Патент ссср 306121
306121
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСМОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства ¹
Заявлено 29.Xll.1969 (№ 1391053/23-4) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 11.VI.1971. Бюллетень № 19
З,ата опубликования описания 2ХП1.1971
Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
Авторы изобретения
Заявитель
К. Н. Габинская, В. Ф. Шнер, В. М. Рыжкова и H. H. Суворов
Всесоюзный научно-исследовательский химико-фармацевтический институт имени Серго Орджоникидзе
СПОСОБ ПОЛУЧЕН ИЯ 11а-ОКСИ-16а-МЕТИЛ ПРО ГЕСТЕРОНА
Изобретение относится к способам получения полупродуктов, которые используются в медицинской промышленности для синтез а высокоактивных 16а-метилкортикостероидов.
Известен способ получения 11а-окси-16о;-метилпрогестерона путем гидроксилирования
16а-метилпрогестерона грибом Rhizopus nigricans АТСС-6227В при использовании питательной среды, содержащей кукурузный экстракт и глюкозу. Недостатком такого способа является применение кукурузного экстракта, имеющего сложный и нестандартный состав, что приводит к колеблющимся выходам целевого продукта и затрудняет выделение трансформированных стероидов.
С целью устранения указанных недостатков предложено процесс осуществлять при помощи отечественного штамма Rhizopus nigricans
ВНИХФИ-7 на синтетической среде, состоящей из источника углерода, например глюкозы, лимонной, яблочной, фумаровой кислот, источника азота, например аммония азотнокислого, янтарнокислого, фосфорнокислого, калия фосфорнокислого и магния сернокислого, и целевой продукт выделяют известными приемами с выходом 80%.
Пример 1. Культуру Rhizopus nigricans
ВНИХФИ-7 поддерживают на сусло-агаре.
B колбы на 250 мл со 100 мл среды следующего состава (в /o): глюкоза 1, аммоний азотнокислый 0,17, калий фосфорнокислый однозамещенный 0,3, магний сернокислый 0,1, рН
5,0 вносят 2 мл водной суспензии спор. Выращивание мицелия и стадию трансформации проводят на качалке при 28 С и интенсивности аэрации 0,2 г О,, л/час. Через 24 час мицелпй отфильтровывают от среды, промывают водой и переносят в 0,5%-ный раствор глюкозы (рН 5,0). Затем вносят 40 лег 16а-метил10 прогестерона, растворенного в 1 лл ацетона.
Опыт снимают через 48 час ферментацип. Определение 11а-окси-16а-метилпрогестерона проводят методом хроматографии на бумаге.
Стероиды дв",æ äû экстрагируloT из 10 лтл
15 культуральной жидкости 20 лл хлороформа.
Экстракт концентрируют и разгоняют в системе гептан-метанол-этилацетат-вода (2,5:
:2,5:4:1). Количественное определение проводят спектрофотометрически на СФ-4. Выход
20 11а-окси-16а-метплпрогестерона 40%, 25% исходного 16а-метилпрогестерона остается пеnpopear npoÂaÂønë1 в виде кристаллов на дне колбы, 150 0 исходного стероида превращается в диоксисоединение и 20% исходного стеро25 ида находится в растворенном виде в культуральной жидкости.
Пример 2. 40 яг 16а-метилпрогестерона растворяют в 2 лл ацетона при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход
30 11а-окси-16а-метилпрогестерона 71%.
306121
Предмет изобретения
Составитель Л. Голубовская
Редактор 3. Н. Горбунова Техред A. А. Камышникова Корректор Н. Рождественская
Заказ 2159/15 Изд. г Гз 886 Тираж 473 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2
Пример 3. 40 лгг 16о.-метилпрогестерона растворяют в 3 лгл ацетона при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход
I i a-окси-16а-метилпрогестерона 76о/о.
Пример 4. 40 лг 16сс-метилпрогестерона растворяют в 5 мл ацетона при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход
11а-окси-16сг-метилпрогестерона 12о/о.
Пример 5. 40 нг 16а-метилпрогестерона растворяют в 1 лл этанола при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход
11а-окси-16а-метилпрогестерона 66%.
Пример 6. 40 мг 16а-метилпрогестерона растворяют в 2 мл этанола при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход 15
11а-окси-16а-метилпрогестерона 73 /о.
Пример 7. 40 мг 16а-метилпрогестерона растворяют в 3 мл этанола при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход
11сс-окси-16а-метилпрогестерона 80о/о. 20
Пример 8. 40 мг 16а-метилпрогестерона растворяют в 5 мл этанола при прочих условиях таких же, как в примере 1. Трансформация не идет.
Пр имер 9. 1,4 г/л аммония сернокислого 25 и 40 лг 16а-метилпрогестерона растворяют в
2 м г этанола при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход 11а-окси-16а-метилпрогестерона 65%.
Пример 10. 1,4 г/л аммония фосфорно- 30 кислого и 40 мг 16а-метилпрогестерона растворяют в 2 м.г этанола при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход 11сг-окси16а-метилпрогестерона 63 /о.
Пр и мер 11. 2,5 г/л аммония янтарнокис- 85 лого и 40 м г 16а-метилпрогестерона растворяют в 2 игл этанола при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход 11а-окси-16х-метилпрогестерона 69 о/о.
Пример 12. 10 г/л фумаровой кислоты, 40
2,5 г/л аммония янтарнокислого и 40 лг
16с.-метилпрогестерона растворяют в 2 1гл этанола при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход 11а-окси-16сс-метилпрогестерона 77%. 45
Пример 13. 10 г/ г яблочной кислоты, 2,5 г/л аммония янтарнокислого и 40 лгг
16а-метилпрогестерона растворяют в 2 игл этанола при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход 11с.-окси-16х-метилпрогестерона 75%, Пр и м е р 14. 10 г/г лимонной кислоты, 2,5 г/л аммония янтарнокислого ц 40 угг
16а-метилпрогестерона растворяют в 2 мл этанола при прочих условиях таких же, как в примере 1. Выход 11сг-окси-16а-метилпрогестерона 70%.
Пример 15. В колбы на 750 мл с 200 лг,г среды, такой же как в примере 1, вносят 4 игл водной суспензии спор Rhizopus rligricans
ВНИХФИ-7. Выращивание мицелия в условиях примера 1. Затем 2 л мицелия, выросшего в течение 24 час, переносят в стеклянный ферментер на 20 л, добавляют 6 г стерильной воды, устанавливают рН 5,0 и вносят 3 г 16с метилпрогестерона, растворенного в 150 лгл этанола. Ферментацию проводят в течение 48 час при аэрации 0,4 г О,/л/час. 1(ультуральную массу извлекают хлороформом(1 раз — 4 л и
2 раза по 2 г). Затем из экстракта упаривагот растворитель, остаток (5,16 г) растворяют в бензоле и помещают на колонку с 400 г окиси алюминия (II степень активности, обработана
2,5 г ледяной уксусной кислоты) . Злюируют бензолом, затем хлороформом. Из элюата упаривают в вакууме растворитель и получают 2,43 г (77,5%) 11а-оксп-16и-метилпрогестерона, т. пл. 159 — 161 С (из разбавленного диметилформамида) .
Способ получения 11а-окси-16я-метилпрогестерона путем микробиологического гидроксилирования 16о.-метилпрогестерона, отличаюгчийся тем, что, с целью стандартизации процесса и повышения выхода продукта, процесс осуществляют при помощи штамма RhlzopUs г11ртгсапз ВНИХФИ-7 на синтетической среде.
СОСтОЯЩЕй ИЗ ЦСтОгнШКа УГЛЕРОДа и ИСТО lника азота, кализ фосфорнокислого и магния сернокцслого, и целевой продукт выделяют обы гными приемами.
