Способ получения сухого эритроцитарного диагностикума для выявления видоспецифических антиглобулинов

. с зйоко1 йтбнтно ует у %

ОП ИСАЙИ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ ni 455738

Соне Советскик

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 25.12.72 (21) 1864243/31-16 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 05.01.75. Бюллетень № 1

Дата опубликования описания 20.02.75 (51) M. Кл. А 611с 23/02

Госудорствеиимй комитет

Совета МииистРсв СССР оо делам изобретеиий и откпытий (53) УДК 615.372(088.8) (72) Авторы изобретения

В. М. Колотов и P. А. Пшеничнов (71) Заявитель

Институт экологии растений и животных (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУХОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО

ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИДОСПЕЦИФИЧЕСКИХ

АНТИГЛОБУЛИНОВ

Изобретение относится к методам медицинской диагностики.

Известен способ получения сухих эритроцитарных диагностикумов путем иммунизации животных микробными антигенами с последующей сорбцией полученной иммунной сыворотки на эритроцитах, фиксированных акролеином и обработанных например, танином.

Для повышения специфичности диагностикума предлагается на эритроцитах сорбировать взятые в зоне сенсибилизирующей активности иммуноглобулины, полученные при иммунизации животных гетерогенными эритр оци та м и.

Способ приготовления сухого эритроцитарного диагностикума для выявления видоспецифических антиглобулинов осуществляют следующим образом. Кровь, эритроциты которой используют для иммунизации животного, забирают в необходимом количестве в стерильный флакон со стеклянными (металлическими) бусами и дефибринируют встряхиванием в течение 15 мин. Дефибринированную кровь отделяют от сгустка фибрина фильтрованием через три слоя марли и центрифугированием в течение 15 мин, разделяют на два слоя: верхний — сывороточный, который декантируется и выбрасывается, и нижний— форменные элементы крови (в основном, эритроциты) .

Эритроцитарный осадок трижды промывают 10-кратными объемами физиологического раствора центрифугированием (при

2000 об/мин в течение 15 мин), а затем фиксируют акриловым альдегидом (акролеином) .

Для этого к измеренному осадку эритроцитов добавляют фиксатор (акролеин на физиологическом растворе) в соотношении 1: 20. Концентрация акролеина при этом составляет для

1о эритроцитов млекопитающих (обезьяны, лошади, быка, барана, собаки, козы, кошки, кролика, морских свинок, белых крыс, белых мышей и др.) и человека — 0,4 /о с экспозицией в 30 мин при комнатной температуре. Эритро15 циты птиц (кур, гусей, голубей) фиксируются

0,3о/о-ным раствором акролеина в течение

20 мин при комнатной температуре.

После фиксации эритроцитарный осадок трижды отмывается от акролеина 10-кратными

20 растворами физиологического раствора (при

2000 об/мин по 3 мин) .

Зафиксированные и отмытые эритроциты могут храниться в рефрижераторе (при температуре + 4 С) в виде 10о/о-ной взвеси на

25 физиологическом растворе или подвергаться лиофильному высушиванию.

Иммунизацию животных, сывороточные глобулины которых предполагается сорбировать на эритроцитах, проводят циклом, состоЗО ящим из трех инъекций с интервалом двое су455738

Предмет изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор Т. Каранова Техред А. Камышникова

Корректор Н. Лебедева

Подписное

Заказ 625/! Изд. Ме 275 Тираж 559

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 ток. Доза осадка эритроцитов на одну инъекцию составляет 0,5 мл на 1 кг веса животного при внутривенном введении. Перед каждой инъекцией необходимое количество жидких (10 /о ) эритроцитов осаждается центрифугированием, а затем ресуспендируется в стерильном физиологическом растворе в соотношении 1: 3. При использовании для иммунизации сухих эритроцитов необходимое количество ампул разводят в таком же соотношении стерильным физиологическим раствором.

На пятый — седьмой день после заключительной инъекции у животного забирают 2—

3 мл крови, сыворотка которой титруется (двукратное разведение с 1: 20 до 1: 10240 в объеме 0,5 мл) 0,5 /о-ной взвесью фиксированных (регидратированных сухих) одноименных с вводимыми эритроцитов (по 0,5 мл). При отсутствии таких эритроцитов они могут быть заменены эритроцитами другого вида животного или птицы. Величина гемагглютинирующего титра 1: 320 и выше является показателем достаточно высокой активности полученной сыворотки. Затем проводят массивный забор крови у этого животного, сыворотку крови разливают в стерильные ампулы по

0 5 — 1 мл и лиофильно высушивают по режиму сывороточных препаратов.

Перед приготовлением эритроцитарного видоспецифического глобулинового диагностикума определяется гемагглютинирующий титр высушенной сыворотки с эритроцитами, которые составят клеточную основу будущего препарата. Рабочей дозой для сенсибилизации эритроцитов является следующие за гемагглютинирующим титром второе — третье разведения сыворотки, в которых эритроциты уже не агглютинируют. Готовят смесь, состоящую из необходимого количества эритроцитов в виде 2%-ной взвеси их на физиологическом растворе и равного объема сыворотки, взятой в концентрации, соответствующей второму за гемагглютинирующим титром разведению. Смесь выдерживают при температуре

37 С в течение 30 мин, после чего эритроциты осаждают центрифугированием и один раз отмывают 10-кратным объемом физиологического раствора.

10 Полученный осадок сенсибилизированных глобулинами эритроцитов взвешивают в сахарозо-белковом наполнителе (сахарозы 15%, мясопептонного бульона или любого из испытанных стандартных белковых кровезамени15 телей — желатиноля, протеина, казеина

30 /о на дистиллированной воде) до 50%-ной концентрации, и полученную взвесь разливают в 6-миллилитровые ампулы по 1 мл. Ампулы после энергичного встряхивания замора20 живают при температуре — 50 С, лиофильно высушивают по режиму сушки сывороточных препаратов и запаивают.

Перед использованием ампулу с препаратом вскрывают, содержимое разводят в 10 мл

25 физиологического раствора с получением 0,5 7о рабочей взвеси диагностикума.

30 Способ получения сухого эритроцитарного диагностикума для выявления видоспецифических антиглобулинов путем сорбции иммуноглобулинов на фиксированных акролеином эритроцитах с последующей лиофилизацией, 35 отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности диагностикума, на эритроцитах сорбируют взятые в зоне сенсибилизирующей активности иммуноглобулины, полученные при иммунизации животных гетеро40 генными эритроцитами.