Способ получения винкристина

О и и о-А- -н

СОюз Советских

Социалистических

Республик (1,) 5769SO (6)) Дополнительный к патенту— (22) Заявлено 19. .72 (21) 864313!04 (23) Приоритет — (32) (51) М. Кл (- 07 О 519/04

//А 61 К 31/475

Государственный комитет

Совета Министров СССР оо делам изооретений и открытий (33) (43) Опубликовано !5 10.77. Бюллетень ¹ 38 (45) Дата опубликования описания 15.11.77 (53) У ДK 547 94.07 (088.8) Иностранцы

Каролина Йованович, Кальман Сас, Дьердь Фекете, Эмил Биттнер, Эстев Дежери и Янош Элеш (ВНР) (72) Авторы изобретения

Иностранное предприятие

"Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр РТ" (ВНР) (71) Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВИНКРИСТИНА

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения винкристина.

Винкристин находит применение в клинической практике как химикотерапевтическое средство против рака, прежде всего для лечения лейкемии в детском возрасте (!).

Известны способы получения винкристина экстракцией Vinca rosea (1, 2). Из общей смеси, содержащей приблизительно 70 различнътх алкалоидов, можно с трудом получить О,!% винкристина.

Известен также способ получения винкристина из винбластина, заключающийся в том, что винбластин в результате микробиологического окисления в присутствии перекиси водорода превращается в Nдеэметилвинбпастин, который одним из известных способов формилирования превращается в винкристин (3).

Таким образом IIO данному способу винкристин получают из винбластина довольно сложным путем в две стадии.

Целью данного изобретения является уменьшение числа стадий при получении винкристина из винбластина и упрощение процесса. Укаэанная цель достигается за счет того, что винбластин или его соль годвергают окислению с помопью хромовой кислоты или се соли при охлаждении, полученный продукт экстрагируют из нейтрализованной или подщелоченной реакционной среды, экстракт выпаривают досуха и выделяют целевой продукт.

Процесс окисления проводят при температуре от — 30 до — 90 С, в органическом растворителе или в смеси растворителей, например ацетон ледяная уксусная кислота в соотношеттии 4:1.

Пример 1. 10 г (0,011 моля) сульфата !

Q винбластина растворяют в 2200 мл ацетона, добавляют 500 мл ледяной уксусной кислоты и охлаждают go — 60 С. Одновременно 4,96 г (0,0494 моля) хромовой кислоты растворяют в 1860 мл уксусного ангидрида, охлаждают до — 60 С и затем

15 прикалывают при перемешивании в раствор сульфата винкристина. После 8 - минутного перемешивания прикапывают 4400 мл концентрированного аммиака, который охлаждался от — 40 до — 50 С, до величины рН 8. Температура раствора во время

20 нейтрализации не должна превышать (+) 50 С. Подщелоченная реакционная смесь смешивается с 10 л воды и экстрагируется хлористым метиленом до отсутствия алкалоида. Фазы хлористого метилена соединяют. образованный при нейтрализации и перешедший в органическую фазу ацетат аммония

576950!

О дважды промываю г водой (по 3000 мл) . После этого высушенный раствор хлористого метилена вьшаривают при пониженном давлении досуха. Получают 8,5 г аморфного сырого винкристина, который в качестве примеси содержит еще N - дезметилвинбластин. Аморфный сырой винкристин растворяют в 30 мл бензола и хроматографируют на колонке, которая содержит пропитанную бензолом окись алюминия. Вначале производят элюирование с 1300мл бензола, после этого с 5500 мл смеси бензола-хлороформа (2:1) и, наконец, с 4250 мл смеси бепзола-хлороформа (l:1). Собирают фракции по 250 мл. Отдельные фракции исследуют методом хроматографии на бумаге или методом тонкослойцой хроматографии. Смесь бензола - хлороформа с отношением 2:1 вымывает полученную в качестве побочного продукта окисления примесь N- дезметилвинбластина, а смесь с отношением 1:1— образованный винкристин. Содержащие идентичные алкалоиды фракции, идентифицированные посредством хроматографии на бумаге или тонкослойной хроматографии, соединяют и выпаривают при пониженном давлении. Таким путем получают 5,9 r аморфного винкристина или 2,7 г аморфного Nдезметил винбластина.

Аморфный N - дезметилвинбластин растворяют в 27 мл безводного этанола и при помощи 6-ного раствора серной кислоты в этаноле устанавливают величину рН -4, причем, сульфат N - дезметилвинбластина выпадает в кристаллический осадок.

Получают 2,5 г сульфата N - дезметилвинбластина, который растворяют в 13 мл метанола. К раствору добавляют 60мл безводного этанола. Раствор выдерживают один час при комнатной температуре, после чего отфильтровывают выкристаллизованный сульфат N - дезметнлвинбластина.

Выход: 2,2 г (0,0024 моля) сульфата N - дезметилвинбластина (20%).

Из одной части сульфата N дезметилвинбластина освобождается основание и идентифицируется на основании следующих данных: точка плавления: 2 2 — 215 С (Боетиус), (д) ;" -- 5,8 (с — 1, хлороформ).

Образованный при окислении винбластина Nдезметилвинбластин или его соль может известным образом формилироваться, причем получается винкристин или его соль.

Полученные 5,9 г аморфного винкристина растворяют в 60 мл безводного этанола н подкисляют

1,4-пым раствором серной кислоты в этаноле до величины рН 4, причем сульфат винкристина выпадает в кристаллический осадок. Получают 5,6 r сульфата винкристина. Последний растворяют в

30 мл метанола и к раствору добавляют 120 мл безводного этанола. Раствор выдерживают один час при комнатной температуре и затем отфильтровывают выкристаллизованный сульфат винкристнпа. Выход: 5,2 г (0,0055 моля) сульфата винк и стиля (50; . ) . (< 1- = (+111 -- (+! \2" (с l. вода >

Rf —,. 0,30 (появляется с арко-голубой окраской) .

11родукт и ндентифи цп руе гся по и нфр акра сному спектру, который llo сравнению с инфракрасным спектром винбластина имеет при 5,94 мкм сильную полосу поглощения.

Исследования методом тонкослойной хроматографии проводились с окисью алюминия марки

G. Merck. Элюирование осуществлялось хлороформом с содержанием 0,5; 0 метанола, для проявления использовалась концентрированная фосфорная кислота, содержащая 1% сульфата цераммония.

Пример 2. 5 г (0,0055 моля) сульфата винбластина растворяют в 1100 мл ацетона и добавляют 250 мл 99,5 0 очищенной ледяной уксусной кислоты, которая не содержит окисляемых веществ. Раствор охлаждают до — 60 С. Одновременно 2,48г (0,0297 моля) хромовой кислоты растворяют в 930 мл уксусного ангидрида, охлаждают до (— ) 60 С и при перемешивании добавляют к раствору сульфата винбластина. Реакционную смесь перемешивают в течение 8 мин и затем добавлением охлажденного от (— ) 40 до (— ) 50 С концентрированного аммиака устанавливают величину рН9.

Во время нейтрализации температура реакционной смеси не должна превышать (+) 50 С. Подщелоченную реакционную смесь разбавляют 5000 мл воды н экстрагируют 3 раза по 1000 ми хлористым метиленом до отсутствия алкалоида. Фазы хлористого метилена соединяют и образованный при нейтрализации и перешедший в органическую фазу ацетат аммония промывают 2 раза по 1500 мл воды. После этого фазу хлористого метилена сушат и выпаривают при пониженном давлении досуха. Остаток растворяют в смеси из 75 мл концентрированной муравьиной кислоты и 12,5 мл уксусного ангидрида и выдерживают 5 мин при комнатной температуре. Затем кислый раствор разбавляют водой в три раза и с помощью концентрированного аммиака при охлаждении устанавливают величину рН 9. Алкалоиды экстрагируют 3 раза порциями по 100 мл хлористого метилена. Фазы хлористого метилена соединяют и при пониженном давлении выпаривают досуха. Сухой остаток, который содержит винкристин, растворяют в 20 мл бензола и хроматографируют на колонке, содержащей пропитанную бензолом окись алюминия с активностью IV — V. Сначала производят элюирование при помощи 500 мл бензола, затем 1000 мл смеси бензола - хлороформа в отношении 9:1, после этого 700 мл смеси бензолахлороформа в отношении 8,5;1,5, затем 2300 мл смеси в отношении 8:2 и, наконец, при помощи смеси бензола - хлороформа в отношении 1: 1.

Улавливают фракции по 250 мл. Бензол и смеси бензола - хлороформа в отношении 9:1 и 8,5:1,5 служат для лучшего разделения веществ на адсорбенте; первые алкалоидсодержащие фракции появляются при элюировании с первой половиной смеси бензола - хлороформа в отношении 8: . Зти фракции соединяют и выпаривают прп понижениеvi

576950

Составитель В. Пастухова

Техред А. Лемьянова

Корректор П. Макаревич

Редактор H. Потапова

Тираж Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 2955/703

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 давлении, причем получают 5 — 10% побочного продукта, в пересчете на вес образованного при окислении конечного продукта, сульфата винкристина.

Содержащие винкристин фракции получают при элюировании со второй половиной смеси бензолахлороформа в отношении 8:2, удаление винкристина растворением заканчивают при помощи смеси бензола - хлороформа в отношении 1:1. Содержащие винкристин фракции, идентифицированные посредством тонкослойной хроматографии или хроматографии на бумаге, соединяют и выпаривают при пониженном давлении досуха. Получают 3,8 г сухого остатка, который растворяют в 40мл безводного этанола, и раствор при помощи 1%-ного раствора серной кислоты в этаноле доводится до величины рн 4. Винкристин осаждают в форме своего сульфата, отделяют, растворяют в 30мл метанола, и раствор смешивают с 120мл безводного этанола. Сульфат винкристина выкристаллизовывают при одночасовой выдержке. Продукт отфильтровывают, промывают исушат. Выход 3,5 r (0,0039 моля). сульфата винкристина (70%) . Физические константы сульфата винкристина совпадают с названными в примере 1.

Формула изобретения

1. Способ получения винкристина на основе винбластина с применением процесса окисления, о т л ичающий ся тем,что, сцелью упрощения процесса, винбластин или его соль подвергают окислению с помощью хромовой кислоты или ее соли при охлаждении, полученный продукт экстрагируют из нейтрализованной или подщелоченной реакционной

1р среды, экстракт выпаривают досуха и целевой продукт выделяют.

2. Способ пои. 1, отличающийся тем, что процесс проводят при температуре от — 30 до о — 90 С, в органическом растворителе или в смеси

16 растворителей, преимущественно в смеси ацетонледяная уксусная кислота в соотношении 4: 1.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США N 3205220, кл. 260 — 236, 07.09.65.

2. Патент BHP N 160967, кл. С 07 g 5 00, 01. 12.7 2.

3. Патент США N 3354163, кл. 260-287, 21,11.67.