

spcrt0(nu О /Iió, о,gO0

1100

200

1000

Z0O

180

800

780

7>0

120

0!7

SO0

200

700 с

07uv. 5

220

1100

7ООО

200

90D

180

180 воо

120

1!70

Ц 000

8 -1

»0п т ф 700

800

500 еоо ло

650001

Ц ос. Е

@>»» (»>i) 1:1 >.»>> (»>»1) 650005 гоп

igloo юоо ооо гоо ооо епп ипоо

/оо зоа

2оо шп и и

1$ оп

Время (nuit) Ще. 7

Составитель С. Малютина

Техред А, Каммтникова

Редактор Е. Дайч

Корректоры: P. Беркович н И. Позняковская

Типография, пр. Сапунова. 3

Заказ 94/17 Изд. № 188 Тираж 1089 Подписное

НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/б