Способ определения форм растений
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
< 1 528066
Союз Советских
Социалисти1еских
Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 27.08.74 (21) 2055033/15 с присоединением заявки № (23) Приоритет
Опубликовано 15.09.76. Бюллетень № 34
Дата опубликования описания 20.10.76 (51) М. Кл. - А 01Н 1/04
Государственный комитет
Совета Министров СССР ло делам изобретений и открытий (53) УДК 58.002: 631. .52 (088.8) (72) Авторы изобретения
А. Г. Холодов и Г. A. Василевская
Белорусский научно-исследовательский институт земледелия (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОРМ РАСТЕНИЙ
Изобретение относится к биохимическому анализу белков для определения форм растений путем диск-электрофореза в гелевом носителе и может быть использовано в сельскохозяйственной и лесной селекции.
Известны способы биохимического определения сортовой принадлежности по электрофоретическим спектрам белков в гелевом носителе с последующим сравнением электрофореграмм испытуемых и эталонных образцов. Такие способы основаны на анализе отдельных фракций белков, преимущественно спирторастворимых, с использованием крахмального геля.
Анализ спирторастворимых фракций белков (глиадинов) имеет существенное значение в основном только для пшениц. Продолжительность анализа указанного метода составляет 6 — 8 час и требуется приготовление вытяжек спирторастворимых белков. Кроме того, крахмальный гель обладает плохой воспроизводимостью и малой разрешающей способностью.
Цель изобретения — повышение разрешающей способности, сокращение продолжительности и упрощение процесса.
Поставленная цель достигается тем, что диск-электрофорезу подвергают суспензию муки в трис-глитвиновом буфере. Способ основан íà том, что каталитически активные белки в большинстве своем относятся к легкорастворимым кислым белкам (70 — 800, общей суммы белков) и являются самыми многокомпонентными.
5 Электрофорез суспензии муки проводят в полиакриламидном геле в виде стержня предпочтительно длиной 100 и диаметром G мм при градиенте напряжения 60 В/см, плотности тока 18 мА/см - в течение 1 час.
)0 На фиг. 1 приведены схемы электрофореграмм различных видов растений.
Из приведенного видно, что каждый внд имеет определенный электрофоретический спектр белков наряду с видовыми признака15 ми имеются признаки, общие для семейства.
Так, семейство зерновых (рожь, пшеница, ячмень) имеет общие диски с R; 0,06+0,02;
0,12; 0,25+0,02; 0,37; 0,43+0,02. Семейство бобовых (бобы, вика, горок) имеет общие диски
20 с Ry 0,31; 0,35+0,02; семейство сосновых (сосна, кедр) — 0,07, 0,27+0,02, 0,33. Для сравнения приведена схема электрофоретического спектра яблони.
Проведенные исследования показали, что
25 способ диск-электрофореза суспензии муки позволяет решать ряд практических задач селекции и семеноводства сельскохозяйственных растений, в том числе проводить идентификацию сортов; устанавливать практическое
30 наличие гибридного материала в F> (по зер528066 о,пв
0,06
О об
П,ов о 12
usa и, 1z и, 16
0,07 и07
0,В
0,7В
027
О30
033
О 12
О 16 п, в
0,25
0 гв
0,37
П. 32
О, 79
0,2i
0,25
П 27 о,г7
0,25
0,3 037 озз
025
0. 25
0,ã ол
0,37
09.0 п,м ог8 п,л
037
0 7
0,4Ä
057
0,З
036
0,37
О95
Oo7
037
0,О9
06
050
050
057
053
057
0,60
065
0,50
0,5и
060 обг
0,5о
056
056
063
Р,бб
0,6/ огг
0,/5
ОВ7
0 65 о 25
Сосно Вблоня /бежар гам avo
%нению
Фос < ну); устанавливать доминантность сорта при скрещивании, характер наследования свойств родительских форм гибридами; устанавливать наличие мутантных форм.
В связи с тем, что диск-электрофорезу подвергают суспензию муки, практически исключены потери материала при переносе, благодаря чему способ позволяет использовать малые количества испытуемого материала при хорошей воспроиз вод имости, быстроте и простоте выполнения анализа.
Пример. Определение формы растения.
На фиг. 2 приведены электрофорепические спектры известных сортов ржи и неизвестного (Х).
Для идентификации неизвестного образования озимой ржи составляют атлас электрофоретичесиих спектров известных сортов ржи.
Затем готовят суспензию муки из зерна неизвестного сорта и подвергают ее электрофорезу в цилиндрах полиакриламидного геля, имеющих длину 100 и диаметр 6 мм, при градиенте напряжения 60 В/см и плотности тока 18 мА/см в течение 1 час. Полученные электрофоретические спектры суммарного белка сопоставляют с электрофоретическими
5 спектрами белков известных сортов.
Неизвестный сорт является гибридом Вятки 2 и Харьковской 60.
Формула изобретения
1. Способ определения форм растений, включающий диск-электрофорез белков в гелевом носителе и сравнение электрофоретических спектров испытуемых и эталонных об)5 разцов, отличающийся тем, что, с целью повышения разрешающей способности, сокращения продолжительности и упрощения процесса, диск-эле ктрофорезу подвергают суспензию муки в трис-глициновом буфере.
2о 2. Способ по и. 1, отличающийся тем, что геле вый носитель — полиакриламидный гель используют в виде стержня.
528066
0О5 д,М
012
О05
0,0б
010 а 10
0, 12
0, 10
o,1г
gzg
o,1г
0,17
0,20
О,17 о,го
0 17
0,21
0,25
026
061
036 аз7
0ui огО
gzg
025
02
O,55 азо озг
0,31 о,зз о,uO доз о,u6 ,и7
0,и7
0u6 а 71
О,u7 а5o
0,55
О62 о,бб або
О,56
061 065
66
0,71 а75,бб ,6О бб
69
69
7З
0,76
О,79 айвз вг,«арьиьйсла.е 60 бамДр ка 8ойниняй приекульекоя 59рднд2 .оайаба 4cr cmw Ги5ридиае г
Составитель М. Федоров
Техред 3. Тараненко
Корректор Л. Брахнина
Редактор Е. Хорина
Ти аж 723 Подписное
Заказ 2185/17 Изд. № 1660 Р . ов СССР
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 ол
О57 оог
009
О50
0,60
092
О69
0,72
gag о,зг оз»
057 о,uz
Обо„
05O044
О,бо
Оба
Oб7
0,70
g, 75
0,79 о,бо
ОЗ9 аз7 о.ug
Ои2 а49
053
0,60
0,62
0,66
0 69
0,7З
0. 76
0,20
025 азо азб озб ом
Окко
0,50
0,55
0,60
0,64
066
0,2О
0.25
О50 оз9 азб аи1
gu5
О,6О
0,6е
066 абб
074
07О
