Патент ссср 352176

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

G01N1/38 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

352I76. Союз Соаетских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

М, Кл. G Oln 1/28

Заявлено 26.Х.1970 (№ 1492692/31-16) с присоединением заявки ¹

Приоритет

Опубликовано 21.IX.1972, Ьюллетень ¹ 28

Дата опубликования описания 11.Х.1972

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Мииистрое

СССР

УД К 616.008.9-092.18 (088.8) Автор изобретения

Д. Ф. Глузман

Киевский научно-исследовательский институт экспериментальной и клинической онкологии

Заявитель

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВНУТРИКЛЕТОЧНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ

ФОСФОДИЭСТЕРАЗЪ| II

Предмет изобретения

Изобретение относится к области гистохимии ферментов, в частности к способам определения внутриклеточной локализации фосфодиэстераз.

Известны способы определения внутриклеточной локализации фосфодиэстераз путем фиксации объекта в парах формалина, инкубации, промывки, обработки сульфидом аммония, сушки и микроскопирования.

Однако такие способы не позволяют определить внутриклеточную локализацию фермента фосфодиэстеразы II.

В предложенном способе в качестве субстрата используют витамин Вд, который вносят в инкубационную среду, что позволяет определить внутриклеточную локализацию фосфодиэстеразы II.

Для определения внутриклеточной локализации фосфодиэстеразы II свежеприготовленные и высушенные на солнце мазки крови или костного мозга фиксируют в парах

l0%-ного формалина в течение 3 мин и помещают в инкубационную смесь, содержащую:

5 мг витамина Вд, 0,05 мг змеиного яда;

12,5 мл 0,1 М веронал-ацетатного буфера (pH 6,75); 0,125 мл 0,4 М раствора нитрата свинца и дистиллированную воду.

Мазки и отпечатки инкубируют в термостатс при 37 С в течение 16 час, промывают дистиллированной водой и погружают на

2 мин в разведенный сульфид аммония. После промывки мазки сушат и микроскопируют.

В процессе обработки мазков фосфодиэстераза II вызывает гпдролиз молекул витамина

В, содержащегося в инкубационной смеси.

Образующиеся рибонуклеозид-3 -фосфаты расщепляются нуклеотидазой, являющейся дей10 ствующим началом диализированного и лиофилизированного змеиного яда, и остатки фосфорной кислоты связываются ионами свинца. Полученные соединения затем переводятся в сульфид свинца, который обнару15 живается при микроскопировании. Места его отложения отражают локализацию активности внутриклеточной экзонуклеазы (фосфодиэстеразы) II.

Способ определения внутриклеточной локализации фосфодиэстеразы II путем фиксации объекта в парах формалина, инкубации, про25 мывки, обработки сульфидом аммония, сушки и микроскопирования, огличаюитийся тем, что в качестве субстрата фермента в инкубационную среду вносят витамин В1q