Способ количественного определения гардоны и его метаболитов

Союз Советских

Социалистиыеских

Республик

ОПИСАЛИ

ИЗОБРКтЕни

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61} Дополнительное к авт. свид-ву (22} Заявлено 270677 (21} 2498913/23— с присоединением заявки № (23} Приоритет

Опубликовано 15.0479.Бюллетень У

Дата опубликования описания 20.0

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения

Г.Ф.Вылегжанина и Л.С.Кейсер

Pf} Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский институт биологических методов защиты растений.(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ГАРДОНЫ И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ

Изобретение относится к аналити теской химии, а именно к способам количественного определения гардоны-транс-иэомера 2-хлор-1- (2, 4, 5-трихлорфенил) -винилдиметилфосфата и его метаболитов, Цис-иэомер-гардоны:

2,4,5-трихлорацетофенон (ТХАФ);

2,4,5-трихлорфенилэтанол-1 (ТХФЭ);

2,4,5-трихлорфенацилхлорид (ТХФХ)1

2,4,5-трихлорфенил-2-хлорэтанол-1 (ТХХФЭ).

Известен способ количественного определения гардоны, основанный на его способности поглощать УФ-свет при 15 длине волны 250 нм (1). Недостатком способа является невозможность обнаруживать метаболиты в присутствия гардоны. наиболее близким к описываемому ЯО изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения гардоны и его метаболитов, заключающийся в обработке анализируемой про- ха бы ЗОЪ-ным раствором ацетона в гексане, отделении и упаривании гексанового слоя, добавлении к остатку аце-. . тонитрила, отделении ацетонитрилового слоя, добавлении к нему воды, затем 80 гексана, отделении и упаривании гексанового слоя, и хроматографировании остатка (2). Недостатком способа является невысокая точность, т.к. не достигается полное извлечение ТХФХ и ТХХФЭ иэ растительных проб, обусловленное потерями веществ при перераспределении их иэ гексана в ацетонитрил и длительность определения.

Целью изобретения является повышение точности и сокращение времени определения.

Поставленная цель достигается описываемым способом количественного определения гардоны и его метаболитов, заключающимся в обработке анализируемой пробы диметилформамидом, водой, гексаном, отделении и упаривании гексанового слоя и хроматографировании остатка.

Отличительным признаком способа является использования в качестве органического растворителя диметилформамида.

Пример. В 4 параллельных пробы яблок по 50 r каждая вносят по 5 мкг гардоны, 2 мкг цис-иэомера гардоны, 0,5 мкг 2,4,5-трихлорацето,фенона (ТХАФ), 0,5 мкг 2,4,5-трихлор657339

4,75

Гардона цис-иэомер гардоны

5,2

87,5

1,75

4,2

72,3

0,36

0,5

ТХАФ

4,9

64,6

0,32

0 5

ТХФЭ

12,3

80 5

0,40

0,5

ТХФХ

76,4

ll 7

0,38

0,5

ТХХФЭ фенилэтанола-1 (ТХФЭ), 0,5 мкг

2,4,5-трихлорфенацилхлорида (ТХФХ) и

0,5 мкг 2,4,5-трихлорфенил-2-хлорэтанола-1 (ТХХФЭ).

Контролем служит проба из 50 г необработанных яблок.

Мелконарезанные яблоки переносят в колбы и встряхивают со 100 мл диметилформамида (ДМФА) в течение 2 ч.

Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительные воронки. Растительный остаток дважды промывают дополнительными порциями ДМФА по

15 мл. Фильтруют этот экстракт к основному экстракту. В делительные воронки к диметилформамидному экстракту добавляют 100 мл дистиллированной воды, перемешивают, добавляют

40 мл н-гексана и встряхивают в течение 1 мин. После отстаивания отделяют гексановый слой в сухую чистую колбу. Экстракцию анализируемых веществ из воднодиметилформамидного слоя проводят еще дважды, используя каждый раз по 40 мл н-гексана. Гексановые экстракты объединяют, сушат над безводным сернокислым натрием, фильтруют через бумажный фильтр и упаривают гексан до 5-6 мл, используя ротационный пленочный испаритель при температуре не выше 40оС. Переносят количественно остаток в пробир ки с делениями. Доводят объем раство ра до 10 мл, Полученный раствор используют для ГКХ определений.

ГЖХ определение проводят на хроматографе Цвет-106 с детектором постоянной скорости рекомбинации с использованием стеклянной колонки (100 см 3 мм), заполненной хроматоном N-AW-ВЫМРЯ (0,16-0,20 мм) с

5% ХЕ-60. Скорость газоносителя— азота особой чистоты 75 мл/мин, температура детектора 210 С, испарителя 210ОС, скорость продувочного газа (азота осч) 150 мл/мин. Определение

ТХАФ, ТХФЭ, ТХФХ и ТХХФЭ проводят при температуре колонки 145 С. определение гардоны и цис-изомера гардоны проводят при 175 С. Шкала электрометра 2 ° 10 ""а, потенциометр КСП-4.

Для количественного определения хроматографируют анализируемые и

Результаты определения гар стандартные растворы извесгной кон центрацией веществ (1 мкг/мл гардоны . цис-изомеРа гаРдоны, 0,1 мкг/„

ТХМ>, ТХФЭ, ТХФХ и ТХХФЭ каждого в гексане) . В колонку хроматографа вводят 3-5 мкг стандартного раствора

5 для получения высоты пиков, близкой к анализируемым растворам. Проводят

3-4 параллельных определения для получения средней высоты пика. Все определения проводят в присутствии

)p холостых контрольных проб экстрактов из яблок, не содержащих анализируемых веществ. На основе этих проб вводят поправку:

15 о где h — высота пика анализируемого раствора, Ьр — высота пика холостой контрольной пробы, h> — исправленная высота пика.

В данном случае высота пиков холостой контрольной пробы для ТХАФ

Ь у2 мм, ТХФЭ h =О.мм, ТХФХ h =0 мм, ТХХФЭ Ь =О мм, гардона )1 =0 мм, цис-изомер гардоны 6 = мм.

Содержание препаратов в пробе (в мг/кг) вычисляют по формуле (1 2".1

И„М m где tl< — высота пика стандартного раствора (мм);

Й вЂ” высота пика исправленная (мм);

35 U4 и U - объемы стандартного и анализируемого растворов, видимых в колонку хроматографа (мкл);

С„- концентрация стандартного раствора (мкг/мл);

V — объем экстракта анализируемой пробы (мл);

)и- навеска яблок (кг).

В настоящем способе анализа величина холостой пробы не превышает

5% от минимально определяемой кон45 центрации исследуемых веществ. Опре" деление гардоны и его 5-ти метаболитов из яблок с помощью описанного способа дает следующие результаты, приведенные в таблице. доны и его метаболитов в яблоках

657339

Составитель Л.Соломенцева

Техред М. Петко Корректор A.Ãðèöåûêî

Редактор Л.Новожилова

Заказ 1784/43 Тираж 1089 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4

Настоящий способ определения гардоны и его метаболитов позволяет сократить время, необходимое на осуществление анализа за Счет уменьшения числа операций, а также повышает точность анализа для всех анализируемых одновременно веществ (гардоны, 5 цис -иэомера, ТХАФ, ТХФЭ, ТХФХ и

ТХХФЭ) . формула из обрет ени я

Способ количественного определения гардоны и его метаболитов путем обработки анализируемой пробы органическим растворителем, водой и гексаном, отделением и упариванием гексанового слоя и последующим хроматогра фированием остатка, о т л и ч а ю

15 шийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени определения, в качестве органического растворителя используют диметилформамид.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1„ Новожилов К.В., Петрова Т.М., Евстигнеева Г.А,, Хроматографическое в тонком слое и спектрофотометрическое определение гардоны в растениях, Бюллетень ВН3Р, 1974, 929, с. 66.

2. Вылегжанина Г.ф., Кейсер Л.С.

Определение гардоны 2,4,5-трихлорфенацилхлорида и 1-(2,4,5-трихлорфенил)-2-хлорэтанола методом газожидкостной хроматографии. Химия в сельском хозяйстве, 1974, 98 с.32.