Способ получения антисоматотропной сыворотки

О П И C А" Н И--Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

i|11 460647

Союз Советских

Сакнллнстнческнк

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 06.12,72 (21) 1854666/31-16 с присоединением заявки № (51) М. Кл. А 61k 23/02

Совета Министров СССР оа делам изобретений и открытий (53) УДК 615.373(088.8) Опубликовано 25.07.75. Бюллетень № 27

Дата опубликования описания 11.02.76 (72) Авторы изобретения

А. Ф,. Лазарев, В. Д. Никитин, В. И. Трубицина и

А. Д. Иньков

Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова и Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П. А. Герцена (71) Заявители (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИСОМАТОТРОПНОЙ

СЫВОРОТКИ

ГосУдарственный камнтет (32) Пр оритст

Изобретение относится к области медицинской промышленности, а именно к производству антигормональных сывороток.

Известен способ получения антисоматотропного гаммаглобулина путем иммунизации лошадей микродозами гормона роста человека, получения сыворотки, очищения активной фракции высаливанием с последующим ферментативным гидролизом при рН 3,1 — 3,8, обработки диализата хлороформом и дополнительным очищением на сефадексе.

Однако известный способ не обеспечивает высокой активности сыворотки.

С целью повышения активности сыворотки проводят гипериммунизацию животных убывающими дозами.

Способ получения антисоматотропной сыворотки осуществляется следующим образом.

Продуценты — лошади в возрасте 4 — 8 лет.

Подготовительный цикл иммунизации состоит из 3 — 5 инъекций антигена с интервалом в

1.0 дней. Антиген (высокоочищенный человеческий гормон роста в смеси с адъювантом) вводят подкожно не более 2,5 мл в одно место, с поочередным вовлечением в иммунигенез региональных лимфатических узлов.

По окончании подготовительного цикла в пробе сыворотки крови определяют титр антител и, если содержание антигормональных флокуляционных единиц превышает 250

АФЕ/мл, продуцентов кровопускают 2 раза по 5 л и переводят под гипериммунизацпю.

Гипериммунизацию проводят путем 1 — 3 инъекций антигена с интервалом в 7 дней, прп наличии высокого титра антител лошадей кровопускают спустя 7 — 9 дней после последней инъекции антигена.

Из 140 — 145 л иммунной крови получают сепарированием примерно 100 л цитратной

10 плазмы или 85 л сыворотки.

К 100 л иммунной плазмы добавляют 5 л

5%-ного раствора фенола для консервации и плазму сохраняют в камере при 4 — 10 С до начала ее очистки, но не более 5 суток.

15 Очистку начинают, добавляя к 105 л консервированной плазмы сухой стерильный сернокислый аммоний, из расчета 240 г/л, размешивая смесь до полного растворения соли.

При этом происходит выпадение в осадок

20 глобулинов, которое полностью заканчивается через 5 — 12 час выдержки. Осадок отфильтровывают, отжимают под прессом. Для дальнейшей очистки и конденсации пммунных глобулинов отжатый осадок растворяют в стериль25 ной апирогенной дистиллированной воде до объема 100 л. К раствору добавляют еще

150 л воды 20 мл 2,2 н. НС1 и 756 r медицинского пенспна без наполнителя. Ферментатпвный гидролиз глобулинов продолжается 1 час

30 при температуре 20 — 24 С и рН 3,3 — 3,4. По460647

Составитель С. Малютина

Текред 3. Тараненко

Корректор И. Позняковская

Редактор Н. Хлудова

Заказ 79/5 Изд. М 59 Тираж 559 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, OI(-35, Раугпская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 сле чего рН раствора поднимают 2,5 н. едким натрием до 4,2 и гидролиз продолжают еще

1 час. По окончании ферментации к раствору при рН 4,3 — 4,4 добавляют 140 г/л сернокислого аммония и смесь прогревают при 5б C в 5 течение 45 мин для термоденатурации и осаждения лабильных белков. Образовавшийся осадок отделяют фильтрованием.

Прозрачный фильтрат доводят б и. едким натрием до рН б,б — 7,2 и активные иммуно- 10 глобулины выделяют сернокислым аммонием, доводя его концентрацию в растворе до

340 г/л. Осадок иммунных глобулинов собирают фильтрованием, прессуют и диализируют 48 час против водопроводной воды. Полу- 15 чаемый диализат, объемом 7 — 8 л и концентрацией белка 18 — 19%, подвергают дополнительной очистке с помощью хлороформа.

При комнатной температуре к диалпзату добавляют 2,1 — 2,4 л хлороформа, смесь пере- 20 мешивают и помещают в холодильную камеру с температурой плюс 5--6 Ñ па !8- — 24 час прп периодическом интенсивном перемешиванпп. По истечении этого времени диализат подогревают до комнатной температуры и проводят изоэлектрическое осаждение остаточных балластных продуктов при рН 5,1 — 5,5 (по микропробс), 11одкисление проводят 1 н. соляной кислотой, пример o до 25 мл/л диализата.

Предмет изобретения

Способ получения антисоматотропной сыворотки путем многократной иммунизации животных, например лошадей, гормоном роста человека, выделения активной фракции, высаливанием с последующим ферментативным гидролизом, диализом и обработкой диализата хлороформом, отличающийся тем, что, с целью повышения активности сыворотки, проводят гипериммунизацию животных убывающими дозами.