Способ разделения полиэлектролитов

392627

Союз Советских

Социалистических

Республик 11ИСАНИБ

NaOs»erzs gq

К ПАТЕНТУ

Заявлено 21.Х11.1970 t 3» 1600636/23-4) М.Кл. С 07 > 7/00

В Olj 15/08

Приоритет 22.Х11.1969, № 17721/69, Швеция

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР оо делам изобретений и открытии

Опубликовано 27.VIL1973, Б)оллетспь № 32

УДК 543.544.4 (088.8),) ),fl TH о1)у (),л)и< оп я!)пя On IIC0 I I II B

А)5 гор ы

l f. 5o() 1.)(г(111151

Ипоетря и цы

Линда Фриклуид и

Джеркер Олоф Порат (Швеция) Иностранная фирма

«Эксплоатерингс Актиеболагет T. Б. Ф.» (Швеция) 1

" 1л ! ." i. ; I 1"))> »

3HBBHTC. f Ь

СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ПОЛИЭЛЕКТРОЛИТОВ

Зависимый оТ патента №вЂ”

Изобретение относится к способу разделения полиэлектролитов, таких как белки, пуклеиповые кислоты, пептиды или нуклеотиды, !(я амфотерных иопообмениых смолах. Использование последних для разделения некоторых классов соединений, например ионов металлов, хорошо известно. Однако известные до сих пор а IgoTepffble иопообмеи))ики 1)еэффе)(тивп!.! для разделения назвяшп)х выше классов полиэл ектрол итов. 10

B соответствии с изобретепием !lpcäëîæå11 способ разделения полиэлектролитоь, 1)япримср белков, нуклеиновых кислот, пептид()в. или пуклеотидов, заключающийся в том, что для разделения используют амфотер)(ые, гидрофильпыс Hoffoo6ifeff IIII !(lf, включающие одпоfspef>fef f 1 fo осповп ые (1зотсодер>кащис и кар ооксильпые или сульфогруппы, в которыx cooTïoшение основных и кислотпыx груllf! являетс>1 стехиометрически м. 20

В используемых с(тгласпо изобретению амфотерных иоиообменпиках з)атрицей служат, 1) апр имер, агар, сефадекс или целлюлоза, вследствие чего иопообменники хорошо пабуают в водных растворах, и разделяемые полиэлектролиты могут легкo проникать в полимерный гель. Этого пе происходит в амфотерных попообмеппиках, ранее примепявшихся для хроматографии. В качестве биполярных ионов з0 к матрице прпсоедиияют разлпч))ыми спосооНми аминокислоты илп пх производные.

Пример 1. Колонку (58,5Х1 с.)1) с сефадексом G-75, к которому присоединен с помощью бромциана Р-алании (около 0,75,иэкя

Р-аланииа па 1 г сухого веса), уравновешивают 0,12 М раствором ацетата аммония с рН 6,0 (рН раствора доводится до 6,0 добавлением уксусной кислоты). B колонку п(вмещают ) .и.1 раствора, содержащего 100 л(я яда кобры (Naja nigf icollis toxin), после чего колонку

f ðo)fûâàfoT аммопийацетатным буферным раствором. Лпалпз элюатя с колонки показал, чт ) яд кобры разделен пя шесть отд(льпых компоlie!IT

П р и ме р 2. Колопку (44,5 Х 1 сл() с целл)олозой, к которой с помощью эппхлоргпдрпн» присоединен глицин (около 0,2 1(экв глиципа па 1 г сухого веса), уравповешивают 0,02 М пиридипацетатным буфером с рН 5,0. В колонку помещают 1 >1!г смеси олиголизипов (Ll — Llp) и колонку промывают пиридинацетатпым буфером с рН 5,0 так, что конечная концентрация уксусной кислоты 0,15 М. Элюат анализировали с помощью ииигидринового реактива.

На кривой элюции видно десять четко разделенных компонент, соответствующих лизину, дилизину, трилизину и т. д.

Пример 3. Колонку (37,1Х1,4 c,f!) с агарозой (6% агарозы и 94% воды), к которой с

392627

CocTBBIITcëü В. Пастухова

Техрсд Л. Богданова

Рсдактор Л. Герасимова

Корректор Е. Хмелева

Изд, Мз 1871 Тираж 523

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, )К-35, Раушская наГ., д. 4/5

Заказ 6001

Подписное

Загорская типография

3 помощью бромциана присоединен аргинип (0,248 макв аргинина на 1 г сухого веса), уравновешивают 0,01 М трис-НС1 буферным раствором с рН 7,5. В колонку помешают 25 иг продукта неполного ферментативного гидролиза ДНК из вилочковой железы теленка, растворенного в 5,ил буферного раствора. Адсорбированные нуклеиновые кислоты элюируют н линейном градиенте буферных растворов:

250 лл исходного и 250 нл раствора, 1М относительно уксусной кислоты и 1М относительно хлористого натрия. Получены четыре фракции при соответствующих объемах, равных 66,3;

76,5; 98,1 и 107,1 ил.

Предмет изобретения

1. Способ разделения полиэлектролитов, 4 таких как белки, нуклеиновые кислоты, пептиды или нуклеотиды, путем хроматографии на амфотерных, гидрофильных ионообменниках, отличающийся тем, что, с целью увеличения

5 эффективности разделения, используют ионообменники, включающие одновременно основные азотсодерткащие и карбоксильные нли сульфогруппы, в которых соотношение основных и кислотных групп является стехиометрическим.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют ионообменники, матрицей которых являются полиакриловая кислота, полиакриламид, декстран с поперечными связями, агар

1о или Целлюлоза.