Способ определения устойчивости растений хлопчатника к вилту

511917

Источники ДНК

Активность, Uerticillium clahIiae (гриб)

Sep. Mexicanum

l0 Ташкент-1

108-Ф

100

5,1

32,0

58,0

63,3

С-4727

Формула изобретения

Составитель Л. Марченкова

Текред 3. Тараненко Корректор А. Степанова

Редактор А. Купрякова

Заказ 1251/14 Изд. № 1296 Тираж 723 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Раушская наб., д. 4/5

Типография. пр. Сапунова, 2

Для выделения меченной ДНК гриба в

100 г культуральной массы вносят 2 мг пред,цествецника биосинтеза нуклеиновых кис:IoT — — тимен С" и выращивают в культуральной среде путем встряхивания в 5%-ном растворе сахарозы в течение 24 час. Получают

ДНК активностью 6000 — 7000 имп/мин на мг

ДНК. Далее проводят молекулярную гибридизацию ДНК, выделенной из хлопчатника с меченной ДНК-С" гриба, Для этого ДНК хлопчатника и меченную ДНК-C 4 гриба в соотношении 100: 1 растворяют в 0,12 М натрийфосфатном буфере с рН 6,8 и озвучивают при помощи ультразвукового диспергатора типа УЗДН-1 два раза в течение 3 мин (35 кгц, 0,8 а), денатурируют при 100 С в течение 10 мин и инкубируют в термостате при

60 С в течение 24 час. Затем смесь охлаждают льдом и разделяют на две равные части, одну из которых осаждают 5%-ной ТХУ (трихлоруксусной кислотой), а вторую часть доводят до 4 объемов ССР и наносят на миллипоровые фильтры размером 15 мм. Далее фильтры промывают под вакуумом 4 — 5 раз

10 мл раствора 0,003 М трисбуфера, рН 9,2, до исчезновения радиоактивности в истекающем растворе, После этого фильтры высушивают при комнатной температуре и измеряют их радиоактивность на счетчике типа ПСТ-100 с эффективностью 6 — 8%.

Расчет активности каждого фильтра проводят, принимая за 100 /, активность той части

ДНК, которую осаждают 5%-ной ТХУ.

Полученные результ:.1ты представлены в таблице.

15 Как видно из таблицы, процент гибридизации ДНК хлопчатника с ДНК-С 4 вирулентного гриба зависит от степени вилтоустойчивости растения, и по мере снижения вилтоустойчивости процент гибридизации увеличивается.

Способ определения устойчивости растений

25 хлопчатника к вилту, включающий тестирование их на Verticillium dahliae, отл ич а юшийся тем, что, с целью ускорения процесса определения и повышения его точности, из растений хлопчатника, взятых в фазе пророст30 ков, выделяют ДНК и проводят ее гибридизацию с ДНК-С ", выделенной из Verticillium

dahliae и по степени гибридизации судят об их устойчивости.