Способ определения зараженности почвы возбудителем рака картофеля

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЪСТВУ («)533633

Своа Советских

Социалистических

Республик

I ( (51) М.Кл.- С 12 К 1. 04 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 21.02.75 (21) 2108184/15 с присоединением заявки— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 30.10.76. Бюллетень ¹ 40 (45) Дата опубликования описания 19.11.76

Государственный комитет

Совета Министров СССР по ленам изобретений н открытий (53) УДК 631.427.23 (088.8) (72) Авторы изобретения

И. В. Голик и Б, Б. Громова (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗАРАЖЕННОСТИ ПОЧВЫ

ВОЗБУДИТЕЛ ЕМ РАКА КАРТОФЕЛЯ

Изобретение относится к области зыявле. ния структурных элементов патогенных микроорганизмов, а именно к вопросу выявления з почве зооспорангиев возбудителя рака картофеля. Изобретение может быть использовано в научных целях при изучении возбудителя рака картофеля.

Известны способы выявления з почве возбудителя рака картофеля, включающие извлечение зооспорангиев патогена из почвы с помощью тяжелых жидкостей, таких как четыреххлористый углерод, дихлорэтан, хлороформ и водные растворы минеральных солей.

Извлечение зооспорангиев проводится путем взбалтывания почвы в жидкости с последующим отстаиванием или центрифугированием и отделением надосадочной жидкости, содержащей зооспорангии. Микроскопическим анализом пленки, которая возникает на поверхности надосадочной жидкости или сухого остатка, полученного после испарения этой жидкости, определяют наличие или отсутствие в почве возбудителя. Однако по известному способу извлекают только свободные зооспорангии, которые не задерживаются почвой..При этом вместе с зооспорангиями извлекается большое количество примеси, которая очень затрудняет обнаружение патогена при микроскопическом просмотре. Несмотря на эти трудности известные способы позволяют обнаружить возбудителя, но только в тех почвах, которые имеют высокую степень зараженности.

Низкая чувствительность, неудобства и трудности, связанные с выполнением ряда методических приемов, не гарантируют точности определения зараженности почвы известными способами.

Цель изобретения — более быстрое и точное определение зараженности почвы независимо от состава и степени зараженности.

Достигается это тем, что пробу исследуемой почвы предварительно гомогенизнрую-. в ацетоне, недостаточную жидкость очищаю от ор;анпческих остатков и крупных микроорганизмов на "èòå,,пропускающем зооспорангпп, которые отделяют от надосадочной жидкости на бумажном фильтре и микроскопируют.

Способ разработан и осуществлен на Всесоюзной станции по раку картофеля.

Для анализа пробы отбирают из остаточного количества почвы перевозимых клубней и корнеплодов или из изучаемого участка.

Прп изучении зараженности участка почву берут з шахматном порядке с междурядьем мест отбора 3ХЗ .и с помощью бура Некрасова. Отобранные образцы перемешивают и отбирают из средней пробы нужное для аназо лиза количество.

533633

Формула изобретения

Составитель М. Дранишников

Редактор E. Дайч Тскрсд В. Рыбакова Корректор В. Гутман

Заказ 954/1468 Изд. № 1731 Тираж 575 ПодиHcHt.3<

Ц11ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, 7К-35, Раушская иаб., д. 4/5

Тип Харьк фил. пред. «Патент»

100 г воздушно-сухой почвы просеивают на сите с отверстиями 2 мм, переносят в стагкан гомогенизатора, заливают двумя объсмамп ацетона, гомогенизируют 5 лшн и полученную суспензию оставляют для отстаивания на

5 иин. Образовавшуюся надосадочную хкпдкость отделяют от осадка слпванием и фильтруют сначала на сите с отверстиями

200 лк, на котором остается органическая примесь и крупные микроорганизмы, а затем на бумажном фильтре. Фильтрат отбрасывают, а осадок и фильтр с его содержимым сохраняют. Если,в анализируемой почве име. ются, поросшие зооспорангии, онп попадают в содержимое фильтра.

Далее из осадка извлекают зооспорангии патогена. Для этого осадок переносят в мерный цилиндр, заливают тремя объемами четыреххлористого углерода, который смешивается с ацетоном, содержащимся в осадке, и образуется смесь, удельный вес которой больше, чем у зооспорангиев. Содержимое цилиндра тщательно перемешивают, цилиндр закрывают и оставляют на 5 иин для отстаивания. Полученную при этом надосадочную жидкость также фильтруют сначала на сите с отверстиями 200 мк, а затем на том же бу.мажном фильтре. При этом в содержимое фильтра из надосадочной жидкости попадают зооспорангии, если они имеются в анализиру.емой почве.

Извлечение зооспорангиев из осадка продолжают таким же способом еще 2 раза. При этом для каждого последующего извлечения используется фильтр ат, полученный после предыдущего извлечения.

Бумажный фильтр высушивают в теплом воздухе. Содержимое фильтра скальпелем переносят на предметные стекла, смачивают

5оo íûì раствором глицерина и покрывают покровными стеклами. Приготовленные препараты тщательно просматривают под микроскопом. Если при этом не обнаруяеH0 зооспора:1гиев, то фильтр разрезают на квадратики

20Х20 .и,и, расставляют их IIa предметных стеклах внутренней стороной кверху, смачивают 5 !в-ным раствором глицерина и покрывают предметнь1ми стеклами. Препараты из фильтра также просматривают под микроскопом. Если и при этом не будет обнаружено зооспорангиев, то исследуемая почва не со10 держит возбудителя рака картофеля.

Предлагаемый способ может быть использован для количественного выделения зооспорангпев нз почвы путем их дополнительно:I очистки от примесей с помощь1о состава по авт. св. ¹ 254944.

Новый способ позволяет обнаружить возбудителя рака картофеля в различных по составу почвах с самой низкой степенью зараженности (менее одного зооспоранг:.1я на 1 г почвы) . Высокая чувствительность данного

cïî" îáà позволяет использовать его в карантинной практике и для решения различных научных вопросов.

Способ определения зараженности почвы возбудителем рака картофеля, включающий извлечение зооспорапгиев патогена из пробы

3О почвы с,помощью четыреххлористого углерода путем ее взбалтывания в жидкости с последующим отстаиванием и отделением надосадочной жидкости, содержащей зооспорангии, отлича1ощийся тем, что, с целью более быстрого и точного определения незазиснмо от степени зараженности, пробу исследуемой почвы предварительно гомогенизируют в ацетоне, надосадочную жидкость очищают от органических остатков и крупных

4О микроорганизмов на сите, пропускающем зооспорангии, которые отделяют от надосадоч-. ной жидкости на бумажном фильтре и микрос ко и ир уют.