Способ получения три -птолуолсульфоната -аденозил- - метионина

1>646915

Союз Советска

Сюцналмстйиеайа

Ресвублни (бт);Йопойиитейьийй к патенту (22) Заявлено 01.08.73 (2l) 1945967/23-04

С 07 Н 19/16

//А 61 К 31/70 (23) Приоритет (32) 02.08.72 ащдарствеккый кемктют ссср ак делам «зюбретакка а юткрытий

Щ 27793/72

Опубйиковаио05.02.79. Бвлле геиь Ж 5 (53) УДК 547.455 (088.8 ) Дата опубликования описания 08,02.79

Иностранец

Альберта Фиеччи, (Италия) (72) Автор изобретения

Иностранная фирма

"Биоресерч Лимитед Партнершип оф Д-р Ливио Камоззи энд К" (Италия) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИ-П-ТОЛУОЛСУЛЬФОНАТА

5-АДЕНОЗИЛ-L-М ЕТИОН ИНА

Изобретение относится к способу получения новой ферментативной соли-три-и-толуолсульфоната g -аденозил- . -метионина.

Бель изобретения — получение нового полезного соединении, расширяющего: ассортимент средств воздействия на живой организм. @ МН ! l ф-08 - 4К -dK""400К - 2CH Н - О И (Ц

de -dna< 30;

6К- СН- Н- < = 6Н2ОН 0H

0 заклвчаюшийся в том, что водную суснензию дрожжей, обогащенную 9 -аденозил-, -метионином (5 АМ), обрабатывают атил- или метилацетатом в концентрации 1/20-1/5 от веса влажных клеток, чтобы вызвать лизис клеток, попученный раствор адсорбируют в колонке, Бель достигается путем синтеза, основанного на известной реакции получения кислотных солей органических соединений (l$. и

Описывается способ получения три-и. -толуолсульфоната 6 -аденозил- Ь -метионина формулы содержащей слабо катионообмениую смолу кислотной формы, колонку последова- ,® тельно промывают водой, 0,025 н. уксусной кислотой, водным раствором п-толуолсульфокислоты концентрацией вплоть до 1 моль или водным раствором серной или соляной кислоты, раствор нейтрали.3 6469 зуют, упаривают до объема 2/20-4/20 от начального объема и целевой продукт осаждают путем добавления водорастворимого органического растворителя, пред почтительно выбранного из группы, вкпю: чающей метанол, этаноп, пропаноп, изопро-. паиол, ацетон, метипэтипкетон, ипи в спу-, чае применения водного раствора серной или соляной кислоты полученные супьфаты. ипи хпориды /AM перед осаждением водо» 1Î раСтворимым органическим раство ритепем растворяют в воде и водный раствор обрабатывают п-топуопсульфокислотой при мопарном соотношении кислота; SAM от 3 до 10. М

Пример 1. К 90 кг дрожжей, обогащенных БАМ (5 5 гlкг), приливают 9 л этипацетата при комнатной температуре. После энергичного перемеши- 20 вания массы в течение 1 ч ее разбавпяют 40 п воды, фильтруют и промывают.

Получают 140 и раствора, содержащего 3,55 г/и SAN (выход 99,5%).

14 и попученного раствора адсорбиру- 25 ют на 1 и амберпита ЗРС-50 в Норме, а затем последовательно элюируют водой, 0,025 н. уксусной кислотой и

1 N раствором п-топуопсульфокислоты.

Фракции, богатые чистым SAN сос- 36 .тавпя 18 1 и и содержат 85% продук- та. Раствор обрабатывают 1,7 л амберпита 3 RA-900 в ОН-форме. После фильтрации и промывки смолы водой попучают раствор, включающий 2,2% п-то- 3з пуолсупьфокиспоты и 0,85% б AN.

Раствор упаривают при комнатной темнературе в вакууме, до объема 600 мл и припивают к нему ацетон. Выпадает белая порошкообразная микрокристапличес- 40 кая гидроскопичиая соль (90 г) без запаха, которая не очень хорошо растворяется в -метаноле и этанопе и не растворяется в ацетоне, метилаэтипкетоне, хлороформе, высших спиртах и бензоле. 15

При анализе соли получают спедующие результаты.

Найдено, %: С 46„93 Н 5,3; Ì9,23 б 13,8.

С, Н,,М 0 4 54 (Моп. вес 915,1)., 50

Вычислено, %: С 47,20; Н 5,15;

М 9,18; Я 14,00.

Найдено, %: п-топуопсупьфокиспота

55,8; o AN 42,5.

Вычислено, %: п-топуопсупьфокиспота

56343 SAN 43,6.

Потери в весе в резупьтате сушки в течение 12 ч при комнатной темпера15 . 4 ðå 8 вакууме на Р2 0 5 cocT geT 1,52,0%. Влажность (по Фйшеру) 1,5«2,0%.

Новое соединение обнаруживает s

УФ-спектре максимум поглощения при

256 нм, Е 15600 {в 6 и. серной кислоте); при 260 нм, f 16300 (при рН 7).

Все эти данные согласуются с соеди-. нением формулы {I).

Количество три-п-толуопсупьфоната

5AM, получаемого в данном процессе, соответствует выходу 95% (96 г), Пример 2, Описанным в примере 1 способом обрабатывают 9 кг дрожжей и после пизиса клеток получают 13,8п раствора, вкпючающего 3,60 г/л 5 АМ, что соответствует 99% от копичества, содержащегося в обработанном материале. Этот раствор адсорбируют на 1 и амберпита 3 RC-50 в Н -форме и мпоируют водой, 0,025 н. уксусной кислотой и 4 н. соляной кислотой. Фрак- ции, богатые чистым S AN, составляют

0,8 л и содержат 87% продукта, поступившего в колонку. Затем их упаривают

O . досуха в вакууме при,40 С, после чего приливают воду до получения раствора, содержащего 5% $ AM,, поддерживая, температуру раствора около О С, и прибавпяют смолу Дауэкс 50 в OH -форме, пока; образец раствора обнаружит отсутствие хпоридов.

Смопу отфипьтровываютэ добавпяют

110 г п-топуопсупьфокиспоты и упаривают, доведя объем до 600 мп. Затем приливают метанол до полного осаждения, фильтруют и сушат. Получают 75 г три-п-топуопсульфоната 5 АМ (выход 75%) с теми же свойствами, что у соединения, . полученного в примере 1.

Пример 3, 13,8 и раствора

$ AN полученного после пизиса дрожжевых клеток (по описанному в примере 2 способу; 3,60 г/л S AN) р адсорбкрют на 1,1 и амберпита 3ЯС-50 в Н -форме и эпюируют поспедоватепьно водой, 0,025 М уксусной кислотой и, наконец, 1 н. серной кислотой, Фракции, богатые

«;АМ (1,8 п, 86% вещества, поступившего в колонку), обрабатывают суспенCf зией гидрата окиси бария при О С, до полного устранения супыратов.

Поспе фильтрации и промывки сульфата бария добавляют 108 г и-топуопсуп фокиспоты и поступают далее, как опйсано в примере 2. Получают 75 r три-п-топуопсульфоната 5 AN с теми же свойствами, что у вещества, полученного в примере 1 ° Выход 79%.

6469

Пример 4, 13,8 л раствора,содержашего 43,3 г S AN,. адсорбируют в колонке со смолой и элюируют (аналогично описанному в примере 2) водным раст вором соляной кислоты. Фракции, богаО тые 5АМ, упаривают досуха при 40 С в вакууме. Затем приливают воду, получая 10%--ный раствор хлорида, после чего осаждают добавлением ацетона. Анализ образовавшейся соли (35 г, выход 69%): 10 клориды 16,86%; бAN 78,85%; вода

4,2%.

10 г полученной соли растворяют в

200 мл воды и хлориды удаляют при

0 С,при помоши смолы Дауэкс 50 в

ОН -форме, Затем в раствор вносят

19,7 r п голуолсульфокислоты, смесь упаривают в вакууме при 40 С до объе.ма 80 мл, после чего приливают ацетон для осаждения 14 r три-п-толуолсульфо-. ната 5ЛМ (выход 78%) с теми же свойствами, что у вешества, полученного s примере 1.

Пример 5. 13,8 л раствора, со- >> держашего 3,60 г/л SAN (полученного, как описано в примере 3), адсорбируют в колонке амберлитом 3РС-50 в

Н -форме.

Фракции, богатые Q AN обрабатывают карбонатом бария, пока молярная конце» трация сульфата не станет равной молярной концентрации АМ, Затем раствор

15 6 отфильтровывают и фильтрат упаривают до обьема 500 мл. При добавлении ацетона выпадает 60 г соли, выход 88%.

Ее анализ: сульфаты 28,2%; SAN

58,9%; вода 5%, 10 г полученной соли растворяют в

120 мл воды и обрабатывают амберлитом

ЭРА-90 в ОН=форме, пока не будут. устранены сульфаты. Смолу отфильтровывают, добавляют 14,7 г п голуолсульфокислоты, смесь упаривают до объема

60 мл и приливают ацетон. Выпадает

10,8 г и голуолсульфоната 5АМ (выход

78%) с теми же характеристиками, что у вещества, полученного в примере 1Д

Пример 6. 1 г йодида .9AN растворяют в 10 мл воды и обрабатывают смолой Дауэкс в ОН -форме при

0 С, пока не будет выведен ион йодида.

После отфильтровывания смолы добавляют 1,5 г и-толуолсульфокислоты и смесь упаривают до объема 6 мл, после чего приливают ацетон. Выпадает 1 г три-п голуолсульфоната БАМ (выход

78%) с теми же свойствами, что у вешества, полученного в примере 1.

Формула изобретения

l. Способ получения три-и-толуолсульфоната g -аденозил- -метионина формулы о т л и ч а ю ш и и с я тем, что водную суспензию дрожжей,обогашенную 5-адено« зил-4 -метионином (SAN), обрабатыва- ют этил- или метилацетатом в концентрации 1/20-1/5 от веса влажных клеток, 50 полученный раствор адсорбируют в колонке,,содержашей слабо катионообмен ному смолу кислотной формы, колонку последовательно промывают водой, 0,025 н.

Я уксусной кислотой, водным раствором п-толуолсульфокислоты концентрацией вплоть до 1 моль или водным раствором серной или соляной кислоты, раствор нейтрализуют, упаривают до объема 2-20—

4/20 от начального объема и целевой продукт осаждают путем добавления водорастворимого органического растворителя или в случае применения водного раствора серной или соляной кислоты полученные сульфаты или хлориды ЬАМ перед осаждением водорастворимым органическим растворителем. растворяют в воде и водный раствор обрабатывают и голуолсульфокислотой при молярном соотношении кислота: 5A M от 3 до 10.

7 646915

2.Способ поп.1, отличающийся тем,что водорастворимый органический растворитель выбирают из группы, включающей метанол, этаноп, пропанол, изопроцанол, ацетон, метилэтилкетон.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1. Патент ClUA 3380995 кл. 260-211, 1968.

Составитель Л. Никулина

Редактор 3. Бородкина ТехредЮ. Ниймет Корректор А. Власенко

Эаказ 174/51 Тираж 512 Подписное БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва,:Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4