Способ получения альфа-фетопротеина

ОЛ ИСАНИ Е

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

И АВТОРСКОМУ СИИДБИЛЬС1В т

Союз Советсхин

Социюлмстичесхих

Республик (и, 583536 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 05.02.76 (21) 2320800/28-13 с присоединением заявки №(23} ПриоритетовЂ

Я (51) М, Кл

А 61 K 37/02//

С 07 G 7/00

Государстненньй ненттет

СССР ло делам нзобретеннй и открытий

Опубликовано 05.10.79. Бтоллетень Ж 37

Дата опубликования описания 0510.79 (53) УЙК 615.739. .б (088.8) (72) Автор изобретения

А.А.тр

2-й московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н. И. Пирогова . - (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЬФА-ФЕТОПРОТЕИНА

Изобретение относится к биологической химии и может быть использовано в медицине для выделения раковоэмбрионального белка альфафетопротепна, применяемого для приготовления различиых иммунодиагностикумов.

Известен способ получения альфа-фетопротеина путем аффннной хроматографии исходного сырья на иммобилизованных экстрогенах с последующим отмыванием буферным раствором и элюированием целевого продукта tt).

Однако такой сгособ не обеспечивает высокой степени чистоты препарата.

С целью повышения степени чистоты препарата по предлагаемому способу исходное сырье предварительно обрабатывают бутиловым спиртом и подвергают дпализу против буферного раствора, а элюирование осуществляют бутиловым спиртом или смесью бутилового спирта с буферным раст..ором. При этом отмывание проводят последовательно нейтральчым и кислым буферным раствором.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример. 200 мл остатков абортивного материала, полученного после отфильтровывания крови, и состоящего из обрывков тканей плода и остатков плодного яйца заливают 100 мл бутилового спирта тщательно перемещивают и осо тавляют на ночь в холодильнике при 4 С. Затем центрифугируют при 6000 об/мин 30 мин. В про5 бирке образуются четыре фазы: верхняя — бути— лозый спирт, плотная фаза, содержащая денатурированный гемоглобин и ряд других денатурированных белков, затем жидкая фаза, содержащая альфа-фетопротеин, отделенный or эстрогента ных гормонов, которые экстрагировались бугиловым спиртом и ушли в верхнюю фазу (в этой фазе помимо альфа-фетопротеина содержатся многие другие белки) и нижняч фаза, содержащая остатки тканей плода и плодного яйца. т5 Водно-белковая фаза по белковому составу ма;ло отличается от сыворотки крови новорожденных и количество альфа-фетопротеина в ней около 10 мг am менее 0,2% относительно других белков.

После этого водно-белковую фазу подвергают диализу против 0,9% водного раствора хлористого натрия, забуферениого фосфатным буфером (pH 6,8) до полного исчезновения запаха

583536

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Техред Я. Бабуска Корректор И. Михеева

Редактор Е. Месропова

Заказ 6019/60

Тираж 672 Подписное

1П"", 1ИПИ Государственного коь.итетз СССР по делам изобретений и открь -.ий

113035, Москва, К-35, Раушская иаб., д. 4/5

Ф:пиал ППП "Патент", r. Угягород, ул. Проектная, 4 бутилового спирта. Затем на колонке, содержашей 100 мл диэтилстильбестрола, ковалентло связанного с сефарозой 4В, проводят аффивную хроматографию путем пропусканпя со скоростью

50 мл/ч отдиализованиой водно-белковой фазы. Далее проводят отмывание колонки ot несвяэавшихся белков 100 мл 0,9%-ного забуференного раствора хлористого натрия. после чего дополнительно отмывают колонку 100 мл кислого глицин-l-lCY буфера (pH 2,0). и после допол- lp нительного отмывания забуференным физиологическим раствором, чтобы нейтрализовать содержимое колонки (количество 100 мл), проводят элюирование альфа-фетопротеина, пропуская через колонку 50 мл смеси бутилового спирта с забуференным физиологическим раствором хлористого натрия (1 О). Затем вновь отмывают колонку.

Полученный препарат альфа-фетопротеина проверя!GT HQ - истоту иммунохимически и в gp злектрофорезе в полиакриламццном геле и обнаруживают незначительную примесь альбумина и гемоглобина. Чистота получе ного препарата выше 95%, что свидетельствует о высокой эф.фекпп ности спосооа. 25

Предлагаемый способ позволяет использовать, для выделения альфа-фетопротеина практически любые биологические жидкости и ткани, содержащие альфа-фетопротеин. Способ прост, и надежен в употреблении, дает высокие результаты 3р и может быть использован для получения про4 мышяеииых количеств альфа-фетопротенна, белка, который нахвалит все бслыиее применение в медицине для H3fотовлеиия различных иммунодиагиоликумов, необходимых для распознавания ранних стадий первичного рака печени, угрожаюшего выкидыша плода при беоеменности, а также внутриутробных патологий развития плода: микроцефалия, анэнцефалия, спинно-мозговая грь;:.. .а, спина бифидум и различные фетоплацентар;:ые патологии.

1. Способ получения альфа-фетопротеина путем аффинной хроматографии исходного сырья на лммобилизованных экстрогенах с последуюцим отмыванием буферным раствором и элюированием целевого цродукта, î r л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения степени чистоты препарата, исходное сырье предварительно обрабатывают бутиловым спиртом и подвергают диализу против буферного раствора, а элюирование осуществляют бутиловым спиртом или смесью бутилового спирта с буферным раствором.

2, Способ по и. 1, отличающийся тем, что отмывание проводят последовательно нейтральным и кислым буферным раствором.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. РЕВЯ Letters, 53,3, 1975, с. 305 — 308.