Способ получения 2-замещенного-4(р)-гидроксициклопентан1,4- диона

Авторы патента:

C12D13 - Биохимия; пиво; алкогольные напитки; вино; уксус; микробиология; энзимология; получение мутаций; генная инженерия

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К 0АТЕааТУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11)520826 (61) Дополнительный к патентувЂ” (22) Заявлено09.12.74 (21) 2085735/13 (23) Приоритет вЂ” (32) 10.12.73 (31) 423257 (33) США (43) Опубликовано05.07.76.Бюллетень № 25 (45) Дата опубликования описания 29.09.76 (51) М. Кл.

<12 Il 13/00

Государствеиный комитет

Совета Министров СССР по делам изооретеиий и открытий (53) УДК 615.361 (088.8) Иностранцы

Лунг Тинг Чанг (Китай) и Кэрол Энн Терри (США) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма

Майлз Лабораториз, Инк (США) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 2ЗАМЕЩЕННОГО-4 (g)»

-IHQPOKCHUHKJIOIIEHTAH-1,4-ДИОНА

Изобретение относится к области микробиологии.

Известен способ получения 2-замешенного-4 (3 ) -гидроксициклопентан-1,4-диона путем микробиологической трансформации 2замешенного-циклопентан-1,3,4-триона или

2»замешенного-3-метоксициклопент-2-ен-1,4-диона с помощью культуры класса

AscomVcetes на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные со- Ip ли, с последующим выделением целевого продукта.

Недостатком известного способа является невысокий выход целевого продукта.

С пелью повышения выхода целевого про-1ч дукта предлагается трансформацию проводить на среде с начальной концентрацией углеводов 2-6% и рН 5-6, поддерживая в процессе выращивания концентрацию углеводов 0,1-1% и рН 4-5 и добавляя субстрат 20 в среду со скоростью 0,04-0,1 r/÷àñ на

1 л среды.

При проведении процесса в указанных условиях конверсия микроорганизма на стадии ннкубации и скорость конверсии c TpGT& 25 повышаются в 2-3 и 2-5 раз соответственно.

Пример 1. Для ннкубации микроорганизма и конверсии субстрата используют питательную среду, содержащую (г/л воды):

Цитрат натрия С H COH)(COONa) 3,0

3 4

Дигидрофосфат калия КК 30 5,0

Нитрат аммония ЯН NO> 2,0

Сульфат магния Mg 50 ° 7Н 0 0,2

Хлорид кальция СО-61. ° 2Н О 0,1

Дрожжевой экстракт 5,0

Казаминокислоты 5,0

Глюкоза 40,0

Для инокулирования 50 мл среды, помещенной в колбу Эрленмейера на 250 мл, используют одно кольцо поверхностного нароста с однонедельного солодового экстракта косого arapa Dipodascvs vniauet.еа.tvso

Инокулирование проводят при 26-32 С и взбалтывании со скоростью 300 об/мин в течение 36 час. Затем полученную массу, содержащую 5% вещества, переливают в колбу Фернбаха емкостью 2,8 л, содержащую

1 л указанной выше питательной среды, и инкубируют 24 час. После образования Й25%

520926

Составитель С. Малютина

Редактор Т. Шарганова Техред И. Ковач Корректор Д. Мельниченко

Заказ 4886/185 Тираж 551 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 вещества в колбу Фернбаха в течение Здней через каждые 8 час добавляют 400 мг 2I

-(6 -карбометоксигексил) -пиклопентан-1, 3, 4-триона. В ходе конверсии с помощью 1 М

КН РО поддерживают рН среды 4,2-4,5.

Концентрацию глюкозы поддерживают равной

0,1-0,47 путем порционной загрузки глз» козы. В ходе конверсии периодически отбирают пробы, обрабатывают 0,5 объемаэтилацетата, суспендируют осадок в ацетоне и хроматографируют на силикагеле, элюируя системой из 110 мл этилацетата, 50 мл изооктана и 20 мл уксусной кислоты и проявляя в УФ-свете. Через 72 час послепервого добавления субстрата клетки отфильтро)6 вывают, верхний слой сатурируют хлоридом натрия, подкисляют соляной кислотой до рН 2,0 и экстрагируют 1 объемом этилацетата. Экстракт выпаривают досуха, перекристаллизовывают остаток из смеси этилацетат-петролейный эфир и получыд 2,8 г продукта, т. е пл. 80-86 С; (б) =- +20,3 (хлороформ) .

Пример 2. 9 л среды того же состава, что и в примере 1, помещают в ферментер объемом 14 л, инокулируют культу% рой 21 ОИФВсчля ш 1пОсЕ80Я 5 выращенной за 24 час в колбе Фернбаха емкостью 2,8 л. Ферментацию проводят при о

ЗО С, аэрации 5 л/мин воздуха и взбалтывании со скоростью 300 об/мин. Для регулирования пенообразования используют антивспениватель. После инкубации в течение

24 час в порошок через каждые 8 час в течение 72 час добавляют 4 г 2-(6-карбометоксигексил) -циклопентан-1, 3, 4-триона.

В ходе конверсии поддерживают рН cpeluu

4,2-4,5 с помощью 1 М К Щ а кон т центрацию глюкозы, равной 0,1-0,49о путем порционной загрузки глюкозы. Через

72 час после первого добавления 2-(6-карбометоксигексил) -пиклопентан-1, 3,4гриона клетки отделяют и выделяют 2-(6вЂ”

-карбометоксигексил) -4 (2 ) -гидроксициклопентан-1,4-дион. Выход после перекристаллизаууи 25,0 г т.пл. 89,5-91,0 С;

Г Ы 1 = +19,1 (хлороформ).

Формула изобретения

Способ получения 2 замешенного-4-(3 )-гидроксициклопентан-1,4-диона путем микробиологическойй трансформации 2-замешенного-циклопентан-1, 3,4гриона или 2-замешенного-3-метоксициклопент-2-ен-1 4-диона с помощью культуры классаАасольсе еэ на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим выделением целевого продукта, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, трансформацию проводят на среде с начальной концентрацией углеводов 2-6% и рН 5-6, поддерживая в процессе выращивания концентрацию углеводов 0,1-1% и рН 4-5 и добавляя субстрат в среду со скоростью 0,04-0,1 r/÷àñ на 1 л среды.