Штамм pseudomonas batumici nov. sp. 3187 - продуцент антибиотика, обладающего противостафилококковой активностью

 

Штамм Pseudomonas Batumici nov. sp. 3187 - продуцент антибиотика, обладающего противостафилококковой активностью. Хранится в коллекции Института микробиологии и вирусологии им. Д.И.Заболотного АН УССР под номером 3187.

Культурально-морфологические признаки. Грамположительные палочки размером 2,2 x 1,0 мкм, подвижные с помощью двух полярных жгутиков, длина жгутика в среднем 6 - 8 мкм, число витков 4 - 6, включений поли- -оксимасляной кислоты не образует. Бактерии хорошо растут на обычных питательных средах.

Мясо-пептонный агар. Колонии гладкие, круглые, блестящие, пастообразные.

Мясо-пептонный бульон. Равномерная муть, желто-зеленый флюоресцирующий пигмент не образует.

Среда с глюкозой. Образуют желто-бурый, диффундирующий в среду пигмент, извлекаемый хлороформом. Колонии окрашены в желто-бурый цвет, часто более темный, чем среда.

Физиолого-биохимические признаки. Строгий аэроб. Использует глюкозу только по окислительному пути. Оксидазоположительный по Ковачу. Оптимальная для роста температура 27^oC, при 42^oC не растет, при 37^oC рост очень слабый.

Обладает аргининдегидролазной, левансахаразной и лецитиназной активностью. Нитраты не восстанавливает.

Желатин, эскулин не гидролизует.

Глюконат не окисляет, хинную кислоту в протокатеховую не превращает. Чувствителен к нитрофурантоину.

Усваивает аммиачные и нитратные формы азота. В качестве единственного источника углерода использует D-галактозу, L-арабинозу, D-маннозу, фруктозу, сахарозу, трегалозу, глюконат, уксусную, малоновую, янтарную, малеиновую, фумаровую, глутаровую, молочную, изолимонную, лимонную, аконитовую, щевелевоуксусную, итаконовую, яблочную, аспарагиновую, глутаминовую, -аминомасляную и хинную кислоты, маннит, инозит, глицерин, -аланин, -аланин, изолейцин, валин, аргинин, орнитин, цитруллин, бетаин, саркозин. Не использует алифатические спирты, жирные кислоты, ароматические соединения.

Антагонистические свойства. Обладает активностью в отношении Staph. aureus, Erwinia aroideae, фитопатогенных видов Pseudomonas, Xanthomonas campestris и Xanthomonas malvacearum, частично угнетает рост E. coli, Bac. subtilis, Corynebact. michiganeuse, Agrobact. tumefaciens. Не проявляет антагонистической активности в отношении дрожжей и грибов. Изобретение относится к микробиологии. Предлагаемый штамм Pseudomonas Batumici nov.sp. 3187 новый, в патентной и научно-технической литературе не описан. Целью изобретения является выделение штамма, образующего новый антибиотик, обладающий избирательной активностью в отношении страфилококка. Штамм Pseudomonas Batumici nov.sp. 3187 выделен в отделе антибиотиков института микробиологии и вирусологии АН УССР из ризосферы эвкалипта (Батумский ботанический сад) весной 1972 г. Штамм Pseudomonas Batumici nov.sp. 3187 - продуцент антибиотика - хранится в коллекции Института микробиологии и вирусологии им. Д.И.Заболотного под номером 3187 и характеризуется следующими культурально-морфологическими признаками. Грамположительные палочки размером 2,2 x 1,0 мкм, подвижные с помощью двух полярных жгутиков, длина жгутиков в среднем 6 - 8 мкм, число витков 4 - 6, включений поли--оксимасляной кислоты не образует. Бактерии хорошо растут на обычных питательных средах. Мясо-пептонный агар. Колонии пастообразные, гладкие, круглые, блестящие. Мясо-пептонный бульон. Равномерная муть, желто-зеленый флюоресцирующий пигмент не образует. Среда с глюкозой. Образует желто-бурый, диффундирующий в среду пигмент, извлекаемый хлороформом. Колонии окрашены в желто-бурый цвет, часто более темный, чем среда. Физиолого-биохимические признаки. Строгий аэроб. Использует глюкозу только по окислительному пути. Оксидазоположительный по Ковачу. Оптимальная для роста температура 27^oС, при 42^oС не растет, при 37^oС рост очень слабый. Обладает аргининдегидролазной, левансахаразной и лецитиназной активностью. Нитраты не восстанавливает. Желатин, эскулин не гидролизует. Глюконат не окисляет. Хинную кислоту в протокатеховую не превращает. Усваивает аммиачные и нитратные формы азота. В качестве единственного источника углерода использует D-галактозу, L-арабинозу, D-маннозу, фруктозу, сахарозу, трегалозу, глюконат, уксусную, малоновую, янтарную, малеиновую, фумаровую, глутаровую, молочную, изолимонную, лимонную, аконитовую, щевелевоуксусную, итаконовую, яблочную, аспарагиновую, глутаминовую, -аминомасляную и хинную кислоты, маннит, инозит, глицерин, -аланин, -аланин, изолейцин, валин, аргинин, орнитин, цитруллин, бетаин, саркозин. Не использует алифатические спирты, жирные кислоты, ароматические соединения. Антагонистические свойства. Обладает активностью в отношении Staph. aureus, Erwinia aroideae, фитопатогенных видов Preudomonas, Xanthomonas malvacearum и Xanthomonas campestris, частично угнетает рост E. coli, Bac. Subtilis, Corynebact. michiganense, Agrobact. tumefaciens. Не проявляет антагонистической активности в отношении дрожжей и грибов. Условия хранения культуры. Культура хранится в условиях лаборатории на 0,5%-ном мясо-пептонном агаре под слоем вазелинового масла. Бактерии засевают уколом в высокий столбик среды и после 48 ч роста при 27^oС заливают 2 - 3 мл стерильного вазелинового масла. Хранится без пересевов не менее 4 лет при комнатной температуре. Для повседневной работы бактерии высевают из исходной музейной культуры на скошенный мясо-пептонный агар, на котором сохраняется способность к дальнейшим пересевам в течение 10 дней. Пример. Культуру Pseudomonas Batumici nov.sp. 3187 выращивают на среде следующего состава, г/л: Глюкоза - 20 KNO₃ - 1 K₂HPO₄ - 0,5 MgSO₄ - 0,5 NaCl - 0,5 FeCl₃ - Следы Пептон - 10 pH среды - Естественный 10 л питательной среды разливают по 100 мл в колбы Эрленмейера емкостью 0,75 л, стерилизуют 20 мин при 110^oС, засевают суточной культурой Pseudomonas Batumici nov.sp. 3187, выращенной в пробирках на скошенном мясо-пептонном агаре при 27^oС. Культуру смывают со скошенного агара 6 мл стерильного физиологического раствора и добавляют по 3 мл в колбу. Ферментацию ведут на круговых качалках при 220 об/мин в течение 72 ч при 26^oС. Культуральную жидкость из колб сливают в бутыль емкостью 20 л, подкисляют 5%-ной серной кислотой до pH 4,5 - 4,2 и экстрагируют хлороформом (два раза по 2,5 - 3,0 л). Хлороформенный экстракт упаривают в вакууме (20 мл) при 40^oС до 50 - 60 мл. Выход суммарного препарата после упаривания хлороформа около 169 мг/л, его активность по отношению к Staph. aureus 209 равна 1 мгк/мл. Концентрат наносят на колонку (3 x 60 см), заполненную водной кремниевой кислотой (фракция 100 - 120 меш). Колонку промывают хлороформом до появления бесцветных элюатов (фракция 1), а затем смесью хлороформа и метанола 98 : 2 элюируют фракции 2 и 3. Разделение препарата контролируют тонкослойной хроматографией на кремниевой кислоте в системе хлороформ - метанол (90 : 5), пятна обнаруживают опрыскиванием хроматограмм 5%-ным спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты и нагреванием в течение 10 мин при 120^oС. Фракция 1 (R_f = 0,8), содержание которой колеблется от 70 до 80%, представляет собой феназин-1-карбоновую кислоту. Это малоактивный антибиотик, действует на грамположительные бактерии и дрожжи в концентрации 50 - 100 мгк/мл. Фракция 2 (R_f = 0,5) состоит из аморфного порошка вишнево-красного цвета. Антибиотической активностью не обладает. Содержится в суммарном препарате в количествах до 1%. Химическое изучение этого вещества не проводили. Фракция 3 (R_f = 0,24 - 0,15) содержится в количествах до 10%, представляет собой бурый смолоподобный продукт, хорошо растворимый в органических растворителях и щелочах. Состоит, в свою очередь, из трех соединений (R_f = 0,24, 0,20 и 0,15). Эта фракция обдадает высокой активностью по отношению к Staph. aureus 209 (минимальная бактериостатическая доза 0,1 - 0,01 мкг/мл). Полученные с колонки элюаты фракций 2 и 3 концентрируют в вакууме и рехроматографируют на шести пластинках (18 x 24 см) с незакрепленным слоем водной кремниевой кислоты толщиной 0,75 мм в системе хлороформ - метанол (90 : 5). Из зоны с R_f = 0,2 получают 50 г антибиотика.

Формула изобретения

Штамм Pseudomonas Batumici nov. sp. 3187 - продуцент антибиотика, обладающего противостафилококковой активностью. Хранится в коллекции Института микробиологии и вирусологии им.Д.И.Заболотного АН УССР под номером 3187. Культурально-морфологические признаки. Грамположительные палочки размером 2,2 x 1,0 мкм, подвижные с помощью двух полярных жгутиков, длина жгутика в среднем 6 - 8 мкм, число витков 4 - 6, включений поли- -оксимасляной кислоты не образует. Бактерии хорошо растут на обычных питательных средах. Мясо-пептонный агар. Колонии гладкие, круглые, блестящие, пастообразные. Мясо-пептонный бульон. Равномерная муть, желто-зеленый флюоресцирующий пигмент не образует. Среда с глюкозой. Образуют желто-бурый, диффундирующий в среду пигмент, извлекаемый хлороформом. Колонии окрашены в желто-бурый цвет, часто более темный, чем среда. Физиолого-биохимические признаки. Строгий аэроб. Использует глюкозу только по окислительному пути. Оксидазоположительный по Ковачу. Оптимальная для роста температура 27^oC, при 42^oC не растет, при 37^oC рост очень слабый. Обладает аргининдегидролазной, левансахаразной и лецитиназной активностью. Нитраты не восстанавливает. Желатин, эскулин не гидролизует. Глюконат не окисляет, хинную кислоту в протокатеховую не превращает. Чувствителен к нитрофурантоину. Усваивает аммиачные и нитратные формы азота. В качестве единственного источника углерода использует D-галактозу, L-арабинозу, D-маннозу, фруктозу, сахарозу, трегалозу, глюконат, уксусную, малоновую, янтарную, малеиновую, фумаровую, глутаровую, молочную, изолимонную, лимонную, аконитовую, щевелевоуксусную, итаконовую, яблочную, аспарагиновую, глутаминовую, -аминомасляную и хинную кислоты, маннит, инозит, глицерин, -аланин, -аланин, изолейцин, валин, аргинин, орнитин, цитруллин, бетаин, саркозин. Не использует алифатические спирты, жирные кислоты, ароматические соединения. Антагонистические свойства. Обладает активностью в отношении Staph. aureus, Erwinia aroideae, фитопатогенных видов Pseudomonas, Xanthomonas campestris и Xanthomonas malvacearum, частично угнетает рост E.coli, Bac.subtilis, Corynebact. michiganeuse, Agrobact. tumefaciens. Не проявляет антагонистической активности в отношении дрожжей и грибов.