Способ определения количества гаптоглобина в сыворотке крови

О П и с А н И Е (11) 455278

ИЗОБРЕТЕН Ия

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 22.11.72 (21) 1848813/31-16 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 30.12.74. Бюллетень № 48

Дата опубликования описания 1i.02.75 (51) Ч. Кл. G 01п 33/16

Государственный комитет

Совета Министров СССР (53) УДК 519.25:576. .31 (088.8) Il0 делам изобретений и открытий (72) Автор изобретения

В. И. Щеняцкий

Актюбинский государственный медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ГАП10ГЛОБИНА

В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Изобретение относится к области медицины.

Известен способ определения гаптоглобина в сыворотке, полученной из негемолизированной крови, и основанный на том, что в сыворотку добавляют различные количества гемоглобина, проводят электрофоретическое разделение с последующим спектрофотометрическим определением минимального количества гемоглобина, обеспечивающего полное насыщение имевшегося гаптоглобипа, и по полученному значению рассчитывают искомую величину.

Однако известный способ является трудоемким и требует большого расхода исследуемого материала и реактивов.

Для упрощения определения и повышения чувствительности по предлагаемому способу взятую кровь гемолизируют до полного насыщения гаптоглобина гемоглобином с последующим электрофорезом полученной сыворотки и спектрофотомстрическим определением количества связанного гемоглобина известными приемами.

Способ определения количества гаптоглобина в сыворотке осуществляют следующим образом.

В центрифужную пробирку помещают 4—

5 мл крови. Полихлорвиниловой палочкой, соединенной через резиновую трубочку с осью якоря электромоторчика, производят механическое разрушение эрптроцитов в течение

12 мин, а затем цснтрифугируют при

300 об/мин в течение 7 мин. Сыворотку кро5 ви, насыщенную гемоглобином, в количестве

0,4 мл вносят в стартовый желобок агарового геля. Стартовый желобок готовят путем погружения на глубину 5 мм в горячий раствор агара стеклянного штамма толщиной 1,4 мм

10 и длиной 65 мм. 1 0-ный агаровый гель готовят на боратном буфсре путем смешивания

0,5 М раствора борной кислоты, 0,2 М раствора едкого натра и дистиллированной воды в объемных отношениях б: 3: 1. Этим же бу)S фером заполняют электрофоретические ванны. Агаровый гель непосредственно соединяется с электродным раствором. Электрофорез ведут в течение 10 час при напряжении 100 в.

По окончании электрофореза гемоглобин-гаитоглобиновая фракция располагается ближе к старту. Кусочек агарового геля, содержащий гемоглобин-гаптоглобиновую фракцшо, переносят в мерный цилиндр и доводят объем содержимого буферным раствором до 20 мл.

Г1олученную смесь переносят в гемогенизатор и измельчают в течение 12 мин. Гемогенат центрифугируют в течение 5 мин при

9000 об/мин. Супернатантную жидкость переносят в кювету и спектрофотографируют на

30 регистрирующем спектрофотометре СФ-10

455278

С н — АР,389,7, Составитель С. Малютина

Редактор Н. Суханова

Техред Г. Дворина Корректор Н. Лебедева

Заказ 241/16 Изд. № 1996 Тираж 651 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Я-35, Раугпская наб., д. 4/6

Типография, пр. Сапунова, 2 против такой же кюветы с дистиллированной водой. На полученной спектрофотограмме измеряют высоту пика и зону Сорэ в миллиметрах. По калибровочной кривой, построенной по результатам измерений высоты пиков в зоне Сорэ стандартных растворов гемоглобина, определяют количество гемоглобина, связавшсгося с гаптоглобином исследуемой порции сыворотки.

При вычислении молекулярный вес гаптоглобина принимают равным 10б000, а молекулярный вес гемоглобина равным 68000.

Расчет количества гаптоглобина проводят по формуле где Снр — количество гаптоглобина в 100 мл сыворотки;

А — количество гемоглобина (мг) в

0,4 мл исследуемой сыворотки.

Предмет изобретения

Способ определения количества гаптоглобпна в сыворотке крови путем электрофореза с последующим спектрофотометрическим опре10 делением гаптоглобина по величине гемоглобина в гемоглобин-гаптоглобиновом комплексе, отличающийся тем, что, с целью упрощения определения и повышения чувствительности, кровь предварительно гемолизиру16 ют до полного насыщения гаптоглобина гемоглобином.