Способ получения антибиотика — гликозида вариамицина
3096 0I
О П И СА Н И Е
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
М. Кл. С 07с 109i00
Заявлено 04.VII I.1969 (№ 1355862/23-4) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 15.Ч.1972. Бюллетень № 16
Дата опубликования описания 15Х1.1972
Комитет по делам изобретеиий и открытий при Совете Мииистров
СССР
УДК 547.594.3 (О88.8) Авторы изобретения
Ю. В. Жданович, Г. Б. Локшин, А. Д. Кузовков, С. М. Рудая и H. К. Соловьева
Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков
Заявитель
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА—
ГЛ И КОЗ ИДА ВАР ИАМ И ЦИ НА
Изобретение относится к получению новых антибиотиков.
Предлагаемый способ получения нового антибиотика — гликозида вариамицина заключается в том, что культуру Actinomyccs
olivovariabilis sp. nov. выращивают на среде, содержащей соевую муку (2% ), крахмал (2%), глюкозу (2%), NaCI (05%), СаСОз (0,5%), (NH4) SO4 (0,4%) и К2НРО4 (0,04%), продукт экстрагируют органическим растворителем при рН 2 — 4, например этилацетатом, осаждают его органическим растворителем, например гексаном, методом хроматографии на силикагеле и целевой продукт выделяют обычным способом.
П р и мер 1. Процесс глубинного биосинтез а антибиотика осуществляют культивированием Actinomyces olivovariabilis sp, nov. npu
26 — 28 С на среде следующего состава, %: соевая мука 2, крахмал 2, глюкоза 2, NaCl 0,5, СаСОз 0,5, (NH4)2SO4 0,4 и К НР04 0,04 в аппаратах емкостью 100 л. Длительность процесса ферментации 130 — 140 час. Мицелий культуры отфильтровывают и 40 л нативного раствора подкисляют 10 -ной соляной кислотой до рН 2 — 2,5 (по потенциометру).
Экстракцию ведут трижды этилацетатом (15, 10 и 7 л). Объединенные этилацетатные экстракты промывают водой от избытка кислоты (рН водной промывки -5) и упаривают в вакууме до 0,1 первоначального объема.
Концентрат экстрагируют трижды 5%-ным водным раствором бикарбоната натрия (1, 0,5 и 0,3 л). Объединенный содовый раствор подкисляют 10%-ной соляной кислотой до рН
2 — 2,5 (потенциометрически), после чего экстрагируют трижды этилацетатом (0,4 л и
2)(0,2 л).
Объединенный этилацетатный экстракт промывают водой, сушат над Na2SO.;, упариваюг и осаждают антибиотик десятикратным по объему количеством гексана. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают гексаном и сушат.
0,5 г неочищенного вариамицина, растворенного в смеси хлороформ-метанол (9: 1), вносят в колонку (15+700), заполненную 30 г силикагеля, не содержащего ионов железа.
Проявление и элюцию ведут той жс смесью.
20 Анализ полученных фракций проводят методом тонкослойной хроматографии в той же системе растворителей.
Фракции, содержащие варпамицин, ооъединяют, упаривают в вакууме досуха, растворя25 ют в небольшом объеме этилацетата и наносят на пластинки с силикагелем, После высушивания хроматографируют в описанной выше системе растворителей.
Из зоны с Rf 0,55 — 0,6 элюцией метанолом
30 с последующнм концентрированием в вакууме
309601
Составитель Л. Кушнир
Редактор Т. Пилипенко Техред 3. Тараненко Корректор О. Волкова
Заказ 1689/1 Изд. Ме 731 Тираж 448 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Я-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 и переосаждением из этилацетата гексаном получают хроматографически чистый вариамицин. Антибиотик имеет брутто-формулу
С52НтвОз4 и выделен в виде желтого аморфного порошка, легко растворимого в спиртах (МеОН, EtOH) и сложных эфирах (EtOAC), но плохо растворимого в воде, с т. пл. 162—
165 С (с разл.).
Найдено, /о. С 57,90; Н 7,02.
С52Н76024, Вычислено, %. С 57,56; Н 7,02.
Эквивалентный вес, определенный титрованием 0,1 н. раствором NaOH в среде метанолбензол, 1073, выч. для СззНтаОз4 1084, (а)р о
49+2 С (с 0,5 EtOH) Хмеон 230 280 317 330 (плечо), 412 ммк, Е, " см 1740, 3800, 595, 800 (Уф-спектр снят на спектрофотометре СФ-4А).
v-вазелинового масла 3400 — 3450, 1720, 1635, 1580, 1520, 1180, 1070, 1010, 910, 840 см- (ИК-спектр снят на спектрофотометре UR-10, Leiss).
Пр и мер 2. Вариамицин получают до стадии хроматографической очистки по примеру 1. Далее 0,5 г неочищенного антибиотика, растворенного в смеси бензол-ацетон (1: 1), вносят в колонку (15р, 700), заполненную 30 г силикагеля марки «водная кремневая кисло5 та». Проявление и элюацию ведут той же смесью. Затем антибиотик очищают, как описано в примере 1.
Предмет изобретения
10 Способ получения антибиотика — гликозида вариамицина, изомера митрамицина, состава
СззНтзОз4, состоящего из агликона хромомицинона и остатков трех дезоксисахаров, два из которых идентичны олиозе и оливозе, отличаю15 и ийся тем, что, культуру Actinomyces olivovaribilis sp. nov. выращивают на среде, содержащей основные источники углерода, азота и минеральные соли, продукт экстрагируют при рН 2 — 4 органическим растворителем, напри20 мер этилацетатом, осаждают его органическим растворителем, например гексаном, очишают методом хроматографии на силикагеле, и целевой продукт выделяют обычным способом.
