Способ определения свободной и связанной нейраминовой кислоты в тканях человека и животных

вг 1 . ;. .

I

О П И А Н И Е 529418

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 09.07.75 (21) 2154400/13 с присоединением заявки №вЂ” (51) М. К

G 01 N 33/16

Гасударственный комитет

Саветв Министрав СССР па делам иэааретений н открытий (23) Приоритет— (43) Опубликовано 25.09.76. Бюллетень № 35 (53) УДК577.1(088.8) (45) Дата опубликования описания 14.02.77 (72) Авторы изобретения

В. А Зтрльева и Г. И. Сименко

Всесоюзный научно — исследовательский институт сельскохозяйственного и специального применения гражданской авиации (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СВОБОДНОЙ И СВЯЗАННОЙ

НЕЙРАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ В ТКАНЯХ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для исследования веществ в тканях человека и животных.

Известен способ определения свободной и связанной нейраминовой кислоты в тканях животных и человека, включающий последовательную обработку исследуемой ткани периодатом натрия, арсенитом натрия и тиобарбитуровой кислотой и двойную экстракцию циклогексаноном примесей при рН

5,0 и нейраминовой кислоты при рН 3,0.

Однако известный способ не обеспечивает высокой чувствительности.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счет обеспечения более полной экстракции примесей и нейраминовой кислоты.

Для этого экстракцию примесей ведут при рН

7,5 — 8,0, а экстракцию нейраминовой кислоты при рН 1,8 — 2,0.

П г и м е р. Проводят опыты по определению количества свободной и связанной нейраминовой кислоты в селезенках мышей.

Для этого подготавливают два образца гомогената селезенки по 100 мг каждый (для определения свободной и связанной нейраминовой кислоты).

Образцы помещают в пробирки и обрабатывают следующим образом.

В пробирку добавляют 0,1 мл периодата натрия и оставляют на 29 мин при комнатной температуре.

Затем туда же добавляют 1 мл 1(Y — ного арсенита натрия и 3 мл тиобарбитуровой кислоты, взбалтывают и ставят в кипящую водяную баню на 15 мин.

После этого пробирки охлаждают в воде.

Затем проводят экстракцию примесей. Для этого в пробирку добавляют 5 o ный раствор NaOH в количестве, обеспечивающем рН 8,0 (примерно 1,0—

1, 2 мл) и 4 мл циклогексанона, взбалтывают, центрифугируют при 3000 об/мин 3 — 5 мин и удаляют слой циклогексана, содержащий примеси.

К водной фазе, освобожденной от примесей, добавляют 66% — ную серную кислоту до рН 1,9 - 2,0 и 4 мл циклогексана, встряхивают, центрифугируют при 3000 об/мин 3 — 5 мин. В полученном цикло20 гексаноновом экстракте, содержащем нейраминовую кислоту, определяют ее количество спектрофотометрически на волне 549 ммк. О наличии в экстракте нейраминовой кислоты судят по характерной кривой с максимумом поглощения на волне

25 549 ммк.

529418

Составитель С. Малютина

Техред М. Левицкая

Корректор С. Болдижар

Редактор А. Бер

Тираж 1029 Подписное

11НИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д.4/5

Заказ 5346/112

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Количество нейраминовой кислоты, выделенной по предлагаемому способу, во много раз превышает количество нейраминовой кислоты, полученной по известному способу, что свидетельствует о точности и чувствительности предлагаемого способа.

Формула изобретения

Способ определения свободной и связанной нейраминовой кислоты в тканях человека и животных, 4 включающий последовательную обработку исследуемой ткани периодатом натрия, арсенитом натрия и тиобарбитуровой кислотой и двойную экстракцию циклогексаноном примесей, а затем нейраминовой кислоты, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа за счет обеспечения более полной экстракции примесей и нейраминовой кислоты, экстракцию примесей ведут при рН 7,5 — 8,0 а экстракцию нейраминовой кислоты—

10 при рН18 — 2,0 .