Способ количественного определения триглицеридов
37I734
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
Союэ Соеетскик
Социалистических
Республик
Зависимый от патента №
М. Кл. G 01п 33/16
Заявлено 23.XI I.1970 (№ 1607102/31-16)
Приоритет 02.I.1970, № P 2000127,8, ФРГ
Опубл иковано 22.ll.1973. Бюллетень № 12
Комитет пс делам иаобретений н открытий прн Совете Министров
СССР
УДК 612.123(088.8) Дата опубликования описания 12.IV.,1973
Авторы изобретения
Иностранцы
Харальд Шторк и Феликс Хельмут Шмидт (Федеративная Республика Германии) Иностранная фирма
«Берингер Маннхайм ГмбХ» (Федеративная Республика Германии) Заявитель
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ТРИГЛИЦЕРИДОВ
Изобретение относится к области медицинской биохимии, а именно к способам количественного определения триглицеридов.
Известен способ определения триглицеридов в сыворотке крови путем расщепления 5 жиров гидролизом, определения жирных кислот, общего холестерола и фосфолипидов, Однако такой способ не позволяет получить достаточно точные и надежные результаты определения триглицеридов в жидкостях орга- 10 низма, например, в сыворотке крови.
Целью изобретения является уточнение и упрощение методики определения триглицеридов.
Достигается это тем, что липопротеиды и 15 не содержащие протеинов нейтральные жиры расщепляют посредством полученной из
Rhizopus arrhizus липазы и полученный в качестве продукта расщепления глицерин определяют известным способом. 20
Пример 1. 10 л сыворотки человеческой крови смешивают по очереди со следующими реактивами:
1,5 мл буферного раствора триэтаполамина (0,1 М с величиной рН 7,6, содержащего 25
НАДХ (0,12 ммоль) и сульфата магния (0,74 ммоль);
0,1 м г соли фосфоэнолпировиноградной натрий-кислоты (4,8 ммоль) и аденозинтрифосфата (1,3 ммоль), растворенного в буферном 30 растворе триэтаноламина (0,1 M) с рН 7,6;
0,2мл липазы из Rhizopus arrhisus (4мг/мл) (3,500 ед./мг = 14.000 ед./мл);
0,005 мл лактатдегидрогеназы (900 ед./мл) (пируваткиназы 150 ед./мл).
Полученный таким путем раствор через
5 мин подают в кювету и определяют экстинкцию при 366 нм (Е1). Благодаря добавке
0,005 лил глицерокиназы (85 ед./мл) происходит ферментная реакция, которая ведет через соль пировиноградной кислоты с уменьшением
НАДХ к НАД (ни котин амид-аденин-динуклеотид). Через 10 мин считывают второй коэффициент экстинкции (Е2) . Из разности экстинкций AE=Ei — Е2 получают содержание триглицерида по следующей формуле
ЛЕ >(4224 = мг /о триглицеридов
Пример 2. 2,5 мл водного буферного раствора следующего состава (мг): триэтаноламингидрохлорид 65, тригпдроксиметиламинометан 25, динатриевая соль аденозитрифосфата 1,25, сульфат магния (MgSQ )(7НаО)
1,25,— смешивают с таблеткой, содержащей (мг): НАДХ 4,5, фосфоэнолпировиноградная натрий-кислота 6,0, глицин 58,8, хлорид калия
14,8, поливоск 6000 4,4. После растворения таблетки подготовленный таким образом рабочий раствор вводят в кювету и смешивают с 20мл сыворотки и 30 мл ферментной смеси, 371734
Составитель T. Головина
Техред Е. Борисова Корректор О. Тюрина
Редактор Н. Спиридонова
Заказ 926/16 Изд. № 1237 Тираж 755 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 состоящей из лактатдегидрогеназы, пируваткиназы и глицерокиназы.
По окончании предварительной реакции определяют экстинкцию, смесь смешивают с
20 мл липазы из Rhizopus arrhizus и вычисляют из второго коэффициента экстинкции триглицерида, как описано в примере 1.
Предмет изобретения
Способ количественного определения триглицеридов, связанных с липопротеинами, и не содержащих протеипов нейтральных Жиров в растворах, например, в жидкостях организма, путем фермеьтативного расщепления жиров, от.гичающийся тем, что, с целью уточне5 ния и упрощения методики, липопротеиды и не содержащие протеинов нейтральные жиры расщепляют посредством полученной из
Rhizopus arrhizus липазы и полученный в качестве продукта расщепления глицерин опре10 деляют известным способом.
