Способ определения липидного состава биологических жидкостей

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (1ц 526824

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 20.06.75 (21) 2!46640/13 (51) М. Кл.2 G 01N 33/16 с присоединением заявки М

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий (23) Приоритет

Опубликовано 30.08.76. Бюллетень че 32

Дата опубликования описания 14.09.7б (53) УДК 612 015 32 (088.8) (72) Автор изобретения

П. М. Бабаскин (71) Заявитель

2-ой московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н. И. Пирогова (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИПИДНОГО СОСТАВА

БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в клинической биохимии для изучения жирового обмена.

Известен способ количественного определения липидного состава сыворотки крови, использующий экстракцию липидов (отношение объемов экстрагирующей смеси и сыворотки

20: 1), разделение метадом хроматографии в тонком слое, элюирование липидов из хроматографических пятен и спектрофотометрическое определение их количества.

Недостатками известного способа являются потребление значительного количества анализируемого субстрата, рыхлость и сыпучесть тонкого слоя, что ведет к затрате лишнего времени на один анализ.

С целью уменьшения количества анализируемого субстрата, ускорения анализа, увеличения прочности и улучшения качества тонкого слоя по предлагаемому способу липиды экстрагируют хлороформ-метаноловой смесью из цельной крови в соотношении 50: 1, а количественный денситометрический анализ проводят непосредственно на хроматограммах. С целью увеличения прочности и улучшения качества тонкого слоя к сорбционной смеси добавляют 2%-ный раствор крахмала.

Способ осуществляют следующим образом.

Для анализа берут 0,2 мл капиллярной крови из пальца и смешивают в пробирке с

0,2 мл воды. К гемолизату приливают 10 мл экстрагирующей смеси, пробирку на 10 мин помещают в водяную баню при температуре

40 — 45 С. Затем смесь фильтруют через бумажный обезжиренный фильтр в чистую пробирку, добавляют 2 мл 0,74% -ного раствора хлористого калия, сильно встряхивают и оставляют до следующего дня при комнатной температуре. Образуются два слоя — верхний

10 водный и нижний — хлороформный, Верхний слой удаляют, а нижний переносят в пробирку, смешивают с 0,5 мл метанола и выпаривают досуха в водяной бане при 40 — 45 C под вакуумом с водоструйным насосом.

1,5 Полученный липидный экстракт наносят на пластину в тот же день. При длительном хранении сухого экстракта теряются некоторые фракции липидов, особенно свободные жировые кислоты.

20 В стаканчике Хагидорна смешивают 4 г силикагеля «Н» по Шталю, 600 мг гипса, 13 мл воды и 2 мл закрепителя, например 2%-ного раствора крахмала. Смесь наносят равным слоем на стеклянную пластину 13)(18 мм, 23 которую помещают на ровную поверхность и оставляют при комнатной температуре до следующего дня. Затем ее активируют 30 мин в сушильном шкафу при температуре 90 — 95 С.

После охлаждения на воздухе пластина гото30 ва к работе.

526824

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор Н. Хубларова Техред В. Рыбакова Корректор И. Позняковская

Заказ 2019!8 Изд. Хв 1577 Тираж 1029 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4 5

Типография, пр. Сапунова, 2

За 1 — 2 час до начала хроматографии в банки наливают систему растворителей для разделения липидов в одной и фосфолипидов в другой банке. Систему растворителей наливают в банки в таком количестве, чтобы пластины погрузились на 0,5 см. Исследуемый экстракт крови растворяют в 0,2 мл гексана и по 0,05 мл (соответствует 0,05 мл исследуемой крови) наносят на пластины, отступая 1,5 — 2,0 см от нижнего и бокового краев пластины. Интервал между пробами 2 см. Из одной и той же пробы экстракт наносят на 2 пластины — для разделения липидов на одной и фосфолипидов на другой. После нанесения проб пластины помещают в банки с системой растворителей.

Высота подъема растворителей по адсорбенту

10 см. Время хроматографии липидов 20—

25 мин, фосфолипидов 40 †45 мин.

По окончании хроматографии пластины подсушивают при комнатной температуре под вытяжкой до полного испарения с адсорбента растворителя и опрыскивают 2%-ным раствором фосфорномолибденовой кислоты по 5 мл красителя на одну пластину. Затем пластины помещают в сушильный шкаф на 10 мин при

90 — 99 С для проявления окраски. После охлаждения пластин проводят количественное определение жира в хроматографических пятнах денстометром путем измерения оптической плотности пятна и фона вокруг него. Затем из плотности фона вычитают онтическу1о плотность пятна, полученную разность умножают на коэффициент пересчета и узнают количество жира в липидном спектре исследуемой крови. Коэффициент пересчета выводят по данным калибровки стандартного раствора холестерина.

1. Способ определения липидного состава биологических жидкостей путем экстракции

15 липидов и хлороформметаноловой смесью и разделения экстракта на сорбционной смеси хроматографически в закрепленном тонком слое, отличающийся тем, что, с целью уменьшения количества анализируемого суб20 страта и ускорения анализа, липиды экстрагируют хлороформ мета ноловой смесью из цельной крови в соотношении 50: 1, а количественный денситометрический анализ проводят непосредственно на хроматограммах.

25 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью увеличения прочности и улучшения качества тонкого слоя, к сорбционной смеси добавляют 2%-ный раствор крахмала.